在线净化‑液相色谱‑质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法技术

本发明专利技术涉及一种菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的测定方法，尤其是涉及一种通过在线净化‑液相色谱‑质谱/质谱法对菊花中吡虫啉和吡蚜酮进行定量检测的方法。在线净化‑液相色谱‑质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法，该方法称取1.00g样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min，均质后加入20mL乙腈和约4g氯化钠，涡旋3min，离心，取上层溶液约1mL过膜，在线净化，液相色谱‑质谱/质谱仪测定。本发明专利技术的测定方法采用在线净化‑液相色谱‑质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮的残留量，方法简便、快速、准确、可靠，检测限、回收率和精密度均符合要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的测定方法，尤其是涉及一种通过 在线净化-液相色谱-质谱/质谱法对菊花中吡虫啉和吡蚜酮进行定量检测的方法。
技术介绍
菊花为一种常用药材，收载于中国药典中，功能清肝利胆、健胃消食、利尿消肿；同 时其也常用作饮品。吡虫啉和吡蚜酮是吡啶类杀虫剂，具有广谱、高效、低毒的特点，能有效 防治菊花花期蚜虫的侵害，是有关部门向菊农推荐使用的有效防治蚜虫的农药；同时这两 种农药也就不可避免地在菊花上产生一定的残留。为有效控制菊花的质量，保障人身健康， 非常必要对吡虫啉和吡蚜酮在菊花上的残留量进行分析。 目前，涉及菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量测定的检测方法较少。盛静等通过液相 色谱对杭白菊中吡虫啉的残留量进行检测，从而对其残留进行动态研究;徐艳等采用高效 液相色谱法同时测定中药材亳菊中多菌灵、吡虫啉和啶虫脒的残留量，最低检出浓度为 0·02mg/kg。
技术实现思路
为了弥补采用液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的空白， 特别是采用在线净化的前处理方法，本专利技术的目的是提供一种利用在线净化-液相色谱-质 谱/质谱法准确、灵敏、简便的测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮的检测方法。 为了实现上述的目的，本专利技术采用了以下的技术方案：，其 特征在于该方法包括以下的步骤： 1)试样处理:称取1.00g样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min， 均质后加入20mL乙腈和约4g氯化钠，祸旋3min，离心，取上层溶液约lmL过膜，在线净化，液 相色谱-质谱/质谱仪测定。 2)净化:采用在线净化，条件为： &)在线净化柱：〇5^1〇116-?，5〇111111\0.5111111，6(^111; b)流动相:水+乙腈，梯度上样洗脱； c)进样量：10yL。 3)测定:采用液相色谱-质谱/质谱法，其中： 液相色谱条件为： a)色谱柱:C18，150mmX4.6mm(内径），5μπι; b)流动相：乙腈+0.1 %甲酸溶液，梯度洗脱； 。)柱温:20°(3。质谱条件为： a)离子源：电喷雾离子源； b)扫描方式:正离子扫描； C)检测方式:多反应监测； d)电喷雾电压:3 200V; 幻离子源温度:300。〇； f)鞘气压力：5〇Arb; g)辅助气压力：20Arb; h)毛细管温度：270°C; i)碰撞气压力：1 · 5mTorr; j)鞘气、辅助气均为高纯氮气;碰撞气为高纯氩气。 4)空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行； 5)结果计算和表述 按公式(1)计算试样中吡虫啉或吡蚜酮的残留量： CV 1 = -- 式中： X-试样中吡虫啉或吡蚜酮的含量，单位为毫克每千克； C-由标准工作曲线得到样液中吡虫啉或吡蚜酮的浓度，单位为微克每毫升； V-样液最终体积，单位为毫升； m-最终样液所代表的试样量，单位为克。 作为优选，上述在线净化的流动相条件如表1:表1在线净化的流动相条件 作为优选，上述液相色谱的流动相条件如表2:表2液相色谱的流动相条件 作为优选，上述的多反应监测离子对条件表3: 表3多反应监测离子对和碰撞能量 其中，带的为定量离子，其余为定性离子。 本专利技术的测定方法采用在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡 蚜酮的残留量，方法简便、快速、准确、可靠，检测限、回收率和精密度均符合要求。 本专利技术的测定方法具有以下技术效果： 1)首次开发了在线净化-液相色谱-质谱/质谱法同时测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮 残留量的方法，填补了技术空白； 2)提供了在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的 最优净化条件和仪器条件。【附图说明】 图1为标准溶液多反应监测(0.5ng/mL)色谱图。 图2为样品溶液多反应监测色谱图（吡虫啉检出）。【具体实施方式】 为进一步说明本专利技术，结合以下实施例具体说明： 1、试剂和材料 1.1超纯水； 1.2乙腈:色谱纯； 1.3甲酸:色谱纯； 1.4 0.1%甲酸溶液:准确移取1.011^甲酸，用水定容至1 000111匕 1.5标准品:信息见表4。 表4标准品信息 Luu〇4」 Z、仪益和段亩 2.1在线净化-液相色谱-质谱/质谱仪，配有电喷雾离子源； 2.2均质器； 2.3离心机。 