褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用制造技术

本发明专利技术提供了褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用，本发明专利技术通过实验证明褐藻酸硫酸酯对HPV假病毒侵染过程具有强抑制作用，且成剂量依赖关系；褐藻酸硫酸酯对HPV转化的Hela和Caski细胞内的病毒E6基因和E7基因及其蛋白的表达均有抑制作用，且成剂量依赖关系。通过系列系统科学实验证明所述褐藻酸硫酸酯可以开发成抗人乳头瘤状病毒的药物和保健品，具有良好的市场应用前景。

【技术实现步骤摘要】
褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用
本专利技术属于医药
，具体涉及褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用。
技术介绍
人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)作为通过性传播感染的常见的病原体，是威胁现代人生命安全的主要病毒之一。HPV有100多种分型，可引起多种病变，其中主要引发疾病的有13种高危型及5种低危型。高危型HPV的感染与一些肛门生殖器区肿瘤的发生之间有着一定关联，其中HPV16、HPV18亚型的长期感染已经被证实为宫颈癌发生的一个主要诱因。目前市面上还没有针对HPV的特效防治药物，且HPV疫苗主要适应于未有性活动的女性。因此，研发新型特效的抗HPV药物具有重要意义。由于HPV的增殖依赖于上皮细胞的分化，因而其在体外基本无法存活。目前认为生产假病毒是模拟HPV感染最有效的方法。HPV在哺乳动物细胞中可表达衣壳蛋白L1、L2，这两种蛋白在体外具有自我组装成病毒样颗粒(Virus-likeparticle，VLP)并包裹病毒基因组或外源基因的能力，形成与天然病毒结构及免疫原性一致的假病毒(PsV)。美国NIH的Buck教授等在国际权威期刊《JournalofVirology，79(5)2839-2846，2005》上报道利用PsV能非特异包装DNA的特性，将HPVL1、L2基因的质粒与报告基因质粒共转染哺乳动物细胞，组装成包裹报告质粒的假病毒颗粒。利用该方法构建的假病毒滴度较高，且试验操作简单，结果稳定可靠。因此该HPV假病毒系统目前被广泛的用于抗HPV疫苗及药物的筛选与鉴定。此外，HPV转化的细胞如Hela和Caski等也被用于抗HPV药物的筛选和药效学评价。宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，近年来发病率逐年上升，发病年龄渐趋年轻化。研究表明宫颈持续或反复感染人乳头瘤病毒(HPV)是宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要危险因素，近年来宫颈HPV感染受到广泛关注，大量研究证实高危型HPV感染是宫颈癌前病变及宫颈癌发生的重要诱因，严重威胁女性的生命健康，预防宫颈癌发生及复发、阻断病程的关键在于清除HPV。HPV是一种无包膜的小DNA病毒，根据其致癌力强弱，分为高危型和低危型。高危型包含HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等，主要引起CINⅡ、Ⅲ和宫颈癌。高危型HPV感染宫颈后，病毒DNA随机整合到宿主细胞基因组DNA上，自身复制的抑制表达性片段E2基因丢失，E6、E7癌基因过度表达，E6、E7原癌蛋白分别与宿主细胞内肿瘤抑制物p53、pRb结合，使肿瘤抑制物失活。原癌基因激活、抑癌基因失活，使宫颈上皮细胞发生恶性转变。经过多年的临床研究，已明确HPV感染是宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的主要病因。杂交捕获第二代(HCⅡ)是目前唯一被美国FDA批准的HPVDNA检测技术，能同时检出13种HPV高危型，无需基因扩增，阴性预测值高达99％。对于宫颈HPV的防治，欧美等发达国家将预防性疫苗列入国家常规性接种疫苗，我国也已进入二期临床试验，但预防性疫苗无法涵盖所有高危型HPV型别，且对已感染相关型别的女性没有治疗作用。治疗性疫苗用于已感染HPV人群，尚在研制当中，未大规模投入临床使用。但疫苗的安全性和免疫原性等问题有待提高。物理及手术治疗适用于感染HPV病毒且已发生宫颈癌前病变的患者，但手术后仍可能存在持续HPV感染。针对宫颈HPV治疗的研究热点主要集中在抗病毒药物、免疫增强剂及外用制剂的研制上，并已取得了较大突破,但真正应用于人体临床试验时效果却不尽人意，迄今临床上仍缺乏行之有效的预防和治疗措施。药物治疗宫颈HPV感染常用干扰素如辛复宁(重组人干扰素ɑ2b阴道泡腾胶囊)，理论上通过诱导靶细胞内产生有酶活性的抗病毒蛋白，抑制病毒核酸的复制和转录，但其疗效和毒副作用仍存在争议。因此及时有效地清除感染者的HPV病毒，可以不同程度地阻断宫颈上皮细胞的癌前病变及宫颈癌。但是目前尚无治疗HPV感染的特效药物。
技术实现思路
本专利技术提供了褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的病症的药物和保健品中的应用，本专利技术通过实验证明了褐藻酸硫酸酯对于HPV感染具有很强的抑制作用，具有开发成预防和治疗由人乳头瘤状病毒引发的病症的药物的技术前景。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：本专利技术提供了褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用。进一步的：所述褐藻酸硫酸酯是褐藻酸的C2及C3位上引入硫酸酯基而成的一种硫酸多糖类化合物，重均分子量为6～100kDa，聚甘露糖醛酸含量为5～95％，聚古罗糖醛酸含量为5～95％，硫酸根取代度为5～15％。进一步的：所述褐藻酸硫酸酯的制备方法如下：在反应器中加入甲酰胺，然后缓慢加入氯磺酸，接着加入低聚褐藻酸，低聚褐藻酸与甲酰胺的质量比1:4～12，低聚褐藻酸与氯磺酸的质量比为1:1～3；上述组分混合形成的混合物在50～90℃搅拌反应1～5h；反应结束后醇沉，过滤，洗涤，收集沉淀，沉淀用水溶解后，缓慢加入氢氧化钠溶液转化成盐，调节溶液pH至8～10；溶液用活性炭脱色，用甲醇或乙醇进行醇沉结晶，干燥即得到所述褐藻酸硫酸酯。进一步的：所述由人乳头瘤状病毒引起的病症包括宫颈癌、寻常疣、扁平疣、尖锐湿疣、肉类处理者乳头瘤、疣状表皮发育不良、Bowenoid丘疹病、喉乳头瘤和湿疣。进一步的：所述褐藻酸硫酸酯具有对HPV假病毒侵染的强抑制作用，且具有剂量依赖性；所述褐藻酸硫酸酯作用48h以后具有完全抑制HPV感染的作用。进一步的：所述褐藻酸硫酸酯对HPV的致病因子E6基因的表达具有抑制作用。进一步的：所述褐藻酸硫酸酯对HPV的致病蛋白E6和E7的表达具有抑制作用。进一步的：所述褐藻酸硫酸酯与水溶性基质或脂溶性基质复配形成包含褐藻酸硫酸酯的外用剂型，所述剂型包括阴道栓剂、泡腾栓剂、阴道泡腾胶囊、阴道软胶囊、阴道泡腾片、凝胶剂和海绵栓剂。进一步的：所述水溶性基质为甘油明胶、聚乙二醇、聚氧乙烯单硬脂酸酯类、泊洛沙姆中的一种或几种；所述脂溶性基质为可可豆酯、半合成或全合成脂肪酸甘油酯。进一步的：所述剂型中还添加有硬化剂、增稠剂、乳化剂、促吸收剂、着色剂、抗氧化剂或防腐剂中的一种或几种；所述硬化剂选自白蜡、鲸蜡醇、硬脂醇中的一种或几种；所述增稠剂选自氢化蓖麻油、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸铝中的一种或几种；所述乳化剂选自肥皂、阿拉伯胶、烷基苯磺酸钠中的一种或几种；所述促吸收剂选自吐温80和/或Azone；所述着色剂选自苋菜红、胭脂红、柠檬黄、可溶性靛蓝、桔黄G、伊红、品红、没蓝、苏丹蓝中的一种或几种；所述抗氧化剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、枸橼酸、叔丁基对羟基茴香醚、叔丁基对甲酚中的一种或几种；所述防腐剂选自尼泊金类、苯甲酸、山梨酸、乙醇、苯甲醇、苯乙醇中的一种或几种。本专利技术的优点和技术效果是：褐藻酸硫酸酯是由来源于褐藻中的褐藻胶经降解、化学修饰得到的一种硫酸多糖药物，它毒副作用小，不易产生耐药性。本专利技术综合应用细胞培养技术、假病毒模型、免疫学技术及分子生物学技术对褐藻酸硫酸酯抗人乳头瘤状病毒(HP本文档来自技高网...

【技术保护点】
褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用。

【技术特征摘要】
1.褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用，其特征在于：所述褐藻酸硫酸酯是褐藻酸的C2及C3位上引入硫酸酯基而成的一种硫酸多糖类化合物，重均分子量为6~100kDa，聚甘露糖醛酸含量为5~95%，聚古罗糖醛酸含量为5~95%，硫酸根取代度为5~15%。2.根据权利要求1所述的褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用，其特征在于：所述褐藻酸硫酸酯的制备方法如下：在反应器中加入甲酰胺，然后缓慢加入氯磺酸，接着加入低聚褐藻酸，低聚褐藻酸与甲酰胺的质量比1:4~12，低聚褐藻酸与氯磺酸的质量比为1:1~3；上述组分混合形成的混合物在50~90℃搅拌反应1~5h；反应结束后醇沉，过滤，洗涤，收集沉淀，沉淀用水溶解后，缓慢加入氢氧化钠溶液转化成盐，调节溶液pH至8~10；溶液用活性炭脱色，用甲醇或乙醇进行醇沉结晶，干燥即得到所述褐藻酸硫酸酯。3.根据权利要求1所述的褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用，其特征在于：所述由人乳头瘤状病毒引起的病症包括宫颈癌、寻常疣、扁平疣、尖锐湿疣、肉类处理者乳头瘤、疣状表皮发育不良、Bowenoid丘疹病、喉乳头瘤和湿疣。4.根据权利要求1-3任一项所述的褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用，其特征在于：所述褐藻酸硫酸酯具有对HPV假病毒侵染的强抑制作用，且具有剂量依赖性；所述褐藻酸硫酸酯作用48h以后具有完全抑制HPV感染的作用。5.根据权利要求1-3任一项所述的褐藻酸硫酸酯在制备预防和治疗由人乳头瘤状病毒引起的疾病的药物和保健品中的应用，其特征在于：所述褐藻酸硫酸酯对HPV的致病因...

【专利技术属性】
技术研发人员：管华诗，王世欣，王伟，李春霞，李鹏丽，王洪光，夏萱，张晓霜，
申请(专利权)人：青岛海洋生物医药研究院股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37