【技术实现步骤摘要】
一种用于伏马毒素B1灵敏检测的磁控比率荧光适配体传感器的制备方法
本专利技术涉及材料学、光分析化学、纳米生物传感等领域,特指一种用于伏马毒素B1灵敏检测的磁控比率荧光适配体传感器的制备方法。
技术介绍
伏马毒素(Fumonisin)是由串珠镰刀菌、层生镰刀菌、轮枝镰刀菌等产生的次级代谢产物,是一类由不同的多氢醇和丙三酸组成的结构类似的双酯化合物。人类迄今为止已发现了28种伏马毒素类似物,分为A、B、C和P族4类,其中在自然界中分布广泛、毒性较强的是伏马毒素B1(FumonisinB1,FB1)。FB1污染的主要是玉米及其加工产品,此外还有一些如大米、小米、高粱、牛奶、啤酒等食品。FB1可诱发人体食道癌、肝癌、胃癌的发生,并且FB1为水溶性霉菌毒素,对热稳定,在多数食品加工过程中均比较稳定。为此,许多国家制订了相应的限量标准,如欧盟规定婴幼儿玉米制品中FB1和FB2的总含量为0.2mgkg-1,玉米中的限量值为4mgkg-1;美国FDA规定玉米中FB1、FB2和FB3总量的最高限量值为2mgkg-1。玉米是人类赖以生存的主要粮食品种之一,全世界年产近5亿吨,其中我国居第二位,占总产量的20%左右。我国所生产的玉米每年除满足国内需求外,还大量出口到其他国家。因此,建立完善的伏马毒素检测手段和监控机制,及时有效地发现和控制有关伏马毒素的污染,及时采取措施,从而提高中国玉米在国际市场上的质量、信誉和品牌,保证国际贸易的顺利进行。FB1现行的检测方法主要有薄层色谱法、近红外光谱法、酶联免疫吸附法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法 ...
【技术保护点】
一种用磁控比率荧光适配体传感器灵敏检测伏马毒素B1的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1、发射绿色荧光的水溶性CdTe量子点gQDs水溶液和发射红色荧光的水溶性CdTe量子点rQDs水溶液的制备;步骤2、单分散SiO2纳米球分散液的制备;步骤3、Fe3O4@SiO2磁珠mSiO2分散液的制备;步骤4、gQDs包覆的SiO2SiO2@gQDs分散液纳米球的制备:取步骤2制备的SiO2纳米球分散液和0.02M NaCl溶液溶解的聚二烯丙基二甲基氯化铵PDDA溶液于烧杯中混合均匀,磁力搅拌反应;产物经离心分离、洗涤后,再加入步骤1中制备的gQDs水溶液,于避光条件下磁力搅拌反应,经离心分离、洗涤后,避光自然干燥,将干燥后的产物分散到蒸馏水中,得到SiO2@gQDs分散液,备用;步骤5、rQDs包覆mSiO2纳米球mSiO2@rQDs分散液的制备:取用步骤3中制备的mSiO2分散液,向其中加入聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液,机械搅拌反应;将产物磁性分离,二次水洗3次后,加入二次水将其重新分散,制得聚二烯丙基二甲基氯化铵修饰的mSiO2(简称为mSiO2‑PDDA);最后,加入rQDs水溶液机械搅 ...
【技术特征摘要】
1.一种用磁控比率荧光适配体传感器检测伏马毒素B1的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1、发射绿色荧光的水溶性CdTe量子点gQDs水溶液和发射红色荧光的水溶性CdTe量子点rQDs水溶液的制备;步骤2、单分散SiO2纳米球分散液的制备;步骤3、Fe3O4@SiO2磁珠mSiO2分散液的制备;步骤4、gQDs包覆的SiO2SiO2@gQDs分散液纳米球的制备:取步骤2制备的SiO2纳米球分散液和0.02MNaCl溶液溶解的聚二烯丙基二甲基氯化铵PDDA溶液于烧杯中混合均匀,磁力搅拌反应;产物经离心分离、洗涤后,再加入步骤1中制备的gQDs水溶液,于避光条件下磁力搅拌反应,经离心分离、洗涤后,避光自然干燥,将干燥后的产物分散到蒸馏水中,得到SiO2@gQDs分散液,备用;步骤5、rQDs包覆mSiO2纳米球mSiO2@rQDs分散液的制备:取用步骤3中制备的mSiO2分散液,向其中加入聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液,机械搅拌反应;将产物磁性分离,二次水洗3次后,加入二次水将其重新分散,制得聚二烯丙基二甲基氯化铵修饰的mSiO2(简称为mSiO2-PDDA);最后,加入rQDs水溶液机械搅拌,经磁性分离,二次水洗后,避光自然干燥,将干燥后的mSiO2@rQDs分散在二次水中,得到mSiO2@rQDs分散液,备用;步骤6、SiO2@gQDs标记的AptamerSiO2@gQDs-Aptamer荧光探针分散液的制备:取步骤4制备的SiO2@gQDs分散液,加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液和N-羟基丁二酰亚胺NHS水溶液,振荡反应,随后加入Aptamer储备液,振荡孵育过夜,反应完毕后,离心洗涤产物,将产物重新分散在Tris-HCl溶液中,得到SiO2@gQDs-Aptamer分散液,备用;步骤7、mSiO2@rQDs标记的Aptamer的互补链cDNAmSiO2@rQDs-cDNA磁性-荧光探针分散液的制备:取步骤5制备的mSiO2@rQDs的分散液,加入EDC水溶液和NHS水溶液,振荡反应,加入cDNA,振荡孵育过夜,反应完毕后,离心洗涤产物,将产物重新分散在Tris-HCl溶液中,得到mSiO2@rQDs-cDNA分散液,备用;步骤8、传感器的构建及样品的检测,包括磁控-比率荧光-靶向纳米生物复合物的制备:取步骤6制备的SiO2@gQDs-Aptamer荧光探针分散液和步骤7制备的mSiO2@rQDs-cDNA磁性-荧光探针分散液混合,进行第一次恒温振荡孵育,制得mSiO2@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO2纳米生物复合物,对产物mSiO2@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO2纳米生物复合物磁性分离、洗涤后,重新分散在Tris-HCl缓冲溶液A中,备用;对FB1标准品进行检测,建立标准曲线:取所制备的mSiO2@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO2纳米生物复合物与FB1溶液混合,进行第二次恒温振荡孵育;经磁性分离后,弃去已脱附的SiO2@gQDs,将收集得到的mSiO2@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO2纳米生物复合物洗涤后,重新分散在Tris-HCl缓冲溶液B中,设置激发波长为365nm,扫描得到荧光谱图,通过荧光强度比(Ig/Ir)/(Ig/Ir)0与FB1标准品浓度之间的对应关系建立标准曲线,其中,(Ig/Ir)和(Ig/Ir)0分别为存在与不存在FB1时,磁性收集的mSiO2@rQDs-cDNA/Aptamer-gQDs@SiO2纳米生物复合物所测得的gQDs荧光强度和rQDs荧光强度的比值;步骤9、对待测样品按照步骤8同样的方法进行检测,依据步骤8得到的标准曲线得出检测数据。2.根据权利要求1所述的一种用磁控比率荧光适配体传感器检测伏马毒素B1的方法,其特征在于,步骤1中,发射绿色荧光的gQDs水溶液和发射红色荧光的rQDs水溶液的制备方法为:称取0.0638g碲粉和0.0449g硼氢化钠置入10mL比色管中,加入4mL超纯水,通N2除氧15min后置于4℃冰箱中反应得到上清液呈紫色透明的碲氢化钠溶液;将0.1142gCdCl2·2.5H2O和75μL巯基丙酸加入到含50mL二次水的三颈瓶中,氮气氛下磁力搅拌5min,用2MNaOH调节溶液pH至8.5,迅速加入上述制备的NaHTe溶液2mL,继续搅拌30min,100℃下回流0.5h和12h,回流0.5h后得到gQDs,回流12h后得到rQDs;停止反应恢复至室温,加入100mL乙醇搅拌然后静置15min,离心后,将沉淀物避光自然干燥,再重新分散得到10mg/mL的gQDs水溶液和10mg/mL的rQDs水溶液,4℃避光保存,备用。3.根据权利要求1所述的一种用磁控比率荧光适配体传感器检测伏马毒素B1的方法,其特征在于,步骤2中,单分散SiO2纳米球分散液的制备方法为:取一个经过严格清洗的250mL单口烧瓶,分别加入80mL乙醇,4.85mL二次水和3.6mL28wt%的氨水,55℃下搅拌反应10min,然后将3.1mL正硅酸四乙酯TEOS与8mL乙醇的混合溶液迅速加入,55℃下搅拌反应4h后,停止反应;产物离心水洗后,干燥,将干燥...
【专利技术属性】
技术研发人员:钱静,华梦娟,王坤,王成全,刘倩,郝楠,
申请(专利权)人:江苏大学,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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