本发明专利技术公开了一种螺旋藻中的多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂的用途，以螺旋藻多酚提取物作为活性成分之一或唯一的活性成分用于制备酪氨酸酶抑制剂；所述螺旋藻多酚提取物的制备方法：采用体积浓度为80%的乙醇提取螺旋藻，得到螺旋藻多酚粗提液，再将螺旋藻多酚粗提液于40℃减压浓缩，冷冻干燥后得到固态的螺旋藻多酚提取物。本发明专利技术从螺旋藻首次提取出的多酚对酪氨酸酶活性的抑制，将为其应用于皮肤美白、医疗、果蔬保鲜等领域提供可靠的理论依据，也将为综合利用螺旋藻资源和研究安全、经济的酪氨酸酶抑制剂提供新途径。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制剂的
，尤其涉及一种螺旋藻中的多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂的用途。
技术介绍
海藻多酚是一种主要从蓝藻、绿藻、红藻和褐藻四大海洋藻类中分离提取的具有抑菌、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒及降血压等广泛生物活性的多酚类化合物的总称。Iwai研究了褐藻多酚作为一种天然来源的α-葡萄糖酶抑制剂被小鼠摄入后，小鼠体内血糖水平被控制，能有效预防糖尿病的发生；卢虹玉等人通过萃取和超滤技术从全缘马尾藻中提取出4种多酚提取物，并测试了4种提取物的抗氧化能力和对sw579细胞增殖的影响，结果显示褐藻多酚提取物的总抗氧化能力与分子量大小负相关，对肿瘤细胞的抑制作用与浓度正相关；魏玉西等研究发现鼠尾藻多酚能干扰凝血因子的活性和减少血小板内外Ca2+的运输，抗凝血效果显著。研究表明，海藻多酚在食品和医药领域存在研究价值。酪氨酸酶能羟基化单酚底物和氧化二酚底物，是一种活性中心含有双核铜离子的氧化还原酶。黑色素过度积累会导致果蔬褐变、皮肤色斑和黑色素瘤形成，而酪氨酸酶活性大小同生物体中黑色素生成量密切相关。典型的酪氨酸酶抑制剂有曲酸、多酚类化合物、苯甲醛和苯甲酸脂类衍生物等，已被广泛应用于研究果蔬保鲜剂，化妆品美白剂和生物杀虫剂。螺旋藻是一种古老的丝状蓝藻，富含藻蓝蛋白、螺旋藻多酚、小分子多糖等活性成分。我国螺旋藻资源丰富，是螺旋藻原料生产大国，但我国螺旋藻主要进行简单利用，且活性成分开发深度不够。有鉴于此，本专利技术人研究和设计了一种螺旋藻中的多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂的用途，本案由此产生。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种螺旋藻中的多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂的用途，从螺旋藻原料中提取出螺旋藻多酚，并对其进行酪氨酸酶活性抑制实验，以期为螺旋藻资源的开发利用提供实验依据，同时研究出一种天然来源的经济、安全的酪氨酸酶抑制剂。为了实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采取的技术方案是：一种螺旋藻中的多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂的用途，以螺旋藻多酚提取物作为活性成分之一或唯一的活性成分用于制备酪氨酸酶抑制剂。作为实施例的优选方式，以螺旋藻多酚提取物作为活性成分之一或唯一的活性成分用于抗老年斑或抑制食品褐变的保鲜剂。作为实施例的优选方式，所述螺旋藻多酚提取物的制备方法：采用体积浓度为80％的乙醇提取螺旋藻，得到螺旋藻多酚粗提液，再将螺旋藻多酚粗提液于40℃减压浓缩，冷冻干燥后得到固态的螺旋藻多酚提取物。作为实施例的优选方式，螺旋藻多酚含量的测定方法：采用分光光度法，用福林酚试剂对提取物中的多酚显色，确定多酚含量：超纯水溶解0.110g没食子酸，采用100mL容量瓶定容，得没食子酸标准储备溶液；再用没食子没食子酸标准储备溶液分别稀释成10、20、30、40和50μg·mL-1的系列溶液，以超纯水做空白对照，分别取1.0mL稀释液置于比色管中，加入5.0mL福林酚溶液，反应6min，加入4.0mL 7.5％Na2CO3溶液，混匀，避光放置1h后，在波长765nm下测定吸光值，制作标准曲线；螺旋藻多酚含量根据标准曲线比色测定。本专利技术从螺旋藻首次提取出的多酚对酪氨酸酶活性的抑制，将为其应用于皮肤美白、医疗、果蔬保鲜等领域提供可靠的理论依据，也将为综合利用螺旋藻资源和研究安全、经济的酪氨酸酶抑制剂提供新途径。附图说明图1为本专利技术没食子酸的标准曲线；图2为本专利技术螺旋藻多酚提取物对酪氨酸酶二酚酶活力的抑制作用；图3为本专利技术螺旋藻多酚提取物对酪氨酸酶二酚酶抑制机理的测定；其中，直线1-5所对应的螺旋藻多酚的浓度分别为0，0.67，1.33，2.00和2.67mg·mL-1；图4为本专利技术螺旋藻多酚提取物对酪氨酸酶二酚酶抑制类型及抑制常数的测定；其中，直线1-5所对应的螺旋藻多酚的浓度分别为0，0.67，1.33，2.00和2.67mg·mL-1。具体实施方式1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂与药品 螺旋藻粉由福建省六神保健品有限公司提供；福林酚试剂，没食子酸，酪氨酸酶，购自Sigma公司；无水碳酸钠，购自汕头市西陇化工厂；乙醇，左旋多巴等实验材料购自上海国药化学试剂有限公司。1.1.2 仪器 紫外分光光度计，澳大利亚GBC仪器公司；恒温水浴锅，江苏省金坛市鸿科仪器厂；FE20K酸度计，上海梅特勒-托利多仪器有限公司；真空冷冻干燥机，郑州明天仪器设备有限公司。1.2 方法1.2.1 螺旋藻多酚的提取 以螺旋藻粉为原料，采用80％乙醇提取酚类物质，再将螺旋藻多酚粗提液于40℃减压浓缩，冷冻干燥后得到固态的螺旋藻多酚提取物。1.2.2 螺旋藻多酚含量的测定 采用分光光度法，用福林酚试剂对提取物中的多酚显色，确定多酚含量。超纯水溶解0.110g没食子酸，100mL容量瓶定容，得没食子酸标准储备溶液。再用没食子没食子酸标准储备溶液分别稀释成10、20、30、40和50μg·mL-1的系列溶液，以超纯水做空白对照，分别取1.0mL
稀释液置于比色管中，加入5.0mL福林酚溶液，反应6min，加入4.0mL 7.5％Na2CO3溶液，混匀，避光放置1h后，在波长765nm下测定吸光值，制作标准曲线。螺旋藻多酚含量根据标准曲线比色测定。1.2.3螺旋藻多酚提取物对酪氨酸酶二酚酶的抑制作用提取物对酶的抑制效果：通过固定底物浓度和酶浓度，测定不同效应物浓度下的相对剩余酶活。螺旋藻多酚提取物溶解于二甲基亚砜(DMSO)，制成不同浓度的效应物溶液。0.5mmol·L-1L-DOPA底物溶液和2.89μg·mL-1酶液均用50mmol·L-1pH 6.8磷酸缓冲液配制。在3mL反应体系中，先加入0.1mL效应物溶液，再加入2.8mL预先在30℃恒温水浴10min的底物溶液，最后加入0.1mL酶液，快速混匀。设定测定波长为475nm，测定反应体系的光密度值随反应时间的增长直线，消光系数ε＝3700L·mol-1·cm-1，通过酶活力，计算半抑制率IC50值。提取物对酶的抑制机理：通过固定底物浓度，改变酶量，测定不同效应物浓度下的酶活力。在含2.8mL 0.5mmol·L-1L-DOPA底物的测活体系中，测定酶量为1.15，1.73，2.31，2.89和3.46μg·mL-1时，不同浓度螺旋藻多酚提取物作用下酶的反应速率，判断提取物对酶的作用机理。提取物对酶的抑制类型、抑制常数：通过固定酶浓度，改变底物的量，测定不同效应物浓度下的酶活力。固定酶量为2.89μg·mL-1，在螺旋藻多酚提取物浓度分别为0，0.67，1.33，2.00和2.67mg·mL-1的测活体系中，测定L-DOPA浓度为0.3，0.4，0.5，0.6和0.7mmol·L-1时的酶反应速率。通过Lineweave-Burk双倒数作图，计算并比较动力学参数Km和Vm，判断抑制类型。2 结果与分析2.1 螺旋藻多酚提取物中总酚含量没食子酸的Folin-Ciocalteus反应标准曲线如图1。没食子酸质量浓度在0～50μg·mL-1时，吸光值A765与标准液浓度有良好的线性关系。没食子酸标准工作曲线的线性回归方程为Y＝0.00123X-0.0086，相关系数R2＝0.9996(Y为吸光值，X为没食子酸浓度)。根据没食子酸的标准工作曲线公式和螺旋藻溶液在765nm波长下的吸光值，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种螺旋藻中的多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂的用途，其特征在于：以螺旋藻多酚提取物作为活性成分之一或唯一的活性成分用于制备酪氨酸酶抑制剂。
【技术特征摘要】
1.一种螺旋藻中的多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂的用途，其特征在于：以螺旋藻多酚提取物作为活性成分之一或唯一的活性成分用于制备酪氨酸酶抑制剂。2.如权利要求1所述的一种螺旋藻中的多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂的用途，其特征在于：以螺旋藻多酚提取物作为活性成分之一或唯一的活性成分用于抗老年斑或抑制食品褐变的保鲜剂。3.如权利要求1所述的一种螺旋藻中的多酚提取物作为酪氨酸酶抑制剂的用途，其特征在于：所述螺旋藻多酚提取物的制备方法：采用体积浓度为80％的乙醇提取螺旋藻，得到螺旋藻多酚粗提液，再将螺旋藻多酚粗提液于40℃减压浓缩，冷冻干燥后得到固态的螺旋藻多酚提取物。4.如权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：王力，李健，李莉莉，邓阳阳，苏文金，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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