一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法技术

本发明专利技术公开一种从柑橘皮中同步分离纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，步骤一、将柑橘皮干燥并磨粉；步骤二、用无水乙醇浸提预处理后的原料，减压浓缩得到总酯萃取物；步骤三、将所述总酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液，再向萃取物溶液中加入KOH-乙醇溶液进行皂化反应，然后进行萃取，最后水洗并减压浓缩；步骤四、采用色谱法分离纯化，收集与标准品一致的洗脱液；步骤五、首先选用正己烷-丙酮对所述洗脱液的浓缩物进行双溶剂法结晶，结晶出豆甾醇晶体，再选用乙醚-甲醇进行结晶，结晶出β-隐黄素晶体。采用本发明专利技术的一种从柑橘皮中同步分离纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，能同时从柑橘皮中提取出β-隐黄素和豆甾醇，方法简单实用，分离效果好，其中β-隐黄素的纯度达98.48％。

【技术实现步骤摘要】
一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法
本专利技术涉及从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的技术工艺和参数。
技术介绍
β-隐黄素是类胡萝卜素中叶黄素的一种，具有抗癌、抗氧化、抑制骨质疏松等多种生理功能，结构式如下：其主要存在于高等植物、真菌、蓝藻等中；近期研究表明，β-隐黄素还是一种良好的维生素A前体物质。植物甾醇是一种存在于植物中的天然活性物质，是植物体构成细胞膜的成分之一，也是多种激素、维生素D及甾体化合物合成的前体，具有抗癌、抗炎、抗氧化、降低血脂和胆固醇、减少冠心病发生等生理功能。豆甾醇是植物甾醇的典型代表之一，结构式如下：其主要存在各类植物及油脂脱臭馏出物中。豆甾醇除具有植物甾醇的一般药理特性外，还主要用于合成各种激素及维生素D3，被广泛应用于生物及医药行业。由于柑橘皮来源容易且成本较低，从橘皮中提取天然β-隐黄素成为获取β-隐黄素的主要途径；柑橘果皮中除含有果胶、纤维素、色素外，还含有黄酮、甾醇等生物活性物质，但目前关于从皮渣中提取豆甾醇的研究鲜见报道。以下文献中所记载的内容，可以作为β-隐黄素和豆甾醇的评判依据：1、刘玉朋.红薯茎叶化学成分的提取分离与结构鉴定[D].吉林大学,2013；2、刘志华,杨志学.马蹄莲中植物甾醇成分的分离与结构鉴定[J].中国药师,2007,10期:978-979.DOI:doi:10.3969/j.issn.1008-049X.2007.10.015；3、井凤,王丽,徐双双,等.辣椒中β-隐黄质的分离制备[J].食品科学,2013,第6期:10-13；4、Khachik,F,Chang,ANGana,A,Mazzola,E.Partialsynthesisof(3R,6'R)-alpha-cryptoxanthinand(3R)-beta-cryptoxanthinfrom(3R,3'R,6'R)-lutein[J].JournalofNaturalProducts,2007,70(2):220-226.
技术实现思路
本专利技术提供一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，可同时获得高纯度的β-隐黄素和豆甾醇。技术方案如下：一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，其关键在于包括以下步骤：步骤一、将柑橘皮干燥并磨粉；步骤二、用无水乙醇浸提预处理后的原料，减压浓缩得到总酯萃取物；步骤三、首先将所述总酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液，再向萃取物溶液中加入KOH-乙醇溶液进行皂化反应，皂化反应完成后进行萃取，最后水洗并减压浓缩；步骤四、采用色谱法分离纯化，以β-隐黄素标准品为对照，收集同时含有甾醇及β-隐黄素的洗脱液；步骤五、将步骤四中得到的洗脱液进行浓缩，得到浓缩物；步骤六、首先选用正己烷-丙酮对步骤四中得到的洗脱液的浓缩物进行双溶剂法结晶，结晶出豆甾醇晶体，再将上述去除豆甾醇晶体后的洗液进行再次浓缩，得到主要含β-隐黄素的浓缩物，最后选用乙醚-甲醇进行结晶，便可结晶出β-隐黄素晶体。上述步骤二中，在38～45℃的条件下对柑橘皮粉进行浸提。上述步骤三中，所述萃取物溶液的质量浓度为0.046～0.056％，所述KOH-乙醇溶液的质量浓度为8～12％，所述萃取物溶液与KOH-乙醇溶液的体积比为1:1，皂化时间为12h。上述步骤三中，皂化反应完成后，加入等体积的正己烷进行萃取，分离得到正己烷相，再用等体积的质量浓度为0.5％的NaCl水溶液水洗正己烷相，最后减压浓缩。上述步骤四中，采用硅胶柱层析分离纯化，采用正己烷湿法装柱，采用正己烷：丙酮：甲醇＝92.5:7:0.5的体积比等度洗脱，并用薄层色谱法检测。上述步骤六中，结晶出豆甾醇晶体后，用正己烷清洗晶体，直至晶体无色；再将溶液进行浓缩干燥，最后选用乙醚-甲醇对干燥后的物质进行结晶，得到β-隐黄素晶体，并用甲醇清洗晶体，直至甲醇清洗液无色为止。上述步骤四中薄层色谱的条件为：展开剂为石油醚:乙醚＝7:3，显色剂为10％硫酸-无水乙醇，95℃烘烤2min。有益效果：采用本专利技术的一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，能同时从柑橘皮中提取出β-隐黄素和豆甾醇，方法简单实用，分离效果好，分离产物纯度高，适合工业化生产。附图说明图1为本专利技术得到的流程图；图2为本专利技术得到的豆甾醇的红外光谱图；图3为本专利技术得到的豆甾醇的1H-NMR谱图；图4为本专利技术得到的豆甾醇的13C-NMR谱图；图5为本专利技术得到的β-隐黄素的1H-NMR谱图；图6为β-隐黄素标准品的高效液相色谱图；图7为本专利技术得到的β-隐黄素的高效液相色谱图；图8本专利技术得到的β-隐黄素的显微照片；图9本专利技术得到的豆甾醇的显微照片。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。一种从柑橘皮中同步分离纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，包括以下步骤：步骤一、将柑橘皮于40℃的温度条件下干燥并磨粉；步骤二、在38～45℃的水浴锅中，用无水乙醇浸提预处理后的原料2次，合并提取液，减压浓缩得到总酯萃取物；步骤三、首先将所述总酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液，该萃取物溶液的质量浓度为0.046～0.056％，再向萃取物溶液中加入KOH-乙醇溶液进行皂化反应，该KOH-乙醇溶液的质量浓度为8～12％，所述萃取物溶液与KOH-乙醇溶液的体积比为1:1，皂化时间为12h；皂化反应完成后，加入等体积的正己烷进行萃取，分离得到正己烷相，再用等体积的质量浓度为0.5％的NaCl水溶液水洗正己烷相，最后减压浓缩。步骤四、采用硅胶柱层析分离纯化，采用正己烷湿法装柱，采用正己烷：丙酮：甲醇＝92.5:7:0.5的体积比等度洗脱，并用薄层色谱法检测，以β-隐黄素标准品为对照，收集主要含β-隐黄素和豆甾醇的洗脱液；所述薄层色谱的条件为：展开剂为石油醚:乙醚＝7:3，显色剂为10％硫酸-无水乙醇，95℃烘烤2min。步骤五、首先选用正己烷-丙酮对所述洗脱液的浓缩物进行双溶剂法结晶，其中丙酮为豆甾醇的良溶剂，正己烷为豆甾醇的不良溶剂，于25℃条件下结晶出豆甾醇晶体，用正己烷清洗晶体，直至晶体无色；再将溶液进行浓缩干燥，最后选用乙醚-甲醇对干燥后的物质进行结晶，其中乙醚为β-隐黄素晶体的良溶剂，甲醇为β-隐黄素的不良溶剂，于25℃条件下结晶得到β-隐黄素晶体，并用甲醇清洗晶体，其β-隐黄素的纯度达98.48％。结晶产物的鉴定：一、白色结晶的红外光谱分析图2为豆甾醇晶体红外光谱图，对图2进行分析：3500-3200cm-1处宽而强的谱带是O-H伸缩振动引起的吸收谱带，它是脂肪醇的一个重要特征谱带。2870和2949为甲基的C-H的伸缩振动峰，1448和1373为亚甲基的C-H变形振动吸收峰。1651处强度较低的弱峰是C＝C双键的伸缩振动吸收峰，1060处弱峰为C-O键的伸缩振动吸收峰，以上这些红外光谱特征峰体现了该化合物为甾体化合物。二、结晶产物核磁图谱分析将以上β-隐黄素晶体和豆甾醇晶体进行核磁分析，结果如图3到图5所示，其中图3为以上豆甾醇的1H-NMR谱图，图4为以上豆甾醇的13C-NMR谱图，图5为以上β-隐黄素的1H-NMR谱图。对图3进行分析：1H-NMR(400MHz,CDCl3)谱中共有6个甲基信号峰，分别是0.69(d,J＝7.3Hz,3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从柑橘皮中同步分离和纯化β‑隐黄素及豆甾醇的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、将柑橘皮干燥并磨粉；步骤二、用无水乙醇浸提预处理后的原料，减压浓缩得到总酯萃取物；步骤三、首先将步骤二所得总酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液，再向萃取物溶液中加入KOH‑乙醇溶液进行皂化反应，皂化反应完成后进行萃取，最后水洗并减压浓缩；步骤四、采用色谱法分离纯化，以β‑隐黄素标准品为对照，收集同时含有甾醇及β‑隐黄素的洗脱液；步骤五、将步骤四中得到的洗脱液进行浓缩，得到浓缩物；步骤六、首先选用正己烷‑丙酮对步骤五所得洗脱液的浓缩物进行双溶剂法结晶，结晶出豆甾醇晶体，再将上述去除豆甾醇晶体后的洗液进行浓缩，得到主要含β‑隐黄素的浓缩物，最后选用乙醚‑甲醇进行结晶，结晶出β‑隐黄素晶体。

【技术特征摘要】
1.一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、将柑橘皮干燥并磨粉；步骤二、用无水乙醇浸提预处理后的原料，减压浓缩得到总酯萃取物；步骤三、首先将步骤二所得总酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液，再向萃取物溶液中加入KOH-乙醇溶液进行皂化反应，皂化反应完成后进行萃取，最后水洗并减压浓缩；步骤四、采用色谱法分离纯化，以β-隐黄素标准品为对照，收集同时含有甾醇及β-隐黄素的洗脱液；步骤五、将步骤四中得到的洗脱液进行浓缩，得到浓缩物；步骤六、首先选用正己烷-丙酮对步骤五所得洗脱液的浓缩物进行双溶剂法结晶，结晶出豆甾醇晶体，再将上述去除豆甾醇晶体后的洗液进行浓缩，得到主要含β-隐黄素的浓缩物，最后选用乙醚-甲醇进行结晶，结晶出β-隐黄素晶体。2.根据权利要求1所述的一种从柑橘皮中同步分离纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，其特征在于：所述步骤二中，在38～45℃的条件下对柑橘皮粉进行浸提。3.根据权利要求1或2所述的一种从柑橘皮中同步分离纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，其特征在于：所述步骤三中，所述萃取物溶液的质量浓度为0.046～0.056％，所述KOH-乙醇溶液的质量浓度为8～1...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙志高，黄巧娟，马亚琴，黄林华，郭莉，黄学根，谭祥，王珺，王华，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85