伊血安颗粒的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种伊血安颗粒的检测方法，以原儿茶酸为参照物，采用高效液相色谱进行梯度洗脱获得了壮药滇桂艾纳香药材共有模式的指纹图谱。指纹图谱共有色谱峰21个，它能充分反应伊血安颗粒的化学成分，信息量丰富，方法精密度、重现性和稳定性好，对伊血安颗粒的质量控制和临床疗效具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物检测领域，特别是一种伊血安颗粒的质量控制方法。
技术介绍
伊血安颗粒是一种治疗妇科血症的中成药，主要成份为滇桂艾纳香、益母草、延胡索、甘草等，具有活血止血、行气止痛等功效。临床上用于产后恶露不绝，人工流产后子宫出血不净，中医辩证属血瘀证者。为保证伊血安颗粒的质量及临床用药的安全有效，其质量标准的研究和建立日益重要。现行的伊血安颗粒的质量标准，包括滇桂艾纳香、延胡索、甘草的薄层鉴别，用高效液相色谱法测定原儿茶酸的含量，但该方法缺乏对益母草的鉴别，对延胡索、甘草的测定也仅限于定性测量。
技术实现思路
本专利技术提供了一种伊血安颗粒的质量控制方法，包含对滇桂艾纳香、益母草的薄层鉴别方法，以及伊血安颗粒的指纹图谱，为伊血安颗粒的质量控制提供了重要参考。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种伊血安颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：(1)以原儿茶酸和原儿茶醛为对照，以氯仿、乙酸乙酯、甲酸混合溶液为展开剂鉴别伊血安颗粒中的滇桂艾纳香成分；(2)以盐酸水苏碱为对照，以丙酮、乙酸乙酯、盐酸混合溶液为展开剂鉴别伊血安颗粒中的益母草成分；(3)以原儿茶酸为参照物，用高效液相色谱检测伊血安颗粒提取液，获得伊血安颗粒的指纹图谱；其中，伊血安颗粒提取液的提取工艺：取伊血安颗粒，加水溶解，加稀盐酸调节pH，搅匀，静置，滤过，加水饱和正丁醇萃取3～6次，分取出正丁醇提取液，合并正丁醇提取液，静置，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇溶解，离心，取上清液，得伊血安颗粒提取液。调节pH的稀盐酸是质量分数为9.5％～10.5％的盐酸。进一步的，所述步骤(1)的具体操作方法为：(11)滇桂艾纳香薄层鉴别供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加水，使伊血安颗粒溶解，加稀盐酸，搅拌均匀，滤过，加乙醚萃取2～3次，获得乙醚提取液，合并
乙醚提取液，加水洗涤2次后，弃去水液，分取乙醚提取液，蒸干，残渣加甲醇使之溶解，作为滇桂艾纳香薄层鉴别供试品溶液；其中，稀盐酸是质量分数为9.5％～10.5％的盐酸；(12)原儿茶酸对照品溶液：原儿茶酸对照品加甲醇制成原儿茶酸对照品溶液；(13)原儿茶醛对照品溶液：原儿茶醛对照品加甲醇制成原儿茶醛对照品溶液；(14)取上述滇桂艾纳香薄层鉴别供试品溶液、原儿茶酸对照品溶液、原儿茶醛对照品溶液点于同一硅胶薄层板上，以体积比为6:3:5的氯仿、乙酸乙酯、甲酸混合溶液为展开剂展开，取出，晾干，在紫外灯下检视。进一步的，所述步骤(2)的具体操作方法为：(21)益母草薄层鉴别供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加无水乙醇，振摇提取，滤过，所获得的滤液蒸干，残渣加入无水乙醇溶解，作为益母草薄层鉴别供试品溶液；(22)盐酸水苏碱对照品溶液：盐酸水苏碱对照品加无水乙醇制成盐酸水苏碱对照品溶液；(23)取上述益母草薄层鉴别供试品溶液、盐酸水苏碱对照品溶液，点于同一硅胶薄层板上，以体积比为6:6:1的丙酮、乙酸乙酯、盐酸混合溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，加热使斑点显色清晰，益母草薄层鉴别供试品溶液色谱在与盐酸水苏碱对照品溶液色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。进一步的，所述步骤(3)的具体操作方法为：(31)参照物溶液的准备：原儿茶酸标准品，加入甲醇定容，制得参照物溶液。(32)伊血安颗粒提取液的准备；(33)高效液相色谱仪的色谱条件：流动相：甲醇-0.1％冰乙酸；梯度洗脱程序：时间梯度0min→11min→16min→29min→30min→35min→45min→55min→70min→95min；对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相B0.1％冰乙酸组成，流动相A的体积百分数梯度5％→16％→17％→30％→34％→34％→35％→45％→45％→70％，流动相B的体积百分数梯度95％→84％→83％→70％→66％→66％→65％→55％→55％→30％；紫外检测波长：256nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。(34)测定：吸取伊血安颗粒提取液注入高效液相色谱仪，按照步骤(33)的色谱条件测定，得到指纹图谱。优选的，所述伊血安颗粒提取液提取的具体操作方法为：称取伊血安颗粒3～8g，加水50mL溶解，加稀盐酸0.2～0.4mL，搅匀，静置15～30min，滤过，加水饱和正丁醇萃取5～6次，每次15～20mL，分取正丁醇提取液，合并，静置1～1.5h，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇4～6mL，离心，取上清液，得伊血安颗粒提取液。更优选的，所述伊血安颗粒提取液提取的具体操作方法为：称取伊血安颗粒5g，加水50mL溶解，加稀盐酸0.3mL，搅匀，静置20min，滤过，加水饱和正丁醇萃取5次，每次15mL，分取正丁醇提取液，合并，静置1h，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇5mL，离心，取上清液，得伊血安颗粒提取液。进一步的，所述指纹图谱共有色谱峰21个，其平均保留时间分别为：1号峰3.234min、2号峰5.962min、3号峰11.023min、4号峰15.353min、5号峰16.521min、6号峰24.498min、7号峰27.158min、8号峰30.877min、9号峰32.29min、10号峰34.752min、11号峰36.182min、12号峰37.968min、13号峰38.708min、14号峰56.509min、15号峰58.989min、16号峰59.670min、17号峰66.895min、18号峰68.358min、19号峰69.319min、20号峰85.217min、21号峰91.016min。更进一步的，所述伊血安颗粒的组分包括滇桂艾纳香、益母草、延胡索和甘草，其中1号峰～21号峰来源于滇桂艾纳香，9号峰来源于益母草，10、11号峰来源于延胡索，6、14、15、16号峰来源于甘草。优选的，所述步骤(33)中，色谱柱为Phenomenex Gemini C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，保护柱为Phenomenex C18(4×3.0mm)。优选的，所述步骤(33)中，理论塔板数以原儿茶酸峰计，不低于5000。以上所述的伊血安颗粒的质量控制方法，优化了滇桂艾纳香的薄层色谱鉴别方法，补充了益母草的薄层色谱鉴别方法，同时确定了伊血安颗粒的指纹图谱建立方法。伊血安颗粒的指纹图谱建立方法中，以原儿茶酸为参照物，通过高效液相色谱仪，采用甲醇-0.1％冰乙酸为流动相进行梯度洗脱，获得了指纹图谱，指纹图谱中共有色谱
峰21个，其中21个共有峰来源于滇桂艾纳香，1个共有峰来源于益母草，2个共有峰来源于延胡索，4个共有峰来源于甘草，能充分反应伊血安颗粒中四种原料药的化学成分，可用于整体评价四种原料药的质量和鉴别四种原料药的优劣，为控制伊血安颗粒的质量提供了有力的理论依据。本专利技术采用薄层色谱鉴别和指纹图谱相结合的方法，对伊血安颗粒进行快速分析，方法重现性、稳定性好，对伊血安颗粒的质量控制和临床疗效具有重要意义。附图说明图1是实施例1中采用Welchrom C18柱(4.6mm×250mm，5μm)得到的色谱图；图2是实施例1中采用Hypersil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)得到的色谱图；图3是实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种伊血安颗粒的质量控制方法，其特征在于包括以下步骤：(1)以原儿茶酸和原儿茶醛为对照，以氯仿、乙酸乙酯、甲酸混合溶液为展开剂鉴别伊血安颗粒中的滇桂艾纳香成分；(2)以盐酸水苏碱为对照，以丙酮、乙酸乙酯、盐酸混合溶液为展开剂鉴别伊血安颗粒中的益母草成分；(3)以原儿茶酸为参照物，用高效液相色谱检测伊血安颗粒提取液，获得伊血安颗粒的指纹图谱；其中，伊血安颗粒提取液的提取工艺：取伊血安颗粒，加水溶解，加稀盐酸调节pH，搅匀，静置，滤过，加水饱和正丁醇萃取3～6次，分取出正丁醇提取液，合并正丁醇提取液，静置，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇溶解，离心，取上清液，得伊血安颗粒提取液。

【技术特征摘要】
1.一种伊血安颗粒的质量控制方法，其特征在于包括以下步骤：(1)以原儿茶酸和原儿茶醛为对照，以氯仿、乙酸乙酯、甲酸混合溶液为展开剂鉴别伊血安颗粒中的滇桂艾纳香成分；(2)以盐酸水苏碱为对照，以丙酮、乙酸乙酯、盐酸混合溶液为展开剂鉴别伊血安颗粒中的益母草成分；(3)以原儿茶酸为参照物，用高效液相色谱检测伊血安颗粒提取液，获得伊血安颗粒的指纹图谱；其中，伊血安颗粒提取液的提取工艺：取伊血安颗粒，加水溶解，加稀盐酸调节pH，搅匀，静置，滤过，加水饱和正丁醇萃取3～6次，分取出正丁醇提取液，合并正丁醇提取液，静置，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇溶解，离心，取上清液，得伊血安颗粒提取液。2.根据权利要求1所述伊血安颗粒的质量控制方法，其特征在于：所述步骤(1)的具体操作方法为：(11)滇桂艾纳香薄层鉴别供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加水，使伊血安颗粒溶解，加稀盐酸，搅拌均匀，滤过，加乙醚萃取2～3次，获得乙醚提取液，合并乙醚提取液，加水洗涤2次后，弃去水液，分取乙醚提取液，蒸干，残渣加甲醇使之溶解，作为滇桂艾纳香薄层鉴别供试品溶液；(12)原儿茶酸对照品溶液：原儿茶酸对照品加甲醇制成原儿茶酸对照品溶液；(13)原儿茶醛对照品溶液：原儿茶醛对照品加甲醇制成原儿茶醛对照品溶液；(14)取上述滇桂艾纳香薄层鉴别供试品溶液、原儿茶酸对照品溶液、原儿茶醛对照品溶液点于同一硅胶薄层板上，以体积比为6:3:5的氯仿、乙酸乙酯、甲酸混合溶液为展开剂展开，取出，晾干，在紫外灯下检视。3.根据权利要求1所述伊血安颗粒的质量控制方法，其特征在于：所述步骤(2)的具体操作方法为：(21)益母草薄层鉴别供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加无水乙醇，振摇提取，滤过，所获得的滤液蒸干，残渣加入无水乙醇溶解，作为益母草薄层鉴别供试品溶液；(22)盐酸水苏碱对照品溶液：盐酸水苏碱对照品加无水乙醇制成盐酸水苏碱对照品溶液；(23)取上述益母草薄层鉴别供试品溶液、盐酸水苏碱对照品溶液、点于同一硅胶薄层板上，以体积比为6:6:1的丙酮、乙酸乙酯、盐酸混合溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，加热使斑点显色清晰，益母草薄层鉴别供试品溶液色谱在与盐酸水苏碱对照
\t品溶液色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。4.根据权利要求1所述伊血安颗粒的质量控制方法，其特征在于：所述步骤(3)的具体操作方法为：(31)参照物溶液的准备：原儿茶酸标准品，加入甲醇定容，制得参照物溶液。(32)伊血安颗粒提取液的准备；(33)高效液相色谱仪的色谱条件：流动相：甲醇-0.1％冰乙酸；梯度洗脱程序：时间梯度0min→11min→16min→29min→30min→35min→45min→55min→70min→95min；对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相B0.1％冰乙酸组成，流动...

【专利技术属性】
技术研发人员：慕丽群，李修善，毛金玲，农常东，
申请(专利权)人：广西万寿堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45