新B细胞细胞因子的鉴定制造技术

技术编号:13339429 阅读:234 留言:0更新日期:2016-07-13 13:24
提供涉及作为一种由活化的B细胞产生的新细胞因子IL40的组合物和方法。所述组合物包括:a)抗IL40抗体、IL40肽和IL40蛋白;b)编码IL40基因和cDNA序列的核酸;以及c)其药物组合物。所述方法包括治疗、诊断和分离技术。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】关于联邦资助研究或开发的声明本专利技术根据国立卫生研究院的资助号AI096278在政府资助下完成。政府享有本发明中的某些权利。相关申请的交叉引用本申请要求2013年11月20日提交的美国临时专利申请号61/906,855的权益,所述美国临时专利申请以引用的方式并入本文。
本专利技术关于涉及称为IL40的新细胞因子的组合物和方法。
技术介绍
细胞因子是调控免疫系统的小分泌蛋白质。它们是调控免疫应答(包括应答的类别和量级)的极其重要介质。实例包括白介素、趋化因子、肿瘤坏死因子超家族和干扰素。这些中的许多当前正变得作为免疫治疗剂加以探究。它们涉及于自身免疫疾病、癌症和其它病痛中。
技术实现思路
本专利技术的实施方案涉及称为白介素40(IL40或IL-40)的本文新细胞因子的鉴定。所述分子是一种由活化的B细胞产生的小分泌蛋白质。因此,它是活化的B细胞的生物标志物。在如全身性红斑狼疮的某些疾病中,它也被上调。因为B细胞与淋巴瘤和自身免疫疾病相关联,所以预期IL40在这些疾病的病理学中起作用,并且将为诊断或预后生物标志物。它也将通过以下方式来影响淋巴瘤的发展:影响这些癌症的发展,或致使它们对凋亡具有抗性,增强它们的生长,或有利于它们的分化。在自身免疫性方面,由病原性B细胞产生的IL40将会影响其它细胞,并且有利于与这些病状相关的炎症性应答。也涵盖使用IL40鉴定它的受体的方法。鉴定它的特异性受体是重要的,因为配体和它的受体的可用性也可被利用来鉴定这个相互作用的可用于上述适应症中的激动剂和拮抗剂。在一个方面,提供一种针对C17orf99多肽基因产物(IL40)的抗体。抗IL40抗体可为:a)IgG、IgM、IgA、IgD或IgE;b)单克隆抗体;c)Fab'、Fab、F(ab')2、单结构域抗体(sdAb)、Fv或scFv(单链Fv);d)标记的抗体;e)中和抗体;或f)a)-e)的任何组合。在另一方面,提供一种使用抗IL40抗体的方法。在所述方法中,可使用抗IL40抗体,例如:a)在检测样品中的IL40的方法中。所述方法包括在免疫检测方法中使用抗体作为用于检测IL40的检测剂来免疫检测IL40。在一些实施方案中,免疫检测方法是酶联免疫吸附测定(ELISA)、组织学分析、荧光激活的细胞分选、放射免疫测定(RIA)、免疫放射测定、免疫组织化学分析、荧光免疫测定、化学发光测定、生物发光测定、蛋白质印迹或斑点印迹。在ELISA测定中,识别给定蛋白质的两种不同表位的两种不同抗体可用于通过在比色测定中检测连接于一种抗体的底物来检测所述蛋白质。在组织学分析中,标记的抗体可用于检测呈新鲜冷冻组织形式或呈福尔马林固定的石蜡包埋样品形式的组织样品中的蛋白质。在荧光激活的细胞分选中,荧光染料标记的抗体可用于检测表达特定蛋白质的细胞。在分泌蛋白质的情况下,存在允许通过为本领域技术人员所知的程序对所述蛋白质进行细胞内染色的可用技术。在放射免疫测定中,放射性标记的蛋白质可用于通过测量竞争测定中存在的放射性的量(例如通过使用特异性抗体)来测量给定样品中存在的蛋白质的量。这些测定的变化形式涉及通过取决于特异性抗体的亲和力/亲合力的竞争测定,使用抗体/标记化合物测量给定样品中的特定蛋白质的量。在蛋白质印迹中,给定蛋白质可通过在凝胶转移之后使用特异性抗体检测,这是一种也允许技术人员知晓检测的蛋白质的分子量的方法。b)在治疗有需要的受试者的涉及IL40的疾病的方法中。所述方法包括向受试者施用治疗有效量的抗IL40抗体以中和IL40。在一些实施方案中,疾病是自身免疫疾病或淋巴瘤。c)在检测样品中的IL40的方法中。所述方法包括在针对涉及IL40的疾病的诊断或治疗诊断方法中使用抗IL40抗体作为检测剂来免疫检测IL40。存在基于使用抗体检测生理流体中可溶性蛋白质的存在的许多可用方法。在最常见方法之中的是酶联免疫测定,其中使用识别IL40的不同表位的两种不同抗体。它们中的一个被用作其中放置有生理流体的板中的捕集抗体。这个抗体被固着于板,并且“捕集”流体中存在的IL40。第二抗体被连接于酶。最后,使用由酶处理,并且通常导致显现可在专门化ELISA读取器中检测的给定颜色的底物。其它方法包括使用放射性而非酶底物来测量给定流体中存在的IL40的量的放射免疫测定。流体可从患有不同疾病的患者获得。通常,已发现活化的B细胞在各种癌症(淋巴瘤、白血病)或炎症性或自身免疫疾病(类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、斯耶格伦氏综合征(Sjogren’ssyndrome)、僵直性脊椎炎、牛皮癣、其它疾病)的发病机理中起作用。在一些实施方案中,疾病是淋巴瘤、白血病、免疫缺陷或自身免疫疾病。在特定实施方案中,自身免疫疾病是全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎或牛皮癣,并且免疫缺陷是IgA缺陷综合征。d)在纯化或分离表达IL40的细胞的亚组的方法中。所述方法包括使用抗IL40抗体作为纯化/分离剂来纯化或分离所述细胞的亚组。抗体可从杂交瘤培养物纯化。通常,上清液首先经0.45mm过滤器过滤以移除细胞碎片。优选方法涉及蛋白A/G色谱法。向A/G蛋白柱施加过滤的杂交瘤培养物将导致抗体分子以可随后通过改变pH以及从柱洗脱纯化抗体来破坏的键结合A/G蛋白。纯化抗体可接着用各种荧光染料标记,接着用于染色可在荧光激活的细胞分选仪中分析的细胞混悬液。这个程序可导致鉴定表达由抗体识别的抗原的细胞亚组。在一些实施方案中,通过荧光激活的细胞分选(FACS)纯化或分离亚组以选择各细胞亚组。在另一方面,提供一种产生抗IL40抗体的细胞,其中所述细胞是杂交瘤、重组细菌细胞、重组酵母细胞或重组哺乳动物细胞。细胞可产生任何本文所述的抗IL40抗体。此外,提供包含所述细胞的器官、组织或动物。在另一方面,提供一种包含IL40或成熟形式的IL40的一部分或完整氨基酸序列的肽或分离的蛋白质。IL40肽或蛋白可为:a)IL40的序列变体、多态性或物种对应物;b)IL40的取代、插入或缺失变体;c)IL40的非序列衍生物,其选自由糖基化修饰的IL40、化学修饰的IL40以及IL40的缀合物组成的组;d)IL40的功能活性变体;e)IL40的功能活性区段、IL40的保守区域、或IL40的非保守区域;f)IL40的融合蛋白;或g)a)-f)的任何组合。在一些实施方案中,功能性变体是IL40的激动剂或拮抗剂,并且融合蛋白是共价或非共价构建体或标记的构建体。IL40将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种针对C17orf99多肽基因产物(IL40)的抗体,其中所述抗体是:a)IgG、IgM、IgA、IgD或IgE;b)单克隆抗体;c)Fab'、Fab、F(ab')2、单结构域抗体(sdAb)、Fv或scFv(单链Fv);d)标记的抗体;e)中和抗体;或f)a)‑e)的任何组合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.11.20 US 61/906,8551.一种针对C17orf99多肽基因产物(IL40)的抗体,其中所述抗体是:
a)IgG、IgM、IgA、IgD或IgE;
b)单克隆抗体;
c)Fab'、Fab、F(ab')2、单结构域抗体(sdAb)、Fv或scFv(单链Fv);
d)标记的抗体;
e)中和抗体;或
f)a)-e)的任何组合。
2.一种检测样品中的IL40的方法,其包括在免疫检测方法中使用如权利要求1所述的
抗体作为检测剂来免疫检测IL40。
3.如权利要求2所述的方法,其中所述免疫检测方法是酶联免疫吸附测定(ELISA)、组
织学分析、荧光激活的细胞分选、放射免疫测定(RIA)、免疫放射测定、免疫组织化学分析、
荧光免疫测定、化学发光测定、生物发光测定、蛋白质印迹或斑点印迹。
4.一种治疗有需要的受试者的涉及IL40的疾病的方法,其包括向所述受试者施用治疗
有效量的如权利要求1所述的抗体以中和IL40。
5.如权利要求4所述的方法,其中所述疾病是自身免疫疾病或淋巴瘤。
6.一种检测样品中的IL40的方法,其包括在针对涉及IL40的疾病的诊断或治疗诊断方
法中使用如权利要求1所述的抗体作为检测剂来免疫检测IL40。
7.如权利要求6所述的方法,其中所述疾病是淋巴瘤、白血病、免疫缺陷或自身免疫疾
病。
8.如权利要求7所述的方法,其中所述自身免疫疾病是全身性红斑狼疮、类风湿性关节
炎或牛皮癣,并且所述免疫缺陷是IgA缺陷综合征。
9.一种肽或分离的蛋白质,其包含IL40或成熟形式的IL40的一部分或完整氨基酸序
列。
10.如权利要求9所述的肽或蛋白质,其中所述肽或蛋白质是:
a)IL40的序列变体、多态性或物种对应物;
b)IL40的取代、插入或缺失变体;
c)IL40的非序列衍生物,其选自由糖基化修饰的IL40、化学修饰的IL40以及IL40的缀
合物组成的组;
d)IL40的功能性变体;
e)IL40的功能性区段、IL40的保守区域、或IL40的非保守区域;
f)IL40的融合蛋白;或
g)a)-f)的任何组合。
11.一种治疗有需要的受试者的涉及IL40的疾病的方法,其包括向所述受试者施用治
疗有效量的如权利要求9或10所述的肽或蛋白质,其中所述肽或蛋白质是IL40拮抗剂。
12.如权利要求11所述的方法,其中所述疾病是自身免疫疾病或淋巴瘤。
13.一种治疗有需要的受试者的涉及IL40的疾病的方法,其包括向所述受试者施用治
疗有效量的IL40、或如权利要求9或10所述的肽或蛋白质,其中所述肽或蛋白质是IL40激动
剂。
14.如权利要求13所述的方法,其中所述疾病是IgA缺陷综合征、霍奇金或非霍奇金淋
巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、蕈样真菌病、套细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤或另一淋巴瘤或白
血病;类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、斯耶格伦氏综合征、桥本甲状腺炎、硬皮病、格雷
夫斯病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、原发性胆汁性硬化、自身免疫肝炎、多发性硬化症、牛
皮癣、特应性皮炎、特发性肺纤维化、过敏性肺炎、非特异性间质性肺炎或另一自身免疫疾
病。
15.一种诊断涉及IL40的疾病的方法,其包括使用如权利要求9或10所述的肽或蛋白质
作为诊断/治疗诊断方法中的靶标或样品对照。
16.如权利要求15所述的方法,其中所述疾病是淋巴瘤、自身免疫疾病、全身性红斑狼
疮、类风湿性关节炎或牛皮癣。
17.一种纯化或分离表达IL40的细胞的亚组的方法,其包括使用如权利要求1所述的抗
体作为纯化/分离剂来纯化或分离所述细胞的亚组。
18.如权利要求17所述的方法,其中通过荧光激活的细胞分选(FACS)纯化或分离所述
亚组以选择所述细胞亚组。
19.一种产生如权利要求1所述的抗体的细胞,其中所述细胞是杂交瘤、重组细菌细胞、
重组酵母细胞或重组哺乳动物细胞。
20.一种动物,其包含如权利要求19所述的细胞。
21.如权利要求10所述的肽或蛋白质,其中所述功能性变体是IL40的激动剂或拮抗剂,
并且所述融合蛋白是共价或非共价构建体或标记的构建体。
22.一种诱导免疫细胞的方法,其包括使用如权利要求9或10所述的肽或蛋白质作为活
性剂以诱导所述免疫细胞产生突触回蛋白2和/或由B细胞产生的其它IL40诱导蛋白,或诱
导所述免疫细胞的分化或成熟。
23.一种鉴定IL40的受体的方法,其包括使用如权利要求9或10所述的肽或蛋白质作为
用于结合所述IL40受体的配体。
24.一种产生如权利要求9或10所述的肽或蛋白质的细胞,其中所述细胞是重组细菌细
胞、重组酵母细胞或重组哺乳动物细胞。
25.一种动物,其包含如权利要求24所述的细胞。
26.一种核酸,其包含IL40基因或IL40cDNA的一部分或完整核苷酸序列。
27.一种包含IL40基因或IL40cDNA的一部分或完整核苷酸序列的核酸,其中所述核酸
编码如权利要求9所述的肽或蛋白质。
28.如权利要求26或27所述的核酸,其中所述核酸:
a)缀合于另一核苷酸序列、标记或化学衍生物;
b)基于所述IL40基因或IL40cDNA序列的引物、探针、反义分子或寡核苷酸;
c)连接于异源性核酸序列的重组构建体;或
d)a)-c)的任何组合。
29.如权利要求28所述的核酸,其中所述异源性核酸序列是启动子、增强子、载体或表
达载体。
30.一种治疗有需要的受试者的涉及IL40的疾病的方法,其包括向所述受试者施用治
疗有效量的如权利要求26或27所述的核酸,其中所述核酸降低IL40表达。
31.如权利要求30所述的方法,其中所述疾病是自身免疫疾病或淋巴瘤。
32.一种治疗有需要的受试者的涉及IL40的疾病的方法,其包括向所述受试者施用治
疗有效量的如权利要求26或27所述的核酸,其中所述核酸增加IL40表达。
33.如权利要求32所述的方法,其中所述疾病是IgA缺陷综合征、霍奇金或非霍奇金淋
巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、蕈样真菌病、套细胞淋巴瘤或另一淋巴瘤或白血病;类风湿性
关节炎、全身性红斑狼疮、斯耶格伦氏综合征、桥本甲状腺炎、硬...

【专利技术属性】
技术研发人员:艾伯特·兹洛特尼克彼得·海维兹万·菲·鲁阿曼达·M·伯克哈特伊琳娜·奥谢什
申请(专利权)人:加利福尼亚大学董事会
类型:发明
国别省市:美国;US

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