能够溶解带有膜锚定型免疫球蛋白A的B淋巴球与降低免疫球蛋白A生产的抗人类膜锚定型免疫球蛋白A抗体制造技术

技术编号:13834666 阅读:228 留言:0更新日期:2016-10-15 13:28
本文所公开的是一种抗migis‑α抗体专一于人类mα链上的migis‑α,可以结合B淋巴细胞上的mIgA,导致表达mIgA的B淋巴细胞溶解,并降低分泌IgA的B淋巴细胞产生IgA。进一步公开的是一种药物组合物,包含抗migis‑α抗体和医药上可接受的载体。进一步公开的方法是用在人受试者体内溶解表达mIgA的B淋巴细胞与减少IgA产生,藉由使用专一于人类mα链的抗体,可以结合B淋巴细胞上mIgA的migis‑α,造成表达mIgA的B淋巴细胞溶解,并降低分泌IgA的B淋巴细胞产生IgA。本文公开一种方法用来治疗受试者的疾病,包括施用抗体其专一于人类mα链的migis‑α,可以结合B淋巴细胞上的mIgA,因此溶解受试者免疫系统表达mIgA的B淋巴细胞与减少产生IgA抗体。此外,本发明专利技术公开使用所述抗migis‑α抗体或片段来治疗受试者的疾病,它能受惠于在免疫系统中清除表达mIgA的细胞或减少IgA抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的声明此申请要求2013年12月5日提交的美国临时申请号61/912,395,其内容在此通过引用整体并入本文。
这个专利技术与特别是那些能够结合表达人类膜锚定型免疫球蛋白A的B细胞抗体有关。
技术介绍
人类免疫球蛋白A(IgA)有两种类型,分别是IgA1与IgA2,在血清里大部分是IgA1(约80%)。IgA1和IgA2分别包含重链α1与α2。两类都有分泌型与膜结合型的序列,是从同一个RNA衍生出两组mRNA转译而来。mα含有膜型表达序列,大部分血清里的IgA是单体型(约90%),而不是双聚体或是多聚体。分泌型IgA(SIgA)是在外分泌里含量最多的免疫球蛋白,它在黏膜表面作为对抗入侵微生物的体液免疫,并保持膳食抗原在胃肠管道的平衡。表皮层下由局部浆细胞生产的分泌型IgA主要是与J链接合形成双聚体或多聚体,透过与上皮细胞的基底外侧膜聚Ig受体(pIgR)相互作用,在pIgR顶端切割后SIgA通过胞转作用被运入内腔。切割过的pIgR,已知是种分泌成分,可以保护SIgA不被许多在黏膜的细菌蛋白酶分解。估计在肠腔每天大概分泌3到5克的SIgA,可以解释它在调控黏膜免疫系统的主要角色。除了分泌型,IgA以膜锚定形式存在(mIgA),它是藉由RNA剪接将CH3表达序列接了一段膜的表达序列。膜表达序列被转译成膜锚定肽对应于三个不同环境的片段,分别为一个细胞外的肽,也称为mIg的同型特异性(migis-α)片段由26-32个氨基酸组成,一个跨膜区和一个细胞溶质尾段。migis-α片段在五种免疫球蛋白同种型的序列和长度均不同,而它们的跨膜结构域是高度保留的。因此,migis-α段可作为一个抗原区把mIgA与表达mIgA的B细胞作为目标,所得的抗体因此可用于治疗相关的疾病,其可以受益于消除mIgA表达的细胞或是在免疫系统中减少IgA抗体,如IgA淋巴癌,IgA肾病(IgAN),过敏性紫斑症(HSP),乳糜泻等。在IgA1而不是IgA2,膜表达序列有两个剪接受体区而且mα1mRNA的异构物是由替代结合从CH3表达序列供体区对膜表达序列2个受体区的其中一个而来,两个产生的异构物差别在长异构物(mα1L)在migis肽N端有多出6个氨基酸,短异构物长度为26个氨基酸(mα1S)。在表达mIgA1的B细胞中长异构物的表达量大概是短异构物的2倍,研究显示,2个mα1对偶基因可以产生migis-α长与短异构物而且3个mα2对偶基因产生独特的短异构物。早在1990年(美国专利号码5,079,334)migis-α已经被提出当成抗原区用来制备可以结合mIgA的抗体而且能造成表达mIgA的B细胞溶解,没有这样的抗体曾被制备。在我们之前的论文[Hung et al.,Mol.Immunol.48(15-16):1975-1982(2011)],酵素免疫分析法(ELISA)里数个能够强烈的与合成migis-α多肽和含有migis-α重组蛋白结合的抗体被制备了,然而这些抗体,只有一个抗体,以29C11表示,稍微可以结合B细胞上的mIgA,像是表达IgA1的DAKIKI细胞或是有转染mα1链的Daudi细胞。没有数据关于29C11可以藉由细胞凋亡,抗体依赖型细胞毒性或其它机制来引起表达mIgA的B细胞溶解。
技术实现思路
第一个方面,在此公开的实施方案提供抗migis-α抗体或片段其专一于人类mα链的migis-α,可以结合B淋巴细胞上的mIgA,进而造成表达mIgA的B细胞溶解与降低分泌IgA的B细胞产生IgA。在一些实施例中,本文公开其抗migis-α抗体或片段包含以下互补决定区(CDR):(a)CDR-H1序列为SEQ ID NO:17的26-33,(b)CDR-H2序列为SEQ ID NO:17的51-57,(c)CDR-H3序列为SEQ ID NO:17的96-104,(d)CDR-L1序列为SEQ ID NO:18的27-32,(e)CDR-L2序列为SEQ ID NO:18的50-52,(f)CDR-L3序列为SEQ ID NO:18的89-97。在一些实施方案中,抗migis-α抗体或片段包含阐述于SEQ ID NO:17的VH和阐述于SEQ ID NO:18的VL。在具体的实施方案中,抗migis-α抗体为单株抗体8G7。在某些实施方案中,本文公开的抗体或片段是包含或上述抗抗体的F(ab)’2,抗体片段(Fab),可变片段(Fv),单链可变片段(single-chain Fv)。第二方面,在此公开的实施方案提供的医药组合物包含抗migis-α抗体或片段其专一于人类mα链的migis-α,可以结合B淋巴细胞上的mIgA,进而造成表达mIgA的B淋巴细胞溶解与降低分泌IgA的B巴细胞产生IgA和医药上可接受的载体。在某些实施方案中,本文公开的医药组合物是治疗受试者的疾病,它能受惠于在免疫系统中清除表达mIgA的细胞或减少IgA抗体。在某些实施方案中,疾病挑自含有IgA淋巴癌,IgA肾病,过敏性紫斑症(HSP)和乳糜泻的组别。在第三个方面,本文公开的实施方案提供一种方法对于受试者在体外或体内溶解表达mIgA的B淋巴细胞与减少IgA的生成。包括采用抗体或片段其专一于人类mα链的migis-α,可以结合B淋巴细胞上的mIgA,进而造成表达mIgA的B淋巴细胞溶解与减少分泌IgA的B淋巴细胞产生IgA。在第四个方面,本文公开的实施方案提供一种方法用来治疗受试者的疾病,包括施用抗体或片段其专一于人类mα链的migis-α可以结合B淋巴细胞上的mIgA,进而造成受试者免疫系统表达mIgA的B巴细胞溶解与减少IgA抗体。在第五个方面,本文公开的实施方案提供使用抗migis-α抗体与片段用于治疗受试者的疾病,受惠于在免疫系统中清除表达mIgA的细胞或减少IgA抗体。在某些实施方案中,所述疾病挑自含有IgA淋巴癌,IgA肾病(IgAN),过敏性紫斑症(HSP)和乳糜泻的组别。附图说明图1显示了一个老鼠/人类嵌合重组蛋白质包括老鼠α免疫球蛋白的CH2和CH3区域,人类膜结合α链上膜锚定肽的migis-α部分,和取代了组成跨膜肽段的亮氨酸拉链肽,此肽形成二聚体。图2是描绘抗IgA.Fc单株抗体(3C10)和两个抗migis-α单株抗体(8G7和29C11)对人类IgA和含有各种人类膜结合α链,或其它成份的反应性。图3A-3C显示在ELISA中抗migis-α抗体抗原决定基定位。A)图3A指出migis-αL的合成肽部分,有底线的序列是位在IgA CH3区域。B)图3B显示抗migis-α单株抗体与不同migis-αL部位的结合反应性。C)图3C指出抗migis-α单株抗体对migis-αL N端短肽的结合反应性。图4A-4B显示在ELISA测量8G7和29C11结合mα的相对亲和力。A)图4A显示8G7和29C11对mα1.FcL-456S-LZ蛋白的结合强度。B)图4B显示8G7和29C11在与200nM生物素结合的29C11抗体竞争结合FcL-456S-LZ蛋白质的相对能力。图5显示出抗migis-α单株抗体对DAKIKI细胞和表达mα1.Fc的转染Ramos细胞染色数据,灰色部分是同类型IgG的背景值。图6显示8G7单株抗体对8本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种抗migis‑α抗体或片段,其专一于人类mα链的migis‑α,可以结合B淋巴细胞上的mIgA,进而造成表达mIgA的B细胞溶解与/或降低分泌IgA的B细胞产生IgA。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.05 US 61/912,3951.一种抗migis-α抗体或片段,其专一于人类mα链的migis-α,可以结合B淋巴细胞上的mIgA,进而造成表达mIgA的B细胞溶解与/或降低分泌IgA的B细胞产生IgA。2.如权利要求1所述的抗migis-α抗体或片段,其是包含抗migis-α抗体的F(ab)’2、抗体片段(Fab)、可变片段(Fv)或单链可变片段(single-chain Fv)。3.如权利要求1或2所述的抗migis-α抗体或片段,其中抗体或片段含有下列互补决定区的序列(CDRs):(a)CDR-H1序列为SEQ ID NO:17的26-33,(b)CDR-H2序列为SEQ ID NO:17的51-57,(c)CDR-H3序列为SEQ ID NO:17的96-104,(d)CDR-L1序列为SEQ ID NO:18的27-32,(e)CDR-L2序列为SEQ ID NO:18的50-52,(f)CDR-L3序列为SEQ ID NO:18的89-97。4.如权利要求1至3中任一项所述的抗migis-α抗体或片段,其中抗体或片段包含阐述于SEQ ID NO:17的VH和阐述于SEQ ID NO:18的VL。5.如权利要求1至4中任一项所述的抗migis-α抗体或片段,其中抗体是单株抗体8G7。6.如权利要求1至5中任一项所述的抗migis-α抗体或片段,其中抗体或片段是嵌...

【专利技术属性】
技术研发人员:张子文艾尔福·福信·洪多尼克·建胜·卢
申请(专利权)人:免疫功坊股份有限公司
类型:发明
国别省市:中国台湾;71

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