3、测定步骤 3.1样品前处理 称取l.OOg样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min，均质后加入 20mL乙腈和约4g氯化钠，祸旋3min，离心，取上层溶液约lmL过膜，供在线净化，液相色谱-质 谱/质谱仪测定。 3.2在线净化和测定 由于测试条件取决于所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用 下列操作条件已被证明对测试是合适的。 3.2.1在线净化条件 a)在线净化柱：Cyclone-P，50mm X 0 · 5mm，60ym; b)流动相:水+乙腈，梯度上样洗脱条件见表1; c)进样量：10yL。 3.2.2液相色谱条件 a)色谱柱:C18，150mmX4.6mm(内径），5μηι; b)流动相：乙腈+0.1 %甲酸溶液，梯度洗脱条件见表2; 。)柱温:20°(3。 3.2.3质谱条件 a)离子源：电喷雾离子源； b)扫描方式:正离子扫描； c)检测方式:多反应监测； d)电喷雾电压：3 200V; 6)离子源温度：300。〇； f)鞘气压力：5〇Arb; g)辅助气压力：20Arb; h)毛细管温度:270°C; i)碰撞气压力：1 · 5mTorr; j)鞘气、辅助气均为高纯氮气;碰撞气为高纯氩气。 k)监测离子对及碰撞能量见表3。 3.2.4空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 4、结果计算和表述 按公式(2)计算试样中吡虫啉或吡蚜酮的残留量： ^ CV !=.^. · · · ? ?'? · · ? ?'? ?'?'·''·'·'?'· · · C2) 式中： X-试样中吡虫啉或吡蚜酮的含量，单位为毫克每千克； C-由标准工作曲线得到样液中吡虫啉或吡蚜酮的浓度，单位为微克每毫升； v-样液最终体积，单位为毫升； m-最终样液所代表的试样量，单位为克。 5、方法检出限本专利技术方法对于菊花中R比虫啉和R比姐酮的检出限均为0.0 lmg/kg。 6、方法的回收率和精密度 本方法回收率实验设定了三个添加浓度，按本方法所确定的实验条件，对每个添 加浓度进行6次实验，回收率及精密度结果见表5。 表5回收率及精密度试验(n = 6) 7、结论 综合上述情况，本专利技术方法的回收率、检出限和精密度等各项技术指标均符合要 求，方法应用于菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的检测，重现性良好。本专利技术建立的检验方法 操作简便、结果准确。【主权项】1.在线净化-液相色谱-质谱/质谱法测定菊花中化虫嘟和化晒酬残留量的方法，其特 征在于该方法包括W下的步骤： 1) 试样处理:称取1. OOg样品，置入50mL塑料离屯、管中，加入约20mL水浸泡30min，均质 后加入20mL乙腊和约4g氯化钢，满旋3min，离屯、，取上层溶液约ImL过膜，在线净化，液相色 谱-质谱/质谱仪测定； 2) 净化:采用在线净化，条件为： a) 在线净化柱：切C lone-P，50mm X 0.5mm本文档来自技高网...

【技术保护点】
在线净化‑液相色谱‑质谱/质谱法测定菊花中吡虫啉和吡蚜酮残留量的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1)试样处理：称取1.00g样品，置入50mL塑料离心管中，加入约20mL水浸泡30min，均质后加入20mL乙腈和约4g氯化钠，涡旋3min，离心，取上层溶液约1mL过膜，在线净化，液相色谱‑质谱/质谱仪测定；2)净化：采用在线净化，条件为：a)在线净化柱：Cyclone‑P，50mm×0.5mm，60μm；b)流动相：水+乙腈，梯度上样洗脱；梯度上样洗脱条件如下，水和乙腈的比例为体积比：时间/min流速/(mL/min)水/％乙腈/％洗脱环切换阀0.001.501000OutWaste1.000.101000OutWaste1.500.101000InMass3.501.500100InWaste5.501.507030InWaste9.501.501000OutWaste14.001.501000OutWastec)进样量：10μL；3)测定：采用液相色谱‑质谱/质谱法，其中：液相色谱条件为：a)色谱柱：C18，150mm×4.6mm(内径)，5μm；b)流动相：乙腈+0.1％甲酸溶液，梯度洗脱；梯度洗脱条件如下，其中乙腈和0.1％甲酸的比例为体积比：时间/min流速/(mL/min)0.1％甲酸溶液/％乙腈/％0.000.409551.500.409553.500.309555.500.4020809.500.40208010.500.4095514.000.40955c)柱温：20℃；质谱条件为：a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测；d)电喷雾电压：3200V；e)离子源温度：300℃；f)鞘气压力：50Arb；g)辅助气压力：20Arb；h)毛细管温度：270℃；i)碰撞气压力：1.5mTorr；j)鞘气、辅助气均为高纯氮气；碰撞气为高纯氩气；k)监测离子对及碰撞能量如下：4)空白试验除不加试样外，均按上述步骤2)～3)测定步骤进行；5)结果计算和表述按公式(1)计算试样中吡虫啉或吡蚜酮的残留量：X=CVm...(1)]]>式中：X—试样中吡虫啉或吡蚜酮的含量，单位为毫克每千克；C—由标准工作曲线得到样液中吡虫啉或吡蚜酮的浓度，单位为微克每毫升；V—样液最终体积，单位为毫升；m—最终样液所代表的试样量，单位为克。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄超群，谢文，蒋沁婷，李慧思，楼成杰，吴娟，黄雷芳，
申请(专利权)人：浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：浙江;33