在脱水反应培养基干法浸渗的多孔支持物中检测、鉴别和计数微生物的方法技术

用于在多孔支持物(在其整个厚度包含反应培养基粉末)中对微生物进行检测、鉴别和计数的方法，所述支持物已在其整个厚度干法浸渗了脱水反应培养基。本发明专利技术还涉及使得能够进行所述方法的装置，以及所述装置的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术主要涉及微生物学分析领域。更具体地，其涉及用于在整个厚度经脱水反应培养基干法浸渗(dry-impregnated)的多孔支持物中检测、鉴别和/或计数微生物的方法。在临床诊断和工业微生物学控制、食品加工、药物或化妆品的领域，从19世纪末起，皮氏培养皿中胶凝的培养基(最常见为琼脂培养基)就已经是用于病原微生物检测和鉴别的必不可少的工具。已有若干可商业提供的产品来取代皮氏培养皿培养基。其中之一，包含可再水合(rehydratable)营养物的PetrifilmTM系统，使用非常广泛。另一个由Nissui Pharmaceutical开发的系统Compact DryTM，也包含脱水的培养基。这些培养基具有的优势是它们可以比即时可用的琼脂培养基保存的更久。它们也可以(如PetrifilmTM的情况)尺寸较小并因而会占据较小量的温育空间因而，一般而言，有两种方式获得可再水合的培养基:第一种包括将液体形式的培养基置于支持物中，继而将其整个进行干燥，以及第二种包括将脱水形式的培养基附着至支持物，从而立即获得可再水合的培养基。第一种方法，也即获得可再水合的营养培养基(其制备中包括湿法浸渗营养物的阶段)，其已经成为若干专利申请的主题。因而，专利申请CN102337324描述了这样的方法，其中将营养液与快速蒸发的化学成分混合。文献WO2005/061013描述了溶于溶剂中并沉积于吸附层上的标志物，从而用以检测阴道炎。近来，专利申请US20130089887描述了这样的支持物，也即用溶于溶剂的发色和/或发荧光底物浸渗的薄膜(与琼脂培养基接触)。然而，此种溶于水中或溶于溶剂中的方法，对于可再水合培养基的保存的时间长度有负面影响。事实上，将某些脆弱的产物如酶或者酶或代谢底物或者抗生素置于悬液中可对其总体稳定性有严重影响。对培养基进行
干燥所需的加热也可以使反应培养基的热敏感成分变性并使其无效。此种水相中的方法也无法控制和改变反应培养基和/或细菌显示所需的各种添加剂的位置。为了克服此种方法所获得的培养基的缺点，第二种方法提出了将营养粉末直接置于支持物上，而没有之前的溶解所述粉末的阶段。因而，3M提出了脱水的营养培养基，其涂敷有粘附剂并且被置于薄膜上而未曾经过之前将培养基溶解的阶段。此装置由两部分组成，底薄膜和顶薄膜，在其表面覆盖有脱水培养基的某些成分。在进行分析的时候，样品被置于这两个薄膜之间。此装置以及相关检测方法(如申请WO 2009/082667中所述)具有若干缺点。首先，此装置的制备需要将脱水的营养物粘附到薄膜上的步骤，所述薄膜则必需在事先涂敷有粘附剂。在这之后，所述培养基不能事实上形成具有可变高度和分层浓度的三维结构，因为其粘附至薄膜。因而只有一块小的表层的培养基可用。用于微生物学分析的所需的液体样品的体积因而不会超过1或2ml，这会影响检测灵敏度的阈值。然后，PetrifilmTM的包装需要将所述底薄膜和顶薄膜一起进行制备。这也使得不能够在同一装置上有若干不同的培养基。另外，此装置具有有限的应用并且不能例如用于接拭子或用作包扎(dressing)。最后，PetrifilmTM必然需要引入外部操作者来提供水成样品。另一方面，在此前的专利申请FR1257047中，申请人提出了在可于原处再水合的培养基上从要分析的样品中进行分离的方法，其使得可以获得分离的菌落。此种可再水合的培养基覆盖有能分离菌落的膜。因而，培养基保持无菌而菌落则就在所述培养基之上的膜上发展。然而，在琼脂或非琼脂支持物上分离菌落，有时会被视为是种限制并且常常与实验室外进行的实验和/或由微生物学领域内具有很少知识和技能的人进行的实验不相容。有鉴于上文所列出的所有问题，本专利技术提出了用于检测、鉴别和计数样品中可能含有的微生物的新方法。因而，本专利技术的一个目的是提供这样的装置，其包含改善检测灵敏度的脱水培养基。本专利技术的另一目的是提供用于不依赖于分离而对微生物进行检测、鉴别和计数的方法。本专利技术的另一目的是提供这样的装置和方法，其使得能够进行多重检测，并由此无需进行分离而从所要分析的相同样品中获得分离的、可检测的、和可计数的培养物(在同一装置上存在的不同反应培养基之上)。本专利技术的一个目的也是要提供特别具有灵活性的装置和方法。所述反应培养基可以是或多或少复杂的培养基，其例如是发色的，或者可以是很简单的，也就是说仅仅含有有限数目的底物(抗生素、代谢底物等)。所述装置和方法也可以具有很多样化模式的用途，如用作拭子，或者用于在包扎、卫生巾或食品包装中显示微生物污染的吸附培养基。