一种理气舒心片HPLC特征图谱的构建方法技术

理气舒心片特征图谱的构建方法，包括以下步骤：(1) 参照物溶液的制备：取柚皮苷精密称定，加甲醇制成每的溶液，(2) 供试品溶液的制备：取理气舒心片研细，精密称定，精密加甲醇超声处理补足减失甲醇，滤过；(3) 色谱条件设定；(4) 测定：精密吸取参照物溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到理气舒心片特征图谱。本发明专利技术所建立的方法，能比较全面的反映所含化学成分的种类和数量，能有效表征其质量，有利于全面控制产品质量，克服了原质量控制方法的片面性，是质量控质方法的有效补充。中药特征图谱技术是一种多指标的质量控制模式，能够全面、综合地反映和控制中药质量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药领域，涉及一种中药的质量检测方法。
技术介绍
中成药理气舒心片由当归、沉香、茯苓、木香、香附(醋制)、姜黄、莪术(醋制)、蒲黄、佛手、五灵脂、陈皮、枳实(炒)、青皮(醋制)、枳壳(炒)、麦芽(炒)、香橼、三棱(醋制)、丹参等18味中草药组成。本品主要功能为解肝郁，行气滞，祛胸痹。用于气滞血瘀症冠心病，心绞痛，心律不齐，气短腹胀，胸闷心悸。目前所执行标准收载于中药部颁标准，标准编号：WS3-B-0827-91，标准中无薄层鉴别及含量测定等质量控制项，不利于有效监控药品的质量和疗效。为提高理气舒心片药品质量，前期已经对全方进行质量控制方法研究，但因中药复方制剂药味多，成分复杂相互干扰不易有效检测等特点，方中只有几中药味能建立起专属性强的定性定量检测方法，不能全面监控产品质量，目前还没查到有关理气舒心片的质量研究和标准提升相关文献资料。中药复方是中医临床用药的主要形式，其质量是临床疗效的关键。如何建立科学合理的、体现中药复方特点的质量控制方法就显得尤为重要，而中药复方质量控制方法一直是中药科研领域热点研究方向之一。如何科学合理选定质量控制的特征有效指标性成分，对中药复方进行有效的质量控制，是建立中药复方质量控制方法的关键所在。因此，本专利技术中我们对理气舒心片进行了特征图谱试验研究，建立了特征图谱测定方法，并对建立方法进行了重复性、精密度等方法学验证试验，结果表明方法稳定可行。现行标准不利于有效控制药品的质量和疗效，目前还没查到有关理气舒心片的质量研究和标准提升相关文献资料。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供理气舒心片HPLC特征图谱的构建方法，包括以下步骤：(1)参照物溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含100～300μg的溶液，即得。(2)供试品溶液的制备：取理气舒心片研细，取约1～3g，精密称定，精密加入60～80％的甲醇12.5～50ml，称定重量，超声处理10～30分钟，放冷，用60～80％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；(3)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液3→70∶97→30的梯度混合溶液；紫外检测波长为286nm；流速为1.0ml/min；(4)测定：精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到理气舒心片特征图谱。(5)方法学考察精密度试验：取理气舒心片，按步骤(2)方法制成供试品溶液，连续进样5次，依法检测。结果，5次测定特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值为0～0.11％，表明仪器精密度良好。稳定性试验：取理气舒心片，按步骤(2)方法制成供试品溶液，分别在0、4、8、12小时依法进行检测。结果：4次测定特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值为0～0.62％，表明供试品溶液在12小时之间稳定。重复性试验：取同一批理气舒心片，按步骤(2)方法制备6份供试品溶液，依法测定。结果，6次测定特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值为0～0.51％，表明方法的重复性较好。优选地，步骤(1)所述参照物溶液的浓度为每1ml甲醇含200μg对照品。优选地，步骤(2)所述供试品溶液的制备步骤如下：取理气舒心片研细，取约2g，精密称定，精密加入70％的甲醇25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，用70％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；优选地，步骤(3)所述流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液3→70∶97→30的梯度混合溶液。在一个优选的实施方案中，理气舒心片流动相洗脱梯度如表1所示：表1理气舒心片特征图谱流动相梯度时间(分钟)乙腈(％)0.1％磷酸溶液(％)0～353→2597→7535～4025→3075→7040～5530→7070→3055～70703070～7570→330→97本专利技术的另一个目的是提供理气舒心片的HPLC对照特征图谱的构建方法，按照前述方法构建10批理气舒心片HPLC特征图谱，采用中药色谱指纹图谱相似性评价系统软件生成由10个共有峰构成的理气舒心片HPLC对照特征图谱，共有峰中第5号峰为柚皮苷峰，第6号峰为橙皮苷峰，第7号峰为新橙皮苷峰，第8号峰为丹酚酸B峰。在对照特征图谱中，以柚皮苷峰为参照峰S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，
所述相对保留时间在规定值的±5％之内，所述规定值分别为：0.22-峰1、0.28-峰2、0.66-峰3、0.96-峰4、1.00-峰5、1.03-峰6、1.07-峰7、1.20-峰8、1.58-峰9、1.64-峰10。取理气舒心片样品，按上述同法操作，得到理气舒心片样品特征图谱，采用中药色谱指纹图谱相似性评价系统软件对理气舒心片的对照物征图谱和样品指纹图谱进行分析，相似度大于0.90为合格产品。本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术的质量检测方法能有效地监控理气舒心片的质量，保证其质量的稳定、可控。具有方法简便，精密度高、重现性好等优点，能有效表征理气舒心片中特征性成分，有利于监控产品的质量。(2)本专利技术的方法以柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷为对照品，建立的理气舒心片HPLC对照特征图谱注重各个特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征有利于全面监控产品的质量，为药品的质量检测提供可靠的依据。(3)本专利技术的最佳紫外吸收波长为286nm。采用本专利技术中方法用DAD检测器对理气舒心片进行测定，根据三维扫描图中所有色谱峰出现最大吸收的检测波长结果分别调取各波长下色谱图，当检测波长为286时，特征峰数目较多，各峰面积较高且各特征峰之间分离效果也最好。本专利技术所建立的方法，能比较全面的反映所含化学成分的种类和数量，能有效表征其质量，有利于全面控制产品质量，克服了原质量控制方法的片面性，是质量控质方法的有效补充。中药特征图谱技术是一种多指标的质量控制模式，能够全面、综合地反映和控制中药质量，值得推广并应用。附图说明图1为理气舒心片HPLC特征图谱；图2为理气舒心片的10批次原始特征图谱；图3为理气舒心片的对照特征图谱。具体实施方式实施例1构建理气舒心片的HPLC特征图谱1.仪器、试药1.1仪器：安捷伦1200高效液相色谱仪；戴安双三元高效液相色谱仪；MS205DU型分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(5μm，4.6×250mm)。1.2试药：柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品、丹酚酸B对照品(购于国
食品药品检定研究院)。甲醇为分析纯，乙腈、磷酸均为色谱纯，水为纯化水。2.方法2.1参照物溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含200μg的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备：取理气舒心片研细，取约2g，精密称定，精密加入70％的甲醇25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，用70％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；2.3色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液按表1中规定梯度进行洗脱；紫外检测波长为286nm；流速为1.0ml/min；理论板数按柚皮苷峰计算应不低于100000。2.4测定：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，本文档来自技高网...

