本发明专利技术提供一种棘白菌素B母核的纯化方法，具体采用C18反相制备柱分离纯化粗品，采用0.2%乙酸铵水溶液:甲醇=94:6（V/V）作为解吸液；并将收集的解吸液立即用盐酸溶液调节pH值至3.5～3.8之间；本发明专利技术提供的方法工艺简单、成本低、收率高，得到棘白菌素B母核的色谱纯度达99％，单杂小于0.1%。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物化学领域，具体涉及药物中间体的分离纯化方法，更进一步的涉 及一种棘白菌素 B母核的纯化方法。
技术介绍
芬净类药物作为棘白菌素家族的重要成员，可以抑制真菌细胞壁β-α - 3) _ 葡聚糖合成，对于临床常见的念珠菌属及其他真菌有较强的抗菌活性。已上市的芬净类药 物阿尼芬净和米卡芬净都是由各自的前体在酰基水解酶作用下得到母核，再经过化学修饰 而得，因此，制备棘白菌素母核已经成为芬净类药物合成的关键步骤。 棘白菌素 Β母核由棘白菌素 Β在酰基水解酶作用下水解得到，结构式如下： 由于最终药物产品的效价是基于生产最终产品的中间体的纯度，因此提高生产过 程中每一阶段的纯度是非常有必要的。最理想的情况是，尽可能在生产过程的最早阶段去 除杂质。因此，作为阿尼芬净的合成母核，得到高纯度的棘白菌素 Β母核是非常有必要的。 目前制备棘白菌素 Β母核的方法均较难得到色谱纯度大于99%，单杂小于0. 1%的 高纯度棘白菌素 Β母核，因此，找到一种高效的、低成本的获得高纯度棘白菌素 Β母核的方 法就很有必要。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是为了解决阿尼芬净前体的纯化问题，为了达到上述目的，本 专利技术提供了一种高纯度的阿尼芬净前体的分离纯化方法，该方法包括以下步骤： 将发酵液固液分离得到的粗品进行反相制备柱分离，所述的反相制备柱为C18柱，其 柱料的粒径为8 μ m ;所述反相制备柱上样方法为：用纯化水溶解样品，溶解后样品的浓度 为80g/L~110g/L，优选100 g/L，然后上样；收集制备液，得到色谱纯度达99%，单杂小于 0. 1%的高纯度棘白菌素 B ; 其中，所述反相制备柱的解析液为0.2%乙酸铵水溶液：甲醇=94:6 (V/V); 所述收集的制备液立即用5%盐酸溶液调节pH值至3. 5~3. 8之间(逐滴滴加)。 本专利技术提供的方法工艺简单、成本低、收率高，得到棘白菌素 B母核的色谱纯度达 99 %，单杂小于0. 1%【附图说明】： 图1显示棘白菌素 B的HPLC谱图。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术进行更进一步详细说明，但不是对本专利技术的限定。另外， 除非另有说明，在本说明书中，一般操作均是在室温条件下进行的，室温是指25-30°C。本发 明所用到的棘白菌素 B母核粗品可参考" Echinocandin B微生物转化工艺优化"（中国医 药工业杂志，2012. 43 (5) :333-336)公开的方法制备获得。 实施例 C1S反相柱填料（日本大曹公司）规格：Size :8 μ m。 Q8 柱规格：填料装量：200g ;Size :41. 4mmX 250mm。 将lg棘白菌素 B母核粗品溶解于10ml纯化水中，，过滤得10ml滤液，对该滤液进 行HPLC分析，棘白菌素 B母核的含量为0.72g，用0.2%乙酸铵水溶液：甲醇=94:6 (V/V) 溶液平衡柱子。上样完毕，用〇. 2%乙酸铵水溶液：甲醇=94:6 (V/V)溶液进行洗脱，并通过 UV检测器监测，当棘白菌素 B母核峰峰高上升到0. 6AU开始收集，当棘白菌素 B母核峰峰高 下降到0. 8AU停止收集，将收集的制备液立即用5%盐酸溶液调节pH值至3. 5~3. 8之间 (逐滴滴加)，合并收集液，得棘白菌素 B母核高纯度收集液284ml，对该收集液进行HPLC分 析，棘白菌素 B母核的含量为0.45g，HPLC纯度99.8%，单杂小于0. 1%，收率62.5% (HPLC 色谱图见附图1)。【主权项】1. 一种棘白菌素 B的纯化方法，其特征在于包括如下步骤： 将发酵液固液分离得到的粗品进行反相制备柱分离，所述的反相制备柱为C18柱，其 柱料的粒径为8 μ m ;所述反相制备柱上样方法为：用纯化水溶解样品，溶解后样品的浓度 为80g/L~110g/L，然后上样；收集制备液，得到色谱纯度达99%，单杂小于0. 1%的高纯度棘 白菌素 B。2. 根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述反相制备柱的解析液为0. 2%乙酸铵 水溶液：甲醇=94:6 (V/V)。3. 根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，将收集的制备液立即用5%盐酸溶液 调节pH值至3. 5~3. 8之间。【专利摘要】本专利技术提供一种棘白菌素B母核的纯化方法，具体采用C18反相制备柱分离纯化粗品，采用0.2%乙酸铵水溶液:甲醇=94:6（V/V）作为解吸液；并将收集的解吸液立即用盐酸溶液调节pH值至3.5～3.8之间；本专利技术提供的方法工艺简单、成本低、收率高，得到棘白菌素B母核的色谱纯度达99％，单杂小于0.1%。【IPC分类】C07K1/20, C07K7/56【公开号】CN105566457【申请号】CN201410537136【专利技术人】岳崇斌, 易中宏, 郭明, 刘亚军 【申请人】重庆乾泰生物医药有限公司【公开日】2016年5月11日【申请日】2014年10月13日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种棘白菌素B的纯化方法，其特征在于包括如下步骤：将发酵液固液分离得到的粗品进行反相制备柱分离，所述的反相制备柱为C18 柱，其柱料的粒径为8μm；所述反相制备柱上样方法为：用纯化水溶解样品，溶解后样品的浓度为80g/L~110g/L，然后上样；收集制备液，得到色谱纯度达99％，单杂小于0.1%的高纯度棘白菌素B。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：岳崇斌，易中宏，郭明，刘亚军，
申请(专利权)人：重庆乾泰生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;85
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