流感疫苗制造技术

本发明专利技术涉及单价流感疫苗制剂和针对流感疾病进行免疫的接种方式、它们在药物中的用途，尤其是它们在增加对各种抗原的免疫响应中的用途，和制备方法。尤其是，本发明专利技术涉及单价流感免疫原性组合物，该组合物包含与水包油乳液佐剂组合的流感抗原或其抗原性制品，所述流感抗原或其抗原性制品得自流感病毒株，毒株与大流行爆发相关或具有与大流行爆发相关的潜力，水包油型乳液佐剂包括可代谢的油、甾醇或生育酚例如α生育酚、和乳化剂。

【技术实现步骤摘要】
本申请是以下申请的分案申请：申请日：2006年10月27日；申请号：200680055376.6；专利技术名称：同上。
本专利技术涉及流感疫苗制剂和用于免疫对抗流感疾病的接种方案、其在药物中的用途，尤其是其在增大对各种抗原的免疫应答方面的用途，并涉及制备方法。具体地说，本发明涉及单价流感免疫原性组合物，该组合物包含与水包油乳液佐剂组合的、低量的流感病毒抗原或其抗原性制品，所述流感病毒抗原或其抗原性制品得自流感病毒株，毒株与大流行爆发相关或具有与大流行爆发相关的潜力。
技术介绍
流感病毒是世界上最普遍存在的病毒之一，既可感染人类，也可感染家畜。流感引起显著的经济负担、发病率乃至死亡率。流感病毒是RNA包膜病毒，颗粒的直径大小约为125nm。流感病毒的基本组成为：内部为与核蛋白结合的核糖核酸(RNA)的核衣壳(nucleocapsid)或核心，外部包绕着脂质双层结构和外层糖蛋白的病毒被膜。病毒被膜内层主要由基质蛋白组成，而外层主要是宿主来源的脂类物质。流感病毒包含两种表面抗原：糖蛋白神经氨酸酶(NA)和血细胞凝集素(HA)，它们作为10-12nm长的刺突显露在颗粒表面上。就是这些表面蛋白、尤其是血细胞凝集素，决定了流感亚型的抗原特异性。病毒株是依据以下分类的：宿主物种的起源、地理位置和分离的年代，序列号和对于流感A，依据亚型HA和NA的血清学性质。对于甲型流感病毒，已经确定了16个HA亚型(H1-H16)和9个NA亚型(N1-N9)[WebsterRG等人，EvolutionandecologyofinfluenzaAviruses.Microbiol.Rev.1992；56:152-179；FouchierRA等人，CharacterizationofaNovelInfluenzaAVirusHemagglutininSubtype(H16)ObtainedfromBlack-HeadedGulls.J.Virol.2005；79:2814-2822)。从1918年以来，已经从水禽中取得了所有HA和NA亚型的病毒，但只有三个HA亚型(H1、H2和H3)和两个NA亚型(N1和N2)在人类种群中形成了稳定的族系。对于乙型流感病毒(B)，只识别了一个HA的亚型和一个NA的亚型。甲型流感病毒(A)连续地进行演变和经受了抗原性的变化[WileyD,SkehelJ.Thestructureandthefunctionofthehemagglutininmembraneglycoproteinofinfluenzavirus.Ann.Rev.Biochem.1987；56:365-394]。由于缺乏病毒RNA聚合酶的有效校正，导致高比例(rate)转录错误，这可以在表面糖蛋白上产生氨基酸取代基。这称为“抗原性漂移”。链段化的病毒基因组可提供第二类抗原变异。如果两个流感病毒同时感染宿主细胞，称为“抗原性转变”的遗传重组可以产生具有新表面或内部蛋白的新病毒。这些抗原性改变叫做‘漂移’和‘转变’，是不可预见的，由免疫学观点看可能具有显著的影响，因为它们最终导致出现新流感株，能使病毒逃逸免疫系统，几乎每年都引起众所周知的流行病。这两种遗传修饰引起对人类流行病具有责任的新病毒变体。HA是确定不同流感株的血清学特异性的最重要抗原。此75-80kD的蛋白包含众多的抗原决定簇，其中几个位于在不同毒株中经历序列改变的区域中(毒株特异性决定簇)，其余的位于许多HA分子共有的区域中(共同决定簇)。流感病毒几乎每年冬天都引起大流行，甲(A)型或乙(B)型病毒的感染率在6周的时间段内高达40％。流感感染产生各种病症，由无症状的感染至轻微的上呼吸道感染到严重的病毒性肺炎。典型的流感大流行引起肺炎和下呼吸道疾病的发病率增加，证据是住院率或死亡率增加。疾病的严重性主要由宿主的年龄、其免疫状况和感染部位决定。65岁和以上的老年人尤其易受攻击，占发达国家所有流感相关死亡的80-90％。患有基础性慢性疾病的个体也非常有可能经历这种并发症。幼儿也可能患严重疾病。因此，这些群体尤其需要受保护。除了这些‘风险’群体以外，卫生当局还推荐对卫生保健者进行预防接种。接种对控制每年的流感大流行起关键作用。目前可用的流感疫苗是失活流感疫苗或减毒活流感疫苗。失活流感疫苗由三种可能形式的抗原制备物组成：失活全病毒、其中纯化的病毒颗粒被溶解脂质包膜的去污剂或其它试剂破坏的亚病毒体(所谓的“裂解疫苗”)或纯化的HA或NA(亚单位疫苗)。这些失活疫苗是肌内(i.m.)或鼻内(i.n.)给予的。所有种类的流行病使用的流感疫苗通常都是三价疫苗。一般来说，它们含有的抗原得自两种甲型流感病毒株和一种乙型流感病毒株。据单向放射免疫扩散法(SRD)的检测(J.M.Wood等：Animprovedsingleradialimmunodiffusiontechniquefortheassayofinfluenzahaemaggiutininantigen:adaptationforpotencydeterminationofinactivatedwholevirusandsubunitvaccines.J.Biol.Stand.5(1977)237-247；J.M.Wood等,InternationalcollaborativestudyofsingleradialdiffusionandImmunoelectrophoresistechniquesfortheassayofhaemaggiutininantigenofinfluenzavirus.J.Biol.Stand.9(1981)317-330)，在大多数情况下，标准0.5ml注射剂量含有每种毒株的15μg血细胞凝集素抗原组分。每个季节加入到流感疫苗中的流感病毒株由WHO协同国家卫生管理局以及疫苗生产商共同确定。目前可用的流感疫苗被认为在所有年龄组都是安全的(DeDonato等,1999,Vaccine,17,3094-3101)。但是，很少有证据表明当前的流感疫苗在2岁以下的小孩中有作用。而且，预防典型的已确认流感疾病的疫苗效力其报告比率对老年人为23-72％，这显著低于对较年轻成年人所报告的60-90％有效率(Govaert,1994,J.Am.Med.Assoc,21,166-1665；Gross,1995,AnnIntern.Med.123,523-527)。业已表明，流感疫苗的有效性与针对病毒株的血凝反应抑制(HI)抗体的血清滴度相关，几个研究已发现较年长的成年人在流感免疫后表现出的HI滴度低于较年轻成年人本文档来自技高网...

【技术保护点】
单价流感疫苗组合物，其包含与佐剂组合的低量流感病毒抗原或抗原性制品，所述流感病毒或其抗原性制品得自流感病毒菌株，该流感病毒菌株与大流行爆发相关或具有与大流行爆发相关的潜力，其中低抗原数量每剂量不超过15μg的血细胞凝集素(HA)，和其中所述佐剂是水包油乳液，其包含可代谢油、甾醇或生育酚和乳化剂。

【技术特征摘要】
2006.09.15 GB 0618195.2;2006.09.27 GB 0619090.4;201.单价流感疫苗组合物，其包含与佐剂组合的低量流感病毒抗原或抗原性制品，所述
流感病毒或其抗原性制品得自流感病毒菌株，该流感病毒菌株与大流行爆发相关或具有与
大流行爆发相关的潜力，其中低抗原数量每剂量不超过15μg的血细胞凝集素(HA)，和其中
所述佐剂是水包油乳液，其包含可代谢油、甾醇或生育酚和乳化剂。
2.按照权利要求1的组合物，其中所述生育酚是α-生育酚。
3.按照权利要求1或权利要求2的组合物，其中所述可代谢的油是鲨烯。
4.按照权利要求1至3的任一项的组合物，其中所述可代谢的油是以所述免疫原性组合
物的总体积的0.5％至20％的量存在的。
5.按照权利要求1至4的任一项的组合物，其中所述可代谢的油是以所述免疫原性组合
物的总体积的1.0％至10％的量存在的。
6.按照权利要求1至5的任一项的组合物，其中所述可代谢的油是以所述免疫原性组合
物的总体积的2.0％至6.0％的量存在的。
7.按照权利要求1至6的任一项的组合物，其中所述生育酚或α-生育酚是以所述免疫原
性组合物的总体积的1.0％至20％的量存在的。
8.按照权利要求1至7的任一项的组合物，其中所述生育酚或α-生育酚是以所述免疫原
性组合物的总体积的1.0％至5.0％的量存在的。
9.按照权利要求1至8的任一项的组合物，其中鲨烯∶生育酚或鲨烯∶α生育酚的比例等
于或小于1。
10.按照权利要求1至9的任一项的组合物，其中所述乳化剂是Tween80。
11.按照权利要求1至10的任一项的组合物，其中所述乳化剂是以所述免疫原性组合物
的0.01至5.0％重量(w/w)的量存在的。
12.按照权利要求1至11的任一项的组合物，其中所述乳化剂是以所述免疫原性组合物
的0.1至2.0％重量(w/w)的量存在的。
13.按照权利要求1至12的任一项的组合物，其中HA抗原的量不超过每剂量10μg。
14.按照权利要求13的组合物，其中HA抗原的量每剂量不超过8μg或4μg或2μg。
15.按照权利要求12至14的任一项的组合物，其中HA抗原的量在每剂量1-7.5μg或1-5μ
g之间。
16.按照权利要求15的组合物，其中HA抗原的量包含每种菌株2.5至7.5μg之间的HA。
17.按照权利要求1至16的任一项的组合物，其中所述大流行性流感病毒株选自∶H5N1，
H9N2，H7N7，H2N2，H7N1和H1N1。
18.按照权利要求17的组合物，其中所述大流行性流感病毒株选自∶H5N1，H9N2，H7N7，
H2N2，H7N1和H1N1。
19.按照权利要求1至19的任一项的组合物，其中抗原或抗原组合物是下列形式：纯化
的全流感病毒，无活性流感病毒，或流感病毒的亚单位组份。
20.按照权利要求19的组合物，其中所述无活性流感病毒是裂解流感病毒。
21.按照权利要求1至20的任一项的组合物，其中所述流感抗原或抗原性组合物源自于
细胞培养物或在胚胎期的卵中制备。
22.权利要求1至20的任一项所要求的组合物在药物中的用途。
23.一种试剂盒，其包括：包含低数量流感病毒抗原或其抗原性制品的单元和包含权利
要求1至12的任一项所定义的水包油佐剂的单元。
24.按照权利要求23的试剂盒，其中所述抗原是HA。
25.按照权利要求24的试剂盒，其中所述HA的数量如权利要求1或权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：EJ哈农，J斯蒂芬尼，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE