本发明专利技术涉及预防活动性和潜伏性结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)感染的复活感染的方法，该方法包括给予包含编码Mtb72f融合蛋白的核酸或Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段以及例如佐剂的药物组合物。Mtb72f核酸或融合蛋白可与一种或多种抗结核分枝杆菌感染的有效化疗药联合用药。该方法还能提供缩短抗结核分枝杆菌感染化疗方案的时程。
【技术实现步骤摘要】
本申请是以下申请的分案申请：申请日：2006年4月27日；申请号：200680023551.3(PCT/EP2006/004319)；专利技术名称：同上。专利
本专利技术涉及预防或治疗哺乳动物的结核分枝杆菌感染的复活感染的方法，也涉及缩短抗结核分枝杆菌感染的化疗时程的方法。专利技术背景结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)和其它分枝杆菌感染引起的慢性传染病。它是发展中国家的主要疾病，在世界发达地区也逐渐增加，每年约新增八百万病例，有三百万例死亡。尽管感染可在相当长时期内无症状，但该病最常见的表现为急性肺炎，引起发热及干咳。如不治疗，就会引起严重并发症乃至死亡。虽然结核病通常可通过使用延长抗生素疗法加以控制，但这种治疗方法对预防疾病传播是不够的。感染者可能无症状，但在一段时间内具有传染性。另外，尽管治疗方案的顺应性至关重要，但患者行为难以监控。一些患者没有完成治疗过程，导致无效治疗并产生耐药性。即使完成了整个疗程，但是结核分枝杆菌感染并未从感染者体内根除而是保持仍可复发的潜伏感染状态。为了控制结核病的传播，有效的疫苗接种和准确的早期疾病诊断至关重要。目前，接种活菌是诱导产生保护性免疫的最有效方法。用于该目的的最常见分枝杆菌就是卡介苗(BCG)，是牛分枝杆菌(M.bovis)的减毒株。然而，卡介苗的安全性和有效性常常引发争论，诸如美国等一些国家就不用这种制剂为公众接种。结核病的诊断通常用皮试来完成，包括皮内接触结核菌素PPD(纯化蛋白衍生物)。注射后48-72小时，抗原特异性T细胞反应在注射部位产生可测量的硬结，表示接触分枝杆菌抗原。然而，该试验的敏感性和特异性一直都是个问题，无法将接种卡介苗的个体与感染个体区别开来。尽管已知巨噬细胞是分枝杆菌免疫性的主要效应物，但T细胞却是这种免疫性的主要诱导物。艾滋病患者因耗尽人免疫缺陷病毒(HIV)感染相关CD4+T细胞而频繁发生分枝杆菌感染，这证明T细胞在保护机体免遭分枝杆菌感染中的重要作用。已经知道分支杆菌反应性CD4+T细胞是γ干扰素(IFN-γ)的有效生产者，而已知γ干扰素又可触发小鼠巨噬细胞的抗分枝杆菌反应。尽管IFN-γ在人体内的作用尚不清楚，但研究表明1,25-二羟基-维生素D3，无论是单用还是与IFN-γ或肿瘤坏死因子α联用，都可激活人巨噬细胞抑制结核分枝杆菌感染。而且，已知IFN-γ刺激人体巨噬细胞产生1,25-二羟基-维生素D3。同样，也已知道白介素12(IL-12)在刺激抗结核分枝杆菌感染中的作用。有关结核分枝杆菌感染免疫学的综述参见Chan和Kaufmann,Tuberculosis:Pathogenesis,Protection and Control(Bloom编著,1994)、Tuberculosis(第2版,Rom和Garay编著,2003)和Harrison的Principles of Internal Medicine,第150章,第953-966页(第16版,Braunwald等编著,2005)。对于活动性和潜伏性结核分枝杆菌感染而言，都需要预防复活感染的有效治疗策略。本专利技术即可满足这一目的和其它目的。序列表的描述SEQ ID NO:1：N-端具有6个组氨酸标记的Mtb72f(DNA)。SEQ ID NO:2：N-端具有6个组氨酸标记的Mtb72f(蛋白质)。SEQ ID NO:3：N-端具有2个组氨酸插入的M72(Mtb72f变异体)(DNA)。SEQ ID NO:4：N-端具有2个组氨酸插入的M72(Mtb72f变异体)(蛋白质)。SEQ ID NO:5：N-端没有插入组氨酸的Mtb72f(DNA)。SEQ ID NO:6:N-端没有插入组氨酸的Mtb72f(蛋白质)。专利技术概述本专利技术提供药物组合物，其包含来自结核分枝杆菌复合群菌种的Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段，以及例如一种或多种佐剂(包括AS01B和AS02A)。本专利技术部分基于专利技术人的以下发现：给予Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段、以及例如一种或多种佐剂或者编码Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段的核酸，可预防或治疗活动性或非活动性结核分枝杆菌感染的复活感染。在一个优选实施方案中，将Mtb72f融合蛋白或核酸与一种或多种抗结核分枝杆菌感染的有效化疗药联合用药。一方面，该组合物用于预防或治疗患者的结核病复活的方法，该方法包括给予已感染结核分枝杆菌的哺乳动物免疫学有效量的药物组合物的步骤，该组合物包含来自结核分枝杆菌复合群菌种的Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段以及佐剂，其中Mtb72f融合蛋白诱导抗结核分枝杆菌的免疫应答，因而预防或治疗结核病复活。另一方面，该组合物用于预防患者的结核病复活的方法，该方法包括给予已感染结核分枝杆菌的哺乳动物免疫学有效量的药物组合物的步骤，该组合物包含来自结核分枝杆菌复合群菌种的Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段的编码核酸，其中所表达的Mtb72f融合蛋白诱导抗结核分枝杆菌的免疫应答，因而预防或治疗结核病复活。