利用微波炉快速烘干植物叶片提取DNA的方法技术

本发明专利技术公开了利用微波炉快速烘干植物叶片提取DNA的方法。本发明专利技术公开的方法包括：用微波(波长为0.12米的无线电波)干燥离体植物器官和/或组织，破碎干燥的植物器官和/或组织，向植物粉末中加入细胞裂解液在65℃中反应60‑70分钟，得到含有DNA的提取液，将该提取液称为提取液1，除去所述提取液1的杂质，得到DNA。实验证明，本发明专利技术采用了微波炉烘干植物组织和器官，用于提取DNA，烘干时间短仅需4‑10分钟，提取的DNA可用于SSR‑PCR，干燥的植物器官和/或组织便于携带，便于运输及邮寄等，使得分子育种及分子检测能更广泛地应用，在分子标记辅助育种和品种纯度检测及真实性鉴定上有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
利用微波炉快速烘干植物叶片提取DNA的方法
本专利技术涉及生物
中利用微波炉快速烘干植物叶片提取DNA的方法。
技术介绍
植物DNA的提取是开展生物实验的基础，一般应用低温保鲜方法保存植物叶片，防止DNA的降解和氧化，如利用液氮保存或用冰袋保存，但携带均不方便。近年来采用硅胶干燥剂干燥植物叶片，用干燥后的叶片提取DNA,一般干燥时间需要48小时，中间还需要更换干燥剂，操作比较麻烦。目前急需一种可以快速烘干植物叶片提取DNA的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何提取植物DNA。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了植物DNA提取方法，所述方法包括下述1)和2)：1)用微波炉干燥离体植物器官和/或组织，得到干燥的植物器官和/或组织；2)提取所述干燥的植物器官和/或组织的DNA，得到DNA。上述方法中，所述微波为波长为0.12米的无线电波。上述方法中，所述植物组织和/或器官可为非幼嫩组织和/或器官。所述非幼嫩组织和/或器官具体可为非新生的组织和/或器官，如平展子叶或平展真叶。上述方法中，所述用微波干燥离体植物器官和/或组织具体可为将所述离体植物器官和/或组织在微波炉中进行处理，得到所述干燥的植物器官和/或组织。所述微波炉的工作频率可为2450兆赫。所述微波炉具体可为格兰仕集团产品，型号为G80F23N1P-M8。将所述离体植物器官和/或组织在所述微波炉中进行处理的条件具体可为a1)、a2)或a3)：a1)高火条件下微波烘4分钟；a2)中火条件下烘6分钟；a3)低火条件下烘10分钟。上述方法中，所述2)可包括：21)破碎所述干燥的植物器官和/或组织，得到植物粉末；22)向所述植物粉末中加入细胞裂解液在65℃中反应60-70分钟，得到含有DNA的提取液，将该提取液称为提取液1，除去所述提取液1的杂质，得到DNA；所述细胞裂解液由水和溶质组成，所述溶质为Tris、EDTA钠盐、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、NaCl、β-巯基乙醇和HCl，Tris、EDTA钠盐、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、NaCl和β-巯基乙醇的浓度分别为0.1M、0.02M、2％(质量百分含量)、2％(质量百分含量)、1.5M、1％(体积百分含量)，用HCl调节pH至8.0。所述离体植物器官和/或组织为可为直接从植物分离得到的植物组织和/或器官。上述方法中，所述干燥的植物器官和/或组织与所述细胞裂解液的配比为50mg：700-800μl，如50mg：700μl。上述方法中，所述除去所述提取液1的杂质可包括：向所述提取液1中加入溶液S得到含有DNA的提取液，将该提取液称为提取液2，除去所述提取液2的杂质，得到DNA；所述溶液S由氯仿和异戊醇组成，所述溶液S中氯仿和异戊醇的体积比为24：1。所述提取液1与所述溶液S的体积比可为1:1。上述方法中，所述除去所述提取液2的杂质可包括：将所述提取液2进行离心，使DNA进入上清液中，收集上清液，将该上清液称为上清液1，向所述上清液1中加入异丙醇得到含有DNA的提取液，将该提取液称为提取液3，除去所述提取液3的杂质，得到DNA。其中，异丙醇与所述上清液1的体积比可为2/3:1。上述方法中，所述除去所述提取液3的杂质可包括：将所述提取液3进行离心，使DNA进入沉淀中，收集沉淀，将该沉淀称为沉淀1，除去所述沉淀1的杂质，得到DNA。上述方法中，所述除去所述沉淀1的杂质可包括：用乙醇水溶液或乙醇洗涤所述沉淀1得到DNA。所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比可为70％。上述方法中，所述植物可为双子叶植物或单子叶植物。所述双子叶植物可为棉花。所述发射微波的装置具体可为微波炉。所述微波炉的工作频率可为2450兆赫。所述微波炉具体可为格兰仕公司产品，型号为G80F23N1P-M8。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了所述方法在分子标记辅助育种中的应用,或所述方法在品种纯度检测或品种的真实性鉴定中的应用。上述应用中，所述植物可为双子叶植物或单子叶植物。所述双子叶植物可为棉花。上述应用中，所述植物组织和/或器官可为非幼嫩组织和/或器官。所述非幼嫩组织和/或器官具体可为非新生的组织和/或器官，如平展子叶或平展真叶。本专利技术中，所述平展真叶为从叶片长出平展及以后各时间段的叶片。本专利技术中，所述离心均可在4℃下进行。实验证明，本专利技术采用了微波炉烘干植物组织和器官，用于提取DNA，烘干时间短仅需4-10分钟，提取的DNA(浓度可达220.8-342.8ng/μl，OD260/OD280为2.00-2.03)应用于SSR分子标记效果与新鲜叶片提取的DNA一样，谱带清晰。并且微波炉烘干后当天提取的DNA和微波炉烘干放置一个星期提取的DNA质量均较好(浓度可达124.7-319.7ng/μl，OD260/OD280为2.02-2.06)，均适用于SSR分子鉴定。本专利技术的植物DNA提取方法适用于在不具备分子实验的条件下先将植物组织和器官快速烘干然后再进行DNA的提取，并且快速烘干，不影响DNA的提取，异地取样简单，携带方便。本专利技术的植物DNA提取方法可应用于分子辅助育种，高代材料选择单株，能起到加快育种进程。这个方法可以从棉花的叶片烘干推广到其他植物的应用，应用范围广。附图说明图1为GK102不同时期的真叶在微波炉中火干燥后的提取的DNA的PCR结果。图2为石抗126平展子叶在低火、中火和高火烘干后提取的DNA在SSR引物CS62扩增后的图谱。图3为GK102的全展真叶在低火、中火和高火烘干后提取的DNA在SSR引物扩增后的图谱。图4为石抗126平展子叶在低火、中火和高火烘干后一个星期提取的DNA的SSR引物扩增图谱。图5为GK102全展真叶在低火、中火和高火烘干后一个星期提取的DNA扩增图谱。图6为GK102鲜叶提取的DNA的SSR引物扩增图谱。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的用到的棉花为GK102(2015年国家审定的棉花品种，山东鑫秋种业科技有限公司)和石抗126(国家棉花区试的对照品种，石家庄市农林科学研究院)。下述实施例中的微波炉为格兰仕公司产品，型号为G80F23N1P-M8，工作时发射的微波为波长为0.12米的无线电波，微波功率为800w。该微波炉的低火、中火和高火的工作方式分别为高火：100％功率输出，中火：66％功率输出，低火：17％功率输出。下述实施例中的细胞裂解液由水和溶质组成，溶质为Tris、EDTA钠盐、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、NaCl、β-巯基乙醇和HCl，Tris、EDTA钠盐、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、NaCl和β-巯基乙醇的浓度分别为0.1M、0.02M、2％(质量百分含量)、2％(质量百分含量)、1.5M、1％(体积百分含量)，用HCl调节pH至8.0。实施例1、干燥棉花子叶和真叶DNA的提取1、干燥棉花子叶和真叶DNA的提取实验设重复，每次重复本文档来自技高网...

【技术保护点】
植物DNA提取方法，包括下述1)和2)：1)用微波干燥离体植物器官和/或组织，得到干燥的植物器官和/或组织；2)提取所述干燥的植物器官和/或组织的DNA，得到DNA。

【技术特征摘要】
1.植物DNA提取方法，包括下述1）和2）：1）用微波干燥离体植物器官和/或组织，得到干燥的植物器官和/或组织；2）提取所述干燥的植物器官和/或组织的DNA，得到DNA；所述微波为波长为0.12米的无线电波；所述植物组织和/或器官为非幼嫩组织和/或器官；所述用微波干燥离体植物器官和/或组织为将所述离体植物器官和/或组织在微波炉中进行处理，得到所述干燥的植物器官和/或组织；将所述离体植物器官和/或组织在所述微波炉中进行处理的条件为a1)、a2)或a3）：a1）高火条件下微波烘4分钟；a2）中火条件下烘6分钟；a3）低火条件下烘10分钟；所述非幼嫩组织和/或器官为平展子叶或平展真叶；所述植物为棉花。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述2）包括：21）破碎所述干燥的植物器官和/或组织，得到植物粉末；22）向所述植物粉末中加入细胞裂解液在65℃中反应60-70分钟，得到含有DNA的提取液，将该提取液称为提取液1，除去所述提取液1的杂质，得到DNA；所述细胞裂解液由水和溶质组成，所述溶质为Tris、EDTA钠盐、十六烷基三甲基溴化铵、聚乙烯吡咯烷酮、NaCl、β-巯基乙醇和HCl，Tris、EDTA钠盐、十六烷基三甲基溴化铵、聚乙烯吡咯烷酮、NaCl和β-巯基乙醇的浓度分别为0.1M、0.02M、2%、2%、1.5M、1%，用HCl调节pH至8.0，其中所述十六烷基三...

【专利技术属性】
技术研发人员：付小琼，叶武威，
申请(专利权)人：中国农业科学院棉花研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41