结合β淀粉状蛋白的环状肽及其用途制造技术

本发明专利技术涉及肽，其包含至少一种与β淀粉状蛋白物类结合的肽，其中所述肽具有以环化形式存在的氨基酸序列。公开了该肽在医药中，特别是用于治疗阿尔茨海默症的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及结合β淀粉状蛋白的环状肽及其用途。现有技术由DE69930164T2已知内含肽介导的肽环化。由DeMattos等人（DeMattos,R.B.,Bales,K.R.,Cummins,D.J.,Dodart,J.-C.,Paul,S.M.,Holtzman,D.M.(2001).Peripheralanti-AβantibodyaltersCNSandplasmaAβdearanceanddecreasesbrainAβburdeninamousemodelofAlzheimer'sdisease.PNAS,第98卷,第8850-8855页）已知用于治疗阿尔茨海默痴呆症的抗Aβ定向抗体。但是此外不存在用于治疗阿尔茨海默痴呆症（AD，拉丁语MorbusAlzheimer）的根原性（urs?chlich）有效药物。所用药物在最佳情况下能够缓和某些症状，但是不能减慢，更不用说停止疾病的进展。存在一系列物质，其能够在动物试验中在预防，但不一定在治疗阿尔茨海默痴呆症方面获得成功。阿尔茨海默疾病的特征是β淀粉状蛋白-肽（A-β肽、Aβ或Aβ肽）的细胞外沉积物。通常在AD患者的脑中死后发现斑块式A-β肽沉积。因此各种形式的A-β肽例如原纤维导致该疾病的产生和进展。此外，多年来将可自由扩散的小的A-β寡聚物视为AD产生和进展的主要原因。A-β单体在我们体内不断产生且本身也许不具毒性。推测的是，A-β单体是否依据其最终通过在体内形成和降解速率得到的浓度，随机地并因此随着年龄增长越来越可能自发地构成A-β寡聚物。一经产生的A-β寡聚物可通过类似于朊病毒的机理增多并最终导致疾病。目前存在以不同方式例如通过γ分泌酶抑制或调节而减小A-β单体浓度的某些物质、结合A-β的抗体等，这明显足以在动物试验（在此在疾病病症完全爆发之前，大多已治疗动物）中成功地起预防性作用。在II和III阶的人体临床研究中，仅允许治疗确诊阿尔茨海默痴呆症的人。对此，迄今所有这些物质都失败。这可能是因为在此在疾病开始后A-β单体浓度的少许或中等减小不再足以阻止产生越来越大量的A-β寡聚物。迄今不能够在病症爆发之前诊断阿尔茨海默痴呆症。目前，阿尔茨海默痴呆症主要通过对已经遭受痴呆症状的人进行神经心理学测试来识别。此外，其它疾病如创伤可通过各种检验方法排除。但是已知A-β寡聚物和时间上此后形成的斑块在出现症状之前最多20年就在患者脑中产生并造成不可逆损伤。对患者静脉内注射并在穿过血脑障壁之后与A-β寡聚物和斑块结合的分子探针能够借助成像方法可见并因此实现早期确诊阿尔茨海默痴呆症。存在的结合A-β的物质的缺点因此是亲和性不足以阻止A-β寡聚物增多。缺点还在于，不存在用于体内成像法的专门与A-β物类结合并使其可见的探针。因为A-β寡聚物在病史中起如此重要和早期的作用，这正是希望的。专利技术目的本专利技术的目的是提供用于以下用途的肽：A)通过阻止形成毒性A-β寡聚物或聚集物和/或将其去毒化，对阿尔茨海默症进行病因治疗，和/或B)通过提供用于体内成像的探针，可靠地诊断阿尔茨海默痴呆症。在下文中，术语“A-β”、“Beta淀粉状蛋白”、“β淀粉状蛋白”和“Aβ”相互同义使用。目的的实现方式本专利技术的目的通过根据权利要求1的本专利技术的肽和通过根据从属权利要求的该肽的试剂盒、组合物、探针和用途来实现。对此的有利的实施方案分别显现在基于其的权利要求中。专利技术描述本专利技术的肽包含至少一种与β淀粉状蛋白物类结合的肽，例如由现有技术已知的D3，其中所述肽具有能够使其与A-β结合的线性氨基酸序列，并且通过使所述肽经由共价键合以环化形式存在，所述性能保持或增强。所述肽D3及其线性序列由公开文献WO02/081505A2已知。本专利技术的肽有利地基本上由D-对映异构体氨基酸组成。在本专利技术中，术语“基本上由D-对映异构体氨基酸组成”表示所用氨基酸至少60%，优选75%、80%，特别优选85%、90%、95%，特别是96%、97%、98%、99%、100%由D-对映异构体氨基酸构成。在本专利技术的一个实施方案中，本专利技术的环化肽以最高1μM，优选800、600、400、200、100、10nM，特别优选1000、900、800、700、600、500、400、300、200、100pM，特别优选最高50pM，最优选最高25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1pM直至优选亚pM的解离常数（KD-值）结合β淀粉状蛋白物类，其中可取各个中间值。