另一方面，该组合物用于缩短抗结核分枝杆菌感染的化疗时程的方法，该方法包括给予已感染结核分枝杆菌的哺乳动物一种或多种抗结核分枝杆菌感染的有效化疗药和免疫学有效量的药物组合物，该药物组合物包含来自结核分枝杆菌复合群菌种的Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段以及佐剂，其中所述Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段诱导抗结核分枝杆菌的免疫应答，因而可缩短抗结核分枝杆菌感染的化疗时程。通过缩短抗结核分枝杆菌感染的化疗时程，本专利技术方法也能有效增加正在接受抗结核分枝杆菌感染治疗个体的顺应性，以完成整个疗程。附图简述图1显示Swiss Webster小鼠(SWR/J)的结核分枝杆菌复活感染模型的示意图。该图显示感染、化疗(每升饮用水含50mg利福平/85mg异烟肼)、免疫接种以及细菌载量计数/菌落形成单位(CFU)的时间点。图2显示在已感染结核分枝杆菌的SWR/J小鼠中先化疗、再接种Mtb72f的IgG1和IgG2a抗体反应免疫应答。小鼠未接受治疗、接受化疗(每升饮用水含50mg利福平/85mg异烟肼)或者接受化疗并用无佐剂的8μg/剂Mtb72f肌内接种3次。最后一次接种后10天给小鼠放血，通过ELISA测定血清IgG1(红)和IgG2a(黑)同种型的抗Mtb72f抗体反应。图3显示在已感染结核分枝杆菌的SWR/J小鼠中先化疗、再接种Mtb72f的IgG1和IgG2a抗体反应免疫应答。小鼠未接受治疗、接受化疗(每升饮用水含50mg利福平/85mg异烟肼)或者接受化疗并用含佐剂AS01B的8μg/剂Mtb72f肌内接种3次。最后一次接种后10天给小鼠放血，通过ELISA测定血清IgG1(红)和IgG2a(黑)同种型的抗Mtb72f抗体反应。图4显示在已感染结核分枝杆菌的SWR/J小鼠中先化疗、再接种Mtb72f的干扰素-γ(IFN-γ)反应。在不同时间点获取小鼠脾细胞，用10μg/ml rMtb72f或所示成分(Mtb32c和Mtb39)在体外刺激3天。作为对照，脾细胞培养物也用PPD(3μg/ml)、BCG裂解物(10μg/ml)、conA(3μg/ml)中的一种本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于预防或治疗患者的结核病复活的方法，所述方法包括给予已感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的哺乳动物免疫学有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含来自结核分枝杆菌复合群菌种的Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段以及佐剂，其中Mtb72f融合蛋白诱导抗结核分枝杆菌的免疫应答，因而预防结核病复活。
【技术特征摘要】
2005.04.29 US 60/676549;2006.02.27 US 60/7770171.一种用于预防或治疗患者的结核病复活的方法，所述方法包括给予已感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的哺乳动物免疫学有效量的药物组合物的步骤，所述组合物包含来自结核分枝杆菌复合群菌种的Mtb72f融合蛋白或其免疫原性片段以及佐剂，其中Mtb72f融合蛋白诱导抗结核分枝杆菌的免疫应答，因而预防结核病复活。2.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物患有活动性结核分枝杆菌感染。3.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物患有潜伏性结核分枝杆菌感染。4.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物被结核分枝杆菌多药耐药性菌株感染。5.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物先前已接受卡介苗(BCG)免疫接种。6.权利要求1的方法，其中Mtb72f来自结核分枝杆菌。7.权利要求1的方法，其中Mtb72f是包含SEQ ID NO: 2中残基8-729的多肽。8.权利要求7的方法，其中Mtb72f是由SEQ ID NO: 2中残基1和8-729组成的多肽，该多肽任选具有插入在起始Met残基之后的His标记。9.权利要求7的方法，其中Mtb72f是SEQ ID NO: 2多肽。10.权利要求7的方法，其中Mtb72f是SEQ ID NO: 6多肽。11.权利要求1的方法，其中Mtb72f是包含SEQ ID NO: 4中残基4-725的多肽。12.权利要求11的方法，其中Mtb72f是由SEQ ID NO: 4中残基1和4-725组成的多肽，该多肽任选具有插入在起始Met残基之后的His标记。13.权利要求11的方法，其中Mtb72f是SEQ ID NO: 4多肽。14.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物是人。15.权利要求1的方法，其中所述佐剂选自3D-MPL和QS21的脂质体制剂以及3D-MPL和QS21和水包油乳剂。16.权利要求1的方法，所述方法还包括给予一种或多种有效治疗结核分枝杆菌感染的化疗药。17.权利要求16的方法，其中所...
【专利技术属性】
技术研发人员：R科勒，Y洛贝尔，S里德，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，传染病研究所，
类型：发明
国别省市：比利时;BE
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