一种输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体、构建方法及用途技术

本发明专利技术涉及一种输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体、构建方法及用途。所述输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体，由含纳豆激酶基因的NK‑2A‑eGFP基因片段插入慢病毒RNA干扰载体中获得，所述含纳豆激酶基因的NK‑2A‑eGFP基因片段序列如SEQ ID No.1所示。本发明专利技术构建了含有卵清蛋白启动子OV2基因与雌激素反应元件ERE和纳豆激酶的重组慢病毒表达载体，实现了纳豆激酶和绿色荧光蛋白双基因的表达，以绿色荧光蛋白EGFP作为报告基因，可以用现有的EGFP或者FITC的滤光装置检测。为利用卵清蛋白启动子OV2研究外源基因在禽类输卵管组织细胞中特异表达提供了参考依据。同时为利用鸡卵清蛋白启动子构建输卵管生物反应器来生成药物蛋白奠定了理论和物质基础。

【技术实现步骤摘要】
201610056011

【技术保护点】
一种输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体，由含纳豆激酶基因的NK‑2A‑eGFP基因片段插入慢病毒RNA干扰载体中获得，所述含纳豆激酶基因的NK‑2A‑eGFP基因片段序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体，由含纳豆激酶基因的NK-2A-eGFP基因片段插
入慢病毒RNA干扰载体中获得，所述含纳豆激酶基因的NK-2A-eGFP基因片段序列如SEQID
No.1所示。
2.如权利要求1所述的输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体，其特征在于所述慢病毒RNA干
扰载体为慢病毒载体pGFP-OV2-ERE，由鸡卵清蛋白启动子基因OV和鸡雌激素反应元件ERE
连接到慢病毒载体pLVshRNA-eGFP中替换质粒上的CMVpromoter元件获得，其质粒图谱见
图1；所述鸡卵清蛋白启动子基因OV序列如SEQIDNo.2所示，所述鸡雌激素反应元件ERE序
列如SEQIDNo.3所示。
3.构建如权利要求2所述的输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体的方法，所述方法包括：
(1)构建含NK-2A-eGFP目的基因序列片段的pUC57质粒；
(2)NK-2A-eGFP目的基因克隆：设计NK-2A-eGFP基因引物，以步骤(1)构建的pUC57质粒
为模板，PCR扩增获得NK-2A-eGFP目的基因产物；
所述NK-2A-eGFP基因引物序列如下：
NK-2A-eGFP-F：5'-CGCCCCGGGTTGTTGCGCCGCGGCTT-3'
NK-2A-eGFP-R：5'-CGCCTCGAGAAAGGAGAGGGTAAAGA-3'；
(3)用XmaI和XhoI对NK-2A-eGFP目的基因产物和慢病毒载体pGFP-OV2-ERE进行分别进
行双酶切，获得NK-2A-eGFP目的基因片段和线性化载体pGFP-OV2-ERE，连接NK-2A-eGFP目
的基因片段和线性化载体pGFP-OV2-ERE，获得所述的输卵管纳豆激酶慢病毒表达载体
pGFP-2...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭晓令，吴志鹏，蒋梅，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33