SonoVue超声造影技术在诊治肿瘤血管生成拟态中的检查指标属于临床肿瘤血管超声检查的技术领域，本发明专利技术首次发现上升时间、达峰时间和平均渡越时间，这些超声检查指标可用于肿瘤血管生成拟态的临床诊断与治疗，为临床上早期无创诊断肿瘤血管生成拟态提供依据，有助于临床诊断患者肿瘤的恶性程度及其血供模式特点，并为药物选择或手术治疗提供诊断依据。
【技术实现步骤摘要】
：本专利技术属于临床肿瘤血管超声检查的
，涉及为临床上早期无创诊断肿瘤血管生成拟态提供检查指标，有助于临床诊断患者肿瘤的恶性程度及其血供模式特点，并为药物选择或手术治疗提供诊断依据。
技术介绍
：血管在肿瘤发生和发展中起了重要作用。血管不仅为肿瘤细胞提供氧气和营养物质、运走有毒代谢产物，还为肿瘤细胞转移提供血行通道。肿瘤血管研究始于1971年，Folkman首次将血管与肿瘤联系，并预见性的提出“抗肿瘤血管治疗”理论。此后，随着肿瘤基础研究的进行，肿瘤血管分类更加细化，具体包括：内皮性血管(EV)、血管生成拟态(VM)、马赛克血管(MV)、淋巴管(LV)。目前，研究比较多的是内皮性血管和血管生成拟态。1999年Maniotis等在研究人眼底黑素瘤时发现了一种新型的血供管道，它由肿瘤细胞围成、内衬以细胞外基质。靛青绿血管造影技术联合共聚焦激光扫描显微镜发现该管道中有红细胞流动，表明它是一种功能性管道。这种血供管道的发生不依赖内皮细胞，却可以模拟内皮性血管的功能，故称之为血管生成拟态。血管生成拟态的发生过程不需要内皮细胞参与，但它却可以与内皮性血管发生衔接，这有助于肿瘤微循环网络的快速构建。此外，血管生成拟态与血液仅有一层细胞外基质相隔，肿瘤细胞更容易穿透细胞外基质发生血液转移。可见，血管拟态在肿瘤发生发展过程中起到重要作用。临床回顾性研究发现，肝细胞癌、神经胶质瘤、卵巢癌、星型细胞瘤、前列腺癌等肿瘤组织均存在血管生成拟态。此外，血管生成拟态还与肿瘤的恶性程度、肿瘤侵袭转移能力、患者生存期及不良预后密切相关。目前临床上除了手术后病理组织切片染色外，还没有无创性诊断血管生成拟态的有效方法。早期发现对肿瘤患者的治疗方案选择、治疗终点结果至关重要。尽管现有多种肿瘤早期诊断技术，如肿瘤标记物检查、穿刺活检病理检查、核磁共振成像、计算机断层扫描和放射性核素扫描等，但由于副作用大、敏感性低、检查成本高等缺点，这些技术在肿瘤早期诊断中并没有发挥预期的作用。而SonoVue超声造影(Contrast-enhanced ultrasound)是当前用于评价实质性器官血流灌注情况的主要诊断技术之一。SonoVue超声造影使用的是SonoVue微泡造影剂。SonoVue造影剂是一种内含六氟化硫惰性气体的磷脂微泡，稳定性好，在低声压作用下振而不破，有很好的谐波特性。另外，SonoVue造影剂粒径约为2-5μm，与红细胞直径相当，它是一种很好的血池造影剂，仅存在于血管内而不进入组织间隙，可以准确地反应组织的血流灌注状态。将超声造影仪和SonoVue造影剂相结合，可以动态、清晰地显示实质性器官中的微细血管及血流灌注状况，据此对组织器官病变情况进行定性诊断。此外，超声造影还具有无创性、安全性、实时性、检查费用较低等多个优点。超声造影用于临床肿瘤诊断的主要理论依据是实质性组织的血管分布情况、血流特点、灌注特点和血管形态，主要观察内容是造影剂的增强时相、增强水平、分布特征及增强模式。时间强度曲线(TIC)可以反映超声造影过程中组织的血流灌注情况，其中超声造影定量参数主要包括上升时间(RT)、达峰时间(TTP)、峰值强度(IMAX)、平均渡越时间(mTT)以及时间-强度曲线下面积(AUC)等，它们可以从不同角度反应组织器官的血液灌注情况。目前，超声造影只能对肿瘤组织的整体血供情况进行评价，尚不能对肿瘤组织中内皮性血管和血管生成拟态进行定性区分和定量分析，这在很大程度上限制了SonoVue超声造影在肿瘤良恶性诊断中的开发和应用。经过调研，未见SonoVue超声造影技术在诊治肿瘤血管生成拟态中检查指标的相关文献报道(自CNKI、维普中国期刊网)，因此这块研究领域尚处于空白阶段。
技术实现思路
：本专利技术提供了SonoVue超声造影技术在诊治肿瘤血管生成拟态中的检查指标，包括上升时间、达峰时间和平均渡越时间，这些检查指标可用于肿瘤血管生成拟态的临床诊断与治疗。附图说明图1为小鼠肿瘤超声造影图(A：小鼠肿瘤常规超声；B：彩色多普勒超声；C、D：SonoVue超声造影检测)。具体实施方式：实施例1：1.1H22瘤源鼠的制备从-80℃超低温冰箱取出冻存的小鼠H22细胞株，水浴温度39℃下快速解冻，在无菌条件下用生理盐水稀释细胞悬液，光学显微镜下计数，调整细胞浓度至2×107-4×107个/mL。用1mL注射器吸取0.3mL细胞稀释液接种到ICR小鼠腹腔，常规饲养，制成H22瘤源鼠。1.2H22荷瘤小鼠模型的制备H22瘤源鼠饲养7d后，选取腹部隆起明显的小鼠，脱颈处死。剔除有血性腹水的瘤源鼠。在无菌条件下用剪刀剖开小鼠腹部皮肤，在腹膜上剪一小洞，然后用1mL无针头注射器抽取腹水，将所得腹水置于冰浴的离心管中。用无菌生理盐水稀释，光学显微镜下计数，调整细胞浓度至2×107-4×107个/mL。两人配合，一人负责吸取细胞稀释液，一人绑定小鼠并接种。小鼠右侧腋窝皮下，每只小鼠接种0.2mL细胞稀释液，接种量为4×106-8×106个/只。接种过程中注意进针位置和角度，避免细胞稀释液漏出。1.3小鼠肿瘤的超声造影检查接种后第3d，根据小鼠右侧腋窝皮肤隆起情况，剔除造模失败的小鼠。然后于小鼠接种H22肿瘤后的第6、9、12、15d共4个时间点，分别随机挑选5只小鼠到无锡市人民医院超声医学科进行超声造影。超声造影之前，提前用脱毛液将小鼠右侧腋窝肿瘤部位毛发去掉，避免在超声时产生影像噪音。仪器及设备：Philips iU22超声诊断仪，12L5探头行常规检查，9L3探头行超声造影。造影条件设置：机械指数M10.10，聚焦点位于肿瘤正上方。所有造影参数设置在研究过程中均保持不变。超声造影剂：SonoVue造影剂(意大利布莱柯公司)，实验开始前加入注射用生理盐水5mL振摇后形成微泡混悬液，现配现用。超声造影步骤如下：(1)清醒状态下将小鼠用胶带固定在泡沫板上，使其呈仰卧位，固定好小鼠四肢和嘴部，以防小鼠在造影过程中乱动或伤人。(2)造影前用常规超声探测肿瘤部位，测量皮下肿瘤的长、宽、厚三个径线。用彩色多普勒确定血液流入的大血管，观察肿瘤内部的回声、血供和坏死情况。(3)使用0.1mL医用注射器接5号半头皮静脉针，经小鼠尾静脉注射0.02mL造影剂。造影剂注入的同时开始录像，观察造影剂在瘤内的流动情况，直至造影剂消散，结束录像，存储造影全过程供脱机分析。(4)将做完超声造影的小鼠带回实验室，经脱颈处死，剥取肿瘤，称重。先用生理盐水将肿瘤表面的 血液洗净，后用10％甲醛进行固定，以备进行实施例5的实验。1.4超声造影图像分析(1)将超声造影录像以DICOM格式从Philips iU22超声诊断仪导出，刻盘备用。(2)将DICOM格式造影录像导入Sonoliver软件，根据造影剂强度选定感兴趣的时间段。(3)参考常规超声图像，在超声造影图像中依次选择异常区(肿瘤区)和正常区(对照区)为感兴趣区(region of interesting，ROI)，尽量避开因皮肤、分界线而产生的高亮区。(4)进行运动补偿，消除造影过程中因小鼠乱动或探头移动而产生的噪音。(5)定量分析获得原始的时间强度曲线(TIC)，拟合时间强度曲线，每只小鼠重复分析三次，拟合度(quality 本文档来自技高网...
【技术保护点】
SonoVue超声造影技术在诊治肿瘤血管生成拟态中的检查指标。
【技术特征摘要】
1.SonoVue超声造影技术在诊治肿瘤血管生成拟态中的检查指标。2.根据权利要求1所述，这些检查指标包括上升时间、达峰时...
【专利技术属性】
技术研发人员：邱丽颖，冯磊，王旭，蔡维维，刘艳玲，侯豹，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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