本发明专利技术涉及一种血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽及其应用。该多肽具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；或该多肽具有在SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列基础上取代、缺失、置换、插入和/或添加一个至几个氨基酸的衍生序列。本发明专利技术还提供一种疫苗，包括血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽和佐剂，所述佐剂为gp96蛋白。通过佐剂和血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽的配合具有提高免疫力，显著提高治疗肿瘤效果等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽及其应用。
技术介绍
肺癌是目前国内乃至世界发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。肺癌发病在我国恶性肿瘤中处于首位，长期吸烟的人群肺癌发病率高达2/1000，随着城市雾霾日益加重，肺癌发病已经并将继续呈现高速增长。肺癌常用的治疗方法包括手术治疗、化学治疗、放射治疗、靶向治疗、免疫治疗以及不同治疗方法的联合治疗。近年来，即使肺癌的治疗方法不断创新改进，但治疗效果仍不能令人满意，复发转移几率还是较高。目前世界上倾向于将肺癌粗分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，后者包括除小细胞癌以外的其他上皮癌。小细胞肺癌的生物学行为与其他上皮性癌(鳞癌、腺癌、腺鳞癌、大细胞癌)显著不同，临床上表现为高度恶性，早期即发生广泛的远处转移，对化学治疗和放射治疗较敏感，因而治疗原则也不同于其他上皮癌。目前临床上常见的肺癌病人约80％为包括鳞癌、腺癌等在内的非小细胞肺癌，这些病人确诊时有85％左右是中晚期，约75％的晚期非小细胞肺癌病人失去了手术根治性治疗机会、常规放化疗的临床效果也不甚理想。分子靶向药物治疗是近年新兴的一种治疗手段，因其具有高度选择性地杀死肿瘤细胞而不杀伤或仅极少损伤正常细胞的特点，安全性和耐受性较 好、毒付作用相对较小，许多病人都视其为治疗肺癌的一线生机。分子靶向是指在细胞分子水平上，针对已经明确的致癌位点，来设计相应的治疗药物，药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞。1971年Folkman在《新英格兰医学杂志》中首次提出“肿瘤生长依赖于血管生成”的概念。肿瘤一旦血管化，不仅生长速度加快，而且容易发生转移，如果得不到充足的供血，肿瘤将停止生长，因此针对肿瘤血管生成为靶点的治疗为肿瘤治疗提供了有前景的新途径。血管内皮生长因子(VEGF)属血小板源性生长因子家族的生长因子，刺激血管内皮细胞的有丝分裂和血管的新生。血管内皮生长因子受体(VEGFR)在肺癌的发生、发展及预后方面起重要作用。大量研究结果表明VEGF在许多癌症组织中过量表达，包括肝癌、肺癌、乳腺癌等等。VEGF及其受体在肿瘤的生长和转移中起关键性作用，所以可以通过阻断或干扰VEGF/VEGFR信号通路来控制肿瘤生长。以VEGF/VEGFR为靶标的抗肿瘤药物与传统的肿瘤治疗药物相比有很大的优势。在正常的生理条件下，人血管生成只在创伤愈合和月经周期等生理活动中起作用，所以使用抗血管生成药物治疗肿瘤，对人体毒性作用小；肿瘤的生长和迁移依赖于大量新生血管的生成，以VEGF/VEGFR为靶点可以达到广谱的抗肿瘤效果；与肿瘤细胞不同，血管内皮细胞具有遗传稳定性，所以被认为是理想的治疗靶点，不易产生对血管生成药物的抗性；而且内皮细胞与血液直接接触使药物更加容易到达血管内皮细胞。贝伐珠单抗(Bevacizumab，Avastin)是针对VEGF的单克隆抗体，是抗血管生成治疗的代表药物之一。贝伐单抗是重组的人源化单克隆抗体，包含了人源抗体的结构区和可结合VEGF的鼠源单抗的互补决定区。通过体内、体外检测系统证实IgG1抗体能与人血管内皮生长因子(VEGF)结合并阻断其生物活性。2004年2月26日获得FDA的批准，是美国第一个获得批准上市的抑制肿瘤血管生成的药。目前该药在大肠癌、肺小细胞癌、乳腺 癌等肿瘤中取得了比较好的疗效。由于VEGF可与细胞外基质结合并储存起来，这样使不同组织、时间的VEGF浓度不一，中和VEGF比较困难。相反，VEGFR的数量有限且易被饱和，一些研究者认为抑制VEGFR比阻断VEGF能更有效地抑制VEGF信号传到途径。美国ImClone公司研发了人缘化的抗VEGFR-2的抗体IMC-1C11，它能特异的与VEGFR-2结合。IMC-1C11在体外能抑制人上皮细胞的迁移与增殖，在多种小鼠肿瘤实验中表现出了显著抑制血管生成的能力。ImClone公司还开发了另一种抗VEGFR-2抗体的IMC-1121B，它是完全人缘化的单克隆抗体，也能抑制VEGF对VEGFR-2的激活，现已进入实体肿瘤的I期临床试验。尽管VEGF/VEGFR的靶向药物能抑制肿瘤的生长和转移，延长患者生命，但效果有限。临床试验疗效差可能还与治疗肿瘤的时期选择有关，抗血管生成药物比较适合早期肿瘤患者。晚期肿瘤血管不丰富，处于严重缺氧状态，并有大量的坏死区域，这使得晚期肿瘤依赖血管生成的程度低。此外，在抗体治疗过程中还有许多不良反应如血压升高、血栓形成、出血、蛋白尿和胃肠穿孔等。在使用VEGF/VEGFR做为药靶的抗肿瘤治疗中，还易产生对药物的抗性。因此，有必要针对VEGF/VEGFR设计开发新的药物。研究显示，肿瘤特异性杀伤性T淋巴细胞(Cytolytic T lymphocyte，CTL)在清除肿瘤中起着至关重要的作用。大部分肿瘤患者T细胞反应低下，如何激活CTL免疫反应成为焦点。而CTL表位在CTL活化过程中扮演着关键角色，是诱导特异性CTL克隆性增殖、分化和发挥效应的最重要的激发因素，在机体免疫中发挥着重要的作用。热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)广泛存在于各种生命体及各种细胞的亚细胞结构中。热休克蛋白作为分子伴侣在蛋白质的加工折叠过程中起着至关重要的作用，比如防止蛋白聚集，诱导蛋白聚集体的溶解，帮助多肽的早期折叠，参与蛋白损伤的修复以及损伤蛋白的降解等。根据分子量 的大小，热休克蛋白可以分为HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、Calreticulin、HSP47、HSP40、Small HSPs(sHSPs)等家族。gp96(GRP94)为内质网HSP90家族的代表，与细胞质HSP90高度同源。gp96能够通过促进树突状细胞的成熟而增强其抗原递呈的能力，从而提高获得性免疫应答的水平。其次，gp96通过抗原递呈细胞上的受体进入细胞内，将自身所携带的抗原肽交叉呈递给MHC I类分子，激活CTL发挥细胞杀伤作用。此外，gp96能有效激发天然免疫。gp96是来源于哺乳动物细胞的天然佐剂，可作用于APC及T细胞等其它免疫细胞，促进DC成熟，刺激细胞产生免疫因子IL-6、IL-12、TNF等，从而增强机体天然免疫反应。gp96作为强大的抗原递呈“机器”能够结合细胞内多种抗原肽，并将其递呈给T细胞，从而刺激机体产生强大的细胞免疫，杀死肿瘤细胞。已有实验证实，从肿瘤中获得的gp96-抗原肽复合物能够有效地刺激机体产生抗肿瘤免疫应答。由于胎盘中含有大量的癌胚抗原，将胎盘中的gp96纯化分离后免疫C57BL/6小鼠，也能取得良好的预防和治疗效果。由于组织来源有限，从组织提取的热休克蛋白gp96蛋白产量有限，难以工业化应用，而且组织提取的gp96蛋白结合组织细胞内的抗原多肽，影响其与外源多肽的结合，从而影响疫苗的疗效。此外，受伦理道德因素的制约，从组织提取的gp96难以直接作为药物推广。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽以及其在肿瘤治疗中的应用。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种血管内皮生长因子受体本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽，其特征在于，该多肽具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；或该多肽具有在SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列基础上取代、缺失、置换、插入和/或添加一个至几个氨基酸之后形成的衍生序列。
【技术特征摘要】
1.一种血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽，其特征在于，该多肽具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；或该多肽具有在SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列基础上取代、缺失、置换、插入和/或添加一个至几个氨基酸之后形成的衍生序列。2.一种血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽的编码基因，其特征在于，编码权利要求1所述的血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽。3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体克隆、分泌和/或表达权利要求1所述的血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽。4.一种转化体，其特征在于，包括权利要求3所述的重组载体。5.一种权利要求1所述血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽在肿瘤治疗中的应用。6.一种疫苗，其特征在于，包括权利要求1所述的血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽和佐剂。7.根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于，所述佐剂包括gp96蛋白。8.根据权利要求7所述的疫苗，其特征在于，所述gp96蛋白为采用昆虫细胞表达系统表达分泌型的gp96蛋白。9.根据权利要求8所述的疫苗，其特征在于，所述gp96蛋白通过昆虫杆状病毒感染的昆虫细胞分泌表达。10.根据权利要求7所述的疫苗，其特征在于，所述gp96蛋白和血管内皮生长因子受体的CTL表位多肽的质量比为1：(0.5-10)。11.根据权利要求7-10任一项所述的疫苗，其特征在于，所述gp96蛋白包括SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列和/或所述gp96蛋白的编码基因包括SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列。12.一种权利要求7-11任一项所述gp96蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：利用昆虫细胞分泌表达gp96蛋白，昆虫细胞培养上清依次进行HiTrap Q HP阴离子交换柱和Superdex 200 10/300 GL分子筛...
【专利技术属性】
技术研发人员：孟颂东，王刚，李鑫，
申请(专利权)人：和泓厦门生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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