所述环化肽的解离常数（KD-值）在此在本专利技术的一个有利的实施方案中相比于结合性的具有线性序列的肽，但特别是优选相比于可衍生出该环状肽的线性肽的每种而言是有利地减小的。与此相关联的是本专利技术肽的改进的性能，如结合亲和性和降解和/或阻止形成毒性β淀粉状蛋白物类的有效性。但是特别地，这不仅仅涉及在所述A-β（单体、寡聚物和原纤维）的高亲和性位点的较低KD值。本专利技术的肽有利地具有这样的氨基酸序列，其中线性分子例如通过缩合反应例如通过第一与最后氨基酸的共价键合而环化。当然，存在其它的环化可能方式，例如通过其它氨基酸相互键合。仅示例性地提及第二氨基酸与最后氨基酸的键合。每种可能的其它键合同样可设想。在所述肽的第一和最后氨基酸相互键合的情况下，有利地导致在肽链（氨基酸序列）中不存在开放末端。该措施此外导致，具有线性氨基酸序列且其在环化之后得到不再可区分的相同氨基酸次序的所有肽就此相同。实例：已知的肽D3的线性氨基酸序列是rprtrlhthrnr。通过N端氨基和C端羧基之间的酰胺键键合的相应的环化肽“cD3”不再能与环化肽prtrlhthrnrr、rtrlhthrnrrp、trlhthrnrrpr、rlhthrnrrprt、lhthrnrrprtr、hthrnrrprtrl、thrnrrprtrlh、hrnrrprtrlht、rnrrprtrlhth、nrrprtrlhthr或rrprtrlhthrn区分。环化肽的制备是现有技术，并可以例如根据如DE102005049537A1中所述的方法来进行。通过肽的第一和最后氨基酸的环化有利地导致，不再存在肽链的“开放”末端，其通常是细胞、动物或人中例如经由氨肽酶和羧肽酶的肽降解活性攻击点。环化肽在动物和人中有利地具有比相应线性肽更大的稳定性。但是，单独的该效果对本专利技术不是决定性的，解释如下。此外如已表明，这仅适用于其中线性肽的相应两个末端相互键合的头尾或尾头环化情况。相反地在本专利技术中认识到，相比于可衍生出该环化肽的结合性的线性肽而言，本专利技术的环化肽以更高的亲和性与Aβ物类，更确切地说还尤其与特别毒性的β淀粉状蛋白寡聚物结合。也就是说，在环化肽的情况下的KD值比在线性肽的情况下更低，并且特别是比在可衍生出所述环化肽的线性肽的情况下更低。因此在本专利技术的另一个优选的实施方案中，本专利技术环化肽的结合亲和性相比于可衍生出其的线性肽而言提高1%、2、3、4、5、6、7、8、9，特别是10%、11、本文档来自技高网...

【技术保护点】
肽，其包含至少一种与β淀粉状蛋白物类结合的肽，其中所述肽具有能够使其与A‑β结合的线性氨基酸序列，并且通过使所述肽经由共价键合以环化形式存在，所述性能保持或增强。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.09.26 DE 102013016002.21.肽，其包含至少一种与β淀粉状蛋白物类结合的肽，其中所述肽具有能够使其与A-β结合的线性氨基酸序列，并且通过使所述肽经由共价键合以环化形式存在，所述性能保持或增强。
2.根据权利要求1的肽，其特征在于，其基本上由D-对映异构体氨基酸组成。
3.根据前述权利要求任一项的肽，其特征在于，所述环化肽具有相比于可衍生出其的线性肽而言更高的与β淀粉状蛋白物类的结合亲和性。
4.根据前述权利要求任一项的肽，其特征在于，所述环化肽在阻止形成β淀粉状蛋白寡聚物和/或将其去毒化和/或消除时具有相比于可衍生出其的线性肽而言更高的有效性。
5.根据前述权利要求任一项的肽，其特征在于，其以最高1μM，优选800、600、400、200、100、10nM，特别优选1000、900、800、700、600、500、400、300、200、100pM，特别优选最高50pM，最优选最高20pM，优选亚pM的解离常数（KD-值）结合β淀粉状蛋白寡聚物。
6.根据前述权利要求任一项的肽，其特征在于，其不具有所述肽链的开放末端。
7.根据前述权利要求任一项的肽，其特征在于，其由于缺少所述肽链中的开放末端，在动物和人中是药学上特别稳定的。
8.根据前述权利要求任一项的肽，其在环化肽内的任意位置处具有或不具有一个或多个连接物基团。
9.根据前述权利要求任一项的肽，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：D维利博尔德，O布雷纳，
申请(专利权)人：于利奇研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE