一种从茶多酚中纯化茶儿茶素的技术制造技术

本发明专利技术涉及从茶多酚中纯化茶儿茶素的技术。包括利用硅胶柱层析串联低取代度的羟丙基纤维素富集精制茶儿茶素类成分，达到既除去茶多酚中的水溶性和脂溶性色素，又能彻底脱除咖啡碱类成分。层析、富集的填料经活化再生后可重复利用，茶儿茶素产品制备过程中所用试剂均具有“绿色”环保性。

【技术实现步骤摘要】


本专利技术属于天然产物分离纯化
，具体涉及一种利用硅胶和低取代度羟丙基纤维素串联组合的方式从茶多酚中纯化制备茶儿茶素的技术。

技术介绍

茶树源产于中国云南西双版纳(陈椽.再论茶树原产地.茶业通报,1981,01:20-25.)，隶属于山茶科(Theacea)山茶属(CamelliaSinensis(L.)O.Ktze.)植物(中国植物志,第49(3)卷)。茶树所萌发的新叶可制成一种大众消费者喜爱的饮料，在我国有着几千年的饮用历史，常饮可以生津止渴、去疾强身和明目益思，有益身心健康(赵保路.天然抗氧化剂茶多酚的健康作用及其机理.生物物理学报,2012,28(5):426-437.||ChungS.Yang.CancerPreventionbyVitaminEandTeaPolyphenols:LessonsLearnedfromStudiesinAnimalModelsandhumans.ProgressinChemistry,2013,25(9):1492-1500.)。
茶叶经分离鉴定的化合物约700种(宛晓春.茶叶生物化学,中国农业出版社,2003)，其中包括茶多酚、有机酸、茶氨酸、生物碱、茶皂素、芳香类物质，等。茶多酚是茶树中多酚类混合物，以2-苯基苯并吡喃为主体结构的黄烷醇类化合物—茶儿茶素占主体成分。茶儿茶素一般包括表型儿茶素(Epicatechin,EC)、表没食子型儿茶素(Epigallocatechin,EGC)、表儿茶素没食子酸酯(Epicatechingallate,ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechingallate,EGCG)，其总质量份数在干茶中一般高于7%(w/w).茶儿茶素具有抗氧化、抗炎、抗病毒、抗肿瘤，等特性。
我国茶树资源丰富，实有茶园面积2279.94千公顷，可采摘有1735.2千公顷(2012年度国家统计局数据)，茶叶产量192.45万吨(2013年度国家统计局数据)。采摘的茶鲜叶经加工成的干茶一般包括名优茶和大宗茶。以浙江省茶产业为例(毛祖法,罗列万,陆德彪,等.浙江省名优茶产业可持续发展对策研究.中国茶叶加工,2012,2:9-12.)，2010年名优茶产量(6.5万吨)和产值(84.4亿元)分别是总产量和产值的39.2%和93.3%。故大宗夏秋茶存在产量大、产值低的问题。大宗茶酚氨比高，以深加工手段来开发利用其中的多酚将是其发展途径之一。据悉，浙江省当前茶叶深加工企业约40家，年消耗干茶约8.2万吨，主要用来生产茶多酚、速溶茶，等。茶多酚目前为茶叶深加工企业的主打产品，其产品主要运用于茶饮料、食品添加剂及保健类产品。但随着植物提取物的发展、生物化学精制纯化技术的进步，及人们对高品质产品不断追求，成分与功能相对单一、集中的天然产物产品将是未来一种发展趋势。因此，茶儿茶素作为人类的一种健康元素，将其精制纯化符合当前大健康产业的发展。
目前市售茶多酚产品主要是利用水提或水的乙醇溶液提取、浓缩干燥而得，粉末呈黄棕色。茶儿茶素一般得到较好的保留，只是与其相伴随的杂质较多，尤其是脂溶性与水溶性色素类成分影响了产品品质。我们实验室前期收集市场销售的不同含量规格的茶多酚产品，主要来源于浙江东方茶业科技有限公司、四川禹伽茶业科技有限公司、晨光生物科技集团股份有限公司、浙江塔塔茶业科技有限公司、湖州荣凯植物提取有限公司、福建利康源生物工程有限公司、江西绿康天然产物有限责任公司、湖南金农生物资源股份有限公司、安徽红星药业有限责任公司，并按国标家茶叶标准GB/T8313-2008测定了其所含有的茶多酚、茶儿茶素成分(见表1)。结果表明，茶儿茶素总量占茶多酚质量百分数在50%-88.8%范围。
表1市售茶多酚产品中茶多酚、没食子酸及茶儿茶素含量(%,w/w)
注：表中样品中各成分以平均数±标准偏差(n=3)表示。
茶儿茶素的纯化方法主要有沉淀法(ZL02139219.6)、树脂吸附法(张盛,刘仲华,黄建安,等.吸附树脂法制备高纯度儿茶素的研究.茶叶科学,2002,22(2):125-130||张盛,刘仲华,黄建安,等.高ECG型儿茶素纯化工艺研究.湖南农业大学学报(自然科学版),2003,29(2):144-146.||龚雨顺,刘仲华,黄建安,等.大孔吸附树脂分离茶儿茶素和咖啡因研究.湖南农业大学学报(自然科学版),2005,31(1):50-52||李慧星.树脂法提取纯化儿茶素及儿茶素单体EGCG分离制备的工艺研究.合肥工业大学,2006.||钟世安,贺国文,涂秋云,等.大孔吸附树脂对酯型儿茶素吸附性能的研究.离子交换与吸附,2007,23(5):392-399.||仉燕崃.酯型儿茶素的分离纯化工艺研究.大连理工大学,2006||EP1767097,Processforpreparingepigallocatechingallate||杨性民,刘青梅,高海月,应敏,杨留明.茶多酚中EGCG分离纯化工艺优化.中国食品学报,2006,6(5):77-80.||王传金,魏运洋,朱广军,等.聚酰胺色谱法分离制备高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯.应用化学,2007,24(4):443-447.||龚志华,黄甜,庞月兰,等.HP-20大孔吸附树脂分离纯化儿茶素EGCG的效果.湖南农业大学学报(自然科学版),2010,36(1):87-90||JianhanHuang,KelongHuang,SuqinLiu,QiongLuo,MancaiXu.Adsorptionpropertiesofteapolyphenolsontothreepolymericadsorbentswithamidegroup.Journalofcolloidandinterfacescience.||RuiyingZhao,YuYan,MingxianLi,HushengYan.Selectiveadsorptionofteapolyphenolsfromaqueoussolutionofthemixturewithcaffeineonmacroporouscrosslinkedpoly(N-Vinyl-2-pyrrolidinone).Reactive&FunctionalPolymers68(2008)768-774.||杨文泓,赵长青,高杰,等.用大孔氨甲基聚苯乙烯树脂选择性吸附分离茶多酚和咖啡因.离子交换与吸附,2007,23(6):481-488.||唐课文,周春山,钟世安,等.聚酰胺树脂对茶多酚和咖啡因吸附选择性研究.光谱学与光谱分析,2003,23(1):143-145.)、反相碳十八填料柱层析法(周庆秋.天然酯型儿茶素EGCG的分离纯化及药学研究.黑龙江大学,2008.||林丹,李春苗,鲜殊,等.中压制备液相色谱快速分离制备儿茶素单体.天然产物研究与开发,2013,25(1):92-95,100.||赖榕辉,黄亚辉.中低压柱层析分离儿茶素的研究.离子交换与吸附,2012,28(2):165-170.)、膜分离法(张建勇,江用文,江和源,等.膜分离过程中儿茶素和咖啡碱含量变化研究.安徽农业科学,2013,41(2):4本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从茶多酚中纯化茶儿茶素的技术，包括：(1)将茶多酚粉末用含醋酸的水溶解，得茶多酚溶液；(2)离心步骤(1)所配制的茶多酚溶液，获得上清液；(3)将步骤(2)的上清液与水饱和的乙酸乙酯充分混合，待分层后，获取上层酯相萃取液；(4)浓缩步骤(3)的上层酯相萃取液，获得浓缩液；(5)将步骤(4)的浓缩液上样于硅胶层析柱；(6)以水饱和乙酸乙酯洗脱，并收集洗脱液；(7)浓缩步骤(6)的洗脱液，以去除乙酸乙酯，得茶儿茶素纯化产物(I)；(8)利用酒石酸钾钠水溶液洗脱再生步骤(5)中的硅胶；(9)用水稀释步骤(7)中的茶儿茶素纯化产物(I)，获得水溶液；(10)将步骤(9)的水溶液上样并吸附于低取代度羟丙基纤维素；(11)用水洗脱；(12)用15‑45 % (v/v)的乙醇洗脱，并收集洗脱液；(13)浓缩步骤(12)的洗脱液，获得浓缩液；(14)利用含乙酸乙酯的水洗脱再生步骤(10)中的低取代度羟丙基纤维素；(15)向步骤(13)的浓缩液中加入乙酸乙酯充分混合，待分层后，获取上层酯相萃取液；(16)浓缩步骤(15)的上层酯相萃取液，以去除乙酸乙酯，得茶儿茶素纯化产物(II)；(17)进一步真空干燥步骤(16)的茶儿茶素纯化产物(II)，得精制纯化的茶儿茶素。...

【技术特征摘要】
1.一种从茶多酚中纯化茶儿茶素的技术，包括：
(1)将茶多酚粉末用含醋酸的水溶解，得茶多酚溶液；
(2)离心步骤(1)所配制的茶多酚溶液，获得上清液；
(3)将步骤(2)的上清液与水饱和的乙酸乙酯充分混合，待分层后，获取上层酯相萃取液；
(4)浓缩步骤(3)的上层酯相萃取液，获得浓缩液；
(5)将步骤(4)的浓缩液上样于硅胶层析柱；
(6)以水饱和乙酸乙酯洗脱，并收集洗脱液；
(7)浓缩步骤(6)的洗脱液，以去除乙酸乙酯，得茶儿茶素纯化产物(I)；
(8)利用酒石酸钾钠水溶液洗脱再生步骤(5)中的硅胶；
(9)用水稀释步骤(7)中的茶儿茶素纯化产物(I)，获得水溶液；
(10)将步骤(9)的水溶液上样并吸附于低取代度羟丙基纤维素；
(11)用水洗脱；
(12)用15-45%(v/v)的乙醇洗脱，并收集洗脱液；
(13)浓缩步骤(12)的洗脱液，获得浓缩液；
(14)利用含乙酸乙酯的水洗脱再生步骤(10)中的低取代度羟丙基纤维素；
(15)向步骤(13)的浓缩液中加入乙酸乙酯充分混合，待分层后，获取上层酯相萃取液；
(16)浓缩步骤(15)的上层酯相萃取液，以去除乙酸乙酯，得茶儿茶素纯化产物(II)；
(17)进一步真空干燥步骤(16)的茶儿茶素纯化产物(II)，得精制纯化的茶儿茶素。
2.如权利要求1所述的技术，其中步骤(1)所述含有醋酸的水，醋酸浓度在1-4mol\...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂云飞，张士康，杨秀芳，朱跃进，谭蓉，王静，
申请(专利权)人：中华全国供销合作总社杭州茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33