本专利技术的另一目的是提供可以由具有很少微生物学技能的人所使用的装置。因而，可以在对样品进行分析的时候由操作者一次将所述装置再水合。也可以于原处进行再水合而无需引入操作者，特别是当所要测试的样品临近所述可再水合的反应培养基的时候，使得其可以逐步再水合。待分析的样品可以例如是渗出性伤口(exudative wound)或一片肉，并且可以产生可能含有待检侧微生物的液体。本专利技术的另一目的是提供这样的装置，其本身就用于收集所述样品，如拭子(swab)。本专利技术的一个目的是提供装置，其中反应培养基干法浸渗的多孔支持物独立于其包装而进行生产，这有助于所述装置的生产和销售。本专利技术的另一目的是提供这样的装置，其中创建了反应底物的浓度梯度，由此使得这些底物的量有限，并且所述装置的生产成本也有限。基于对本申请的阅读将知晓其它的目的。本专利技术因而意在实现所有或者一些上文所述的目标。因此，本专利技术的主题是用于在可能含有至少一种微生物的样品中检测和/或鉴别和/或计数所述至少一种微生物的方法，包括以下步骤：(a)提供用于检测和/或鉴别和/或计数微生物的包含多孔支持物的装置，所述多孔支持物在其整个厚度包含反应培养基粉末，所述多孔支持物已在其整个厚度经脱水反应培养基干法浸渗，(b)将样品与所述多孔支持物接触，(c)温育所述装置，(d)当所寻找的微生物存在于所述样品中时，在所述多孔支持物内检测和/或鉴别和/或计数微生物的一个或多个菌落。根据本专利技术，所述装置在其整个厚度干法浸渗了脱水反应培养基。可以根据至少四种技术来将粉状材料掺入多孔支持物中：-使用如专利US 5,213,843中所描述的真空泵；-用任何震动系统来机械震动多孔支持物本身(其上放置了粉末)，该震动可以引起粉末或多或少深入地进行渗入；-使用静电场；-超声波震动，与应用所述粉末同时，使用引起超声波发生头(sonotrode)震动的超声波发生器，如专利申请FR 2866578中所述。当多孔产物从超声波发生头下经过时，后者的作用使得粉末颗粒震动，它们继而渗入到多孔物质的空腔内。优选地，用于制备在其整个厚度干法浸渗了的多孔支持物的方法包括通过电场的措施使得粉末颗粒震动的步骤。优选地，此为交变电场。专利EP 1.028.836描述了通过在两个电极系统(粉末覆盖的织物位于其间)之间应用交变电场而对织物(非编织的、编织的等)的浸渗。变得带电的粉末颗粒，开始以交变场的频率震动。因而，出乎意料地，此技术可以用于采用脱水反应培养基对多孔支持物进行干法浸渗。颗粒的移动因而使它们能够渗入到支持物的孔中。所述颗粒已经深入地渗入到多孔支持物的整个厚度。因而，支持物本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于在可能含有至少一种目标微生物的样品中检测和/或鉴别和/或计数所述至少一种目标微生物的方法，包括以下步骤：(a)提供用于检测和/或鉴别和/或计数微生物的包含多孔支持物的装置，所述多孔支持物在其整个厚度包含反应培养基粉末，所述多孔支持物已在其整个厚度经脱水反应培养基干法浸渗，(b)将样品与所述多孔支持物接触，(c)温育所述装置，(d)当所寻找的微生物存在于所述样品中时，在所述多孔支持物内检测和/或鉴别和/或计数微生物的一个或多个菌落。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.09 FR FR14501491.用于在可能含有至少一种目标微生物的样品中检测和/或鉴别和/或计数所述至少一种目标微生物的方法，包括以下步骤：(a)提供用于检测和/或鉴别和/或计数微生物的包含多孔支持物的装置，所述多孔支持物在其整个厚度包含反应培养基粉末，所述多孔支持物已在其整个厚度经脱水反应培养基干法浸渗，(b)将样品与所述多孔支持物接触，(c)温育所述装置，(d)当所寻找的微生物存在于所述样品中时，在所述多孔支持物内检测和/或鉴别和/或计数微生物的一个或多个菌落。2.权利要求1的方法，包括制备、稀释、或浓缩所述样品的在先步骤。3.权利要求1和2中任一项的方法，其中是通过将所述样品置于所述多孔支持物下面来进行步骤b)。4.权利要求1和2中任一项的方法，其中是通过用所述多孔支持物取所述样品来进行步骤b)。5.前述权利要求中任一项的方法，其中当所述样品不是水成的或者未充分水成时，将适宜体积的液体添加至所述样品和/或添加至所述多孔支持物以便使反应培养基再水合。6.包含多孔支持物的装置，所述多孔支持物包含分布于其整个厚度的至少一种粉末形式的脱水反应培养基，所述多孔支持物具有0.5至2mm的厚度并且经过轧光。7.权利要求6的装置，特征在于至少一种粉末形式的反应培养基在所述多孔支持物的整个厚度上均匀分布。8.权利要求6的装置，特征在于至少一种粉末形...

【专利技术属性】
技术研发人员：MP·蒙泰，C·罗藏，
申请(专利权)人：生物梅里埃公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR