一种用于检测猪圆环病毒2型的试剂盒制造技术

技术编号:13330443 阅读:115 留言:0更新日期:2016-07-11 20:54
本发明专利技术涉及兽病检测领域,特别涉及猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的单克隆抗体及包含所述单克隆抗体的试剂盒。所述单克隆试剂盒包括由杂交瘤细胞系CCTCC NO:C2014199分泌产生的单克隆抗体,和/或由杂交瘤细胞系CCTCC NO:C2014198分泌产生的单克隆抗体。本发明专利技术还提供了一种由杂交瘤细胞系CCTCC NO:C2014199分泌产生的单克隆抗体和一种由杂交瘤细胞系CCTCC NO:C2014198分泌产生的单克隆抗体,以及一种杂交瘤细胞系CCTCC NO:C2014199和一种杂交瘤细胞系CCTCC NO:C2014198。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及兽病检测领域,特别涉及猪圆环病毒2型的核衣壳蛋白的单克隆抗体及其试剂盒。
技术介绍
猪圆环病毒(Circoviridae,Circovirus,Porcinecircovirus,PCV)是迄今发现的一种最小的动物病毒,已知的PCV有两个血清型,即PCV1和PCV2,其中PCV1没有致病性,PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PWMS)的主要病原,它不仅可以引起断奶仔猪发生衰竭、死亡,还与仔猪A2型先天震颤(A2CT)、猪繁殖障碍、猪皮炎肾炎综合征(PDNS)、增生性坏死性肺炎(PNP)和呼吸道疾病综合征(PRDS)有关,这些疾病统称为猪圆环病毒病(PCVD)。这些疾病的广泛流行严重影响了养猪业的发展,给许多国家和地区带来了巨大的损失。更为严重的是PCV2的感染可以降低抵抗力和免疫应答反应,引起其它各种病原微生物的继发感染,造成的间接损失难以估计。目前,PCV2已成为严重阻碍我国养猪业发展的重要病原之一。PCV2及其相关的猪的疾病已在世界范围内发生和流行,死亡率10%~30%不等,较严重的地区,猪场在爆发本病时死亡淘汰率高达40%,严重影响了我国养猪业的健康发展。而且,临床上PCV2的感染普遍存在,但多数表现为隐性感染和亚临床感染,常易被忽视,在猪群受到应激反应后,可能导致PCV2的爆发,因此,做好PCV2病原学的诊断和监测,对控制PCV2的感染具有重要意义。为了更为准确的诊断PCV2,亟需开发出一种新的检测方法。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足,本专利技术提供了抗猪圆环病毒2型(PCV2)的核衣壳蛋白(Cap)的单克隆抗体及检测猪圆环病毒2型的试剂盒,所述试剂盒选自ELISA检测试剂盒或酶免疫层析检测试剂盒。本专利技术还提供了一种用于检测猪圆环病毒2型试剂盒,所述试剂盒包括由杂交瘤细胞系CCTCCNO:C2014199分泌产生的单克隆抗体,和/或由杂交瘤细胞系CCTCCNO:C2014198分泌产生的单克隆抗体。也就是说,所述试剂盒中可单独的包括上述两种单克隆抗体,也可以同时包括上述两种单克隆抗体。在本专利技术中,经过专利技术人对筛选出的特异性强、亲和力常数高的单克隆抗体的配对研究发现,当同时包括上述两种单克隆抗体时,对PCV2的检测效果更佳。但是,当抗体组合配对使用时,并不是简单地将两个亲和力常数高的单克隆抗体配对后便能达到优良的检测效果,因为其中受限的因素很多,包括已知的或未知的因素,例如两个单克隆抗体配对使用时,要考虑两个单克隆抗体之间、两个单克隆抗体分别与抗原之间的相互关系,甚至包括所使用的单克隆抗体是否与非PCV2存在非特异性的反应和显色本底均会影响单克隆抗体的配合使用。本申请的所述两个单克隆抗体的配合使用,在优化后的条件下,ELISA试剂盒的灵敏度能够达到1.0ng/mL,酶免疫层析检测试剂盒的灵敏度能够达到2.0ng/mL。也就是说,两种试剂盒的灵敏度均显著地高于检测所述PCV2的同类别试剂盒的灵敏度。并且两种试剂盒的特异性达到了100%。这充分说明了包括所述两个单克隆抗体的试剂盒的性能显著优于现有技术中的试剂盒。在本专利技术中,由杂交瘤细胞系CCTCCNO:C2014199分泌产生的单克隆抗体命名为2F8,由杂交瘤细胞系CCTCCNO:C2014198分泌产生的单克隆抗体命名为3G12。术语“猪圆环病毒2型Cap全蛋白”是指猪圆环病毒2型的核衣壳蛋白全蛋白(Capsidprotein,Cap),是一种单体磷酸化的多肽,分子量大小约为27.8kDa,是PCV2的主要免疫原性蛋白(Nawagitgul.P,Morozov.I,Bolin.SR,etal.Openreadingframe2ofporcinecircovirustype2encodesamajorcapsidprotein.JGenVirol.,2000,81(Pt9):2281-2287);该全蛋白具有特异性,且可以自我装配成病毒衣壳颗粒(陈燕凌等,猪圆环病毒2型ORF2基因及其编码蛋白的研究概况,湖北畜牧兽医,2013,34(1):78-81)。术语“单克隆抗体”是指获自基本上同源的抗体群的抗体,即组成该群体的抗体个体都相同,除了可能存在少量可能的自发突变。因此,修饰语“单克隆”是指该抗体的性质不是离散抗体的混合物。优选地,所述单克隆抗体包括单价的或是单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物,也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。术语“抗体”应该解释为涵盖具有所需特异性的结合结构域的任意特异性结合因子。因而,这个术语涵盖了与之同源的抗体片段、衍生物、人源化抗体以及抗体的功能等同物和同源物,也包括含有抗原结合结构域的任何多肽,无论是天然的还是合成产生的。抗体的实例是免疫球蛋白亚型(如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)及其亚型亚类;也可以是包含抗原结合结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd;和双链抗体(diabodies)。融合至另一多肽的、包含抗原结合结构域的嵌合体分子或者等同物也包括在其中。嵌合抗体的克隆与表达在EP.A.0120694和EP.A.0125023中描述。术语“抗体”可以通过许多方式修饰,可用DNA重组技术来产生保留原来抗体特异性的其它抗体或嵌合分子。这种技术可以包括将编码抗体的免疫球蛋白可变区或互补性决定区(CDRs)的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区。参见,EP.A.184187,GB2188638A或EP.A.239400。还可以对杂交瘤细胞或产生抗体的其它细胞进行遗传突变或其它改变,这可以改变或者不改变所产生抗体的结合特异性。用于本专利技术的“单克隆抗体”可用杂交瘤方法制得,因为编码本专利技术鼠源化抗体的DNA序列可用本领域技术人员熟知的常规手段,如根据本专利技术公开的氨基酸序列人工合成或用PCR法扩增得到,因而也可用重组DNA方法,可用本领域熟知的各种方法将该序列连入合适的表达载体中。最后,在适合本专利技术抗体表达的条件下,培养转化所得的宿主细胞,然后本领域技术人员应用熟知的常规分离纯化手段纯化得到本专利技术的单克隆抗体。在一个具体的实施方式中,所述试剂盒为ELISA检测试剂盒。在一个具体的实施方式中,所述ELISA检测试剂盒中还包括样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液、阳性猪血清对照以及阴性猪血清对照。在一个具体的实施方式中,所述ELISA检测试剂盒中的所述样品稀释液为含有脱脂奶的磷酸盐缓冲液,优选为含有10%(W/V)脱脂奶的磷酸盐缓冲液;所述洗涤液为含有Tween-20的磷酸盐缓冲液,优选为含有0.05%(V/V)Tween-20的磷酸盐缓冲液;所述显色液包括显色液A和显色液B,所述显色液A含3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)20mg、无水乙醇10ml,并用ddH2O定容至100ml;所述显色液B含柠檬酸2.1g、无水Na2HPO42.82g、0.75%(V/V)的过氧化氢尿素0.64ml,并用ddH2O定容至100ml;所述终止液为2mol/L本文档来自技高网...
一种<a href="http://www.xjishu.com/zhuanli/52/CN105717293.html" title="一种用于检测猪圆环病毒2型的试剂盒原文来自X技术">用于检测猪圆环病毒2型的试剂盒</a>

【技术保护点】
一种用于检测猪圆环病毒2型的试剂盒,所述试剂盒包括由杂交瘤细胞系CCTCC NO:C2014199分泌产生的单克隆抗体,和/或由杂交瘤细胞系CCTCC NO:C2014198分泌产生的单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测猪圆环病毒2型的试剂盒,所述试剂盒包括由杂交瘤细胞系CCTCC
NO:C2014199分泌产生的单克隆抗体,和/或由杂交瘤细胞系CCTCCNO:C2014198分
泌产生的单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒为ELISA检测试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还包括样品稀释液、
洗涤液、显色液、终止液、阳性猪血清对照以及阴性猪血清对照。
4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒为酶免疫层析检测试剂
盒,其包括缓冲液供应单元和检测单元,所述缓冲液供应单元用于将底物缓冲液供给所述
检测单元。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述缓冲液供应单元通过展开液垫
将底物缓冲液供给所述检测单元;所述展开液垫的第一端与缓冲液供应单元接触,所述展
开液垫的第二端与所述检测单元的第一端接触。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述检测单元包括:
基板;和在基板上依次设置的底物供应区、样品供应区和检测区;
所述底物供应区包括底物垫,所...

【专利技术属性】
技术研发人员:田克恭李凡
申请(专利权)人:洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司
类型:发明
国别省市:河南;41

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