【技术保护点】
理气舒心片特征图谱的构建方法，包括以下步骤：(1)参照物溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含100～300μg的溶液，即得。(2)供试品溶液的制备：取理气舒心片研细，取约1～3g，精密称定，精密加入60～80％的甲醇12.5～50ml，称定重量，超声处理10～30分钟，放冷，用60～80％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；(3)色谱条件：色谱柱为Agilent ZORBAX SB‑C18色谱柱；流动相为A相‑B相3→70∶97→30的梯度混合溶液，A相为乙腈，B相为0.1％磷酸溶液；紫外检测波长为240～320nm；流速为0.5～1.5ml/min；柱温为25～45℃。(4)测定：精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μl，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到理气舒心片特征图谱。

【技术特征摘要】
1.理气舒心片特征图谱的构建方法，包括以下步骤：(1)参照物溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含100～300μg的溶液，即得。(2)供试品溶液的制备：取理气舒心片研细，取约1～3g，精密称定，精密加入60～80％的甲醇12.5～50ml，称定重量，超声处理10～30分钟，放冷，用60～80％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；(3)色谱条件：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱；流动相为A相-B相3→70∶97→30的梯度混合溶液，A相为乙腈，B相为0.1％磷酸溶液；紫外检测波长为240～320nm；流速为0.5～1.5ml/min；柱温为25～45℃。(4)测定：精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μl，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到理气舒心片特征图谱。2.根据权利要求1所述的理气舒心片特征图谱的构建方法，其特征是：所述供试品溶液的制备步骤如下：取理气舒心片研细，取约2g，精密称定，精密加入70％的甲醇25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，用70％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。3.根据权利要求4所述理气舒心片特征图谱测定方法，其特征是：梯度选脱时流动相比例为：0～35min，A相：3～25％、B相：97～75％；35～4...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴萍，白冰，郭文英，于艳辉，唐晓桐，徐建，高嵩，
申请(专利权)人：吉林修正药业新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22