一种UPLC测定穿心莲药材指纹图谱及四种二萜内酯的方法技术

技术编号：13131337 阅读：123 留言：0更新日期：2016-04-06 16:50

本发明专利技术涉及一种超高效液相色谱法测定穿心莲药材指纹图谱和穿心莲四种二萜内酯的含量测定方法。制备穿心莲药材供试品溶液，将供试品注入超高效液相色谱仪，在本发明专利技术特定的色谱条件下采用梯度洗脱，得到穿心莲药材指纹图谱和穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯的含量。综合其指纹图谱和四种二萜内酯类成分含量测定数据，为判断穿心莲药材真伪、保证穿心莲药材的内在质量、考察稳定性和一致性提供依据，并且在保证穿心莲药材临床的合理应用具有重要意义。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种穿心莲药材的超高效液相指纹图谱及四种二萜内酯的检测方法，属于药物分析

技术介绍
穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees.为爵床科(Acanthaceae)穿心莲属AndrographisWall.exNees.植物，又名一见喜、苦草、四方草、印度草等，主产于广东、福建等地，干燥地上部分作为药用。《中国药典》2010年版一部记载其性寒、味苦，具有清热解毒、凉血、消肿之功效，被广泛用于治疗细菌性痢疾、急性扁桃体炎、尿路感染、流行性感冒和毒蛇咬伤等症。由于中药化学成分复杂，作用机制不明确，致使现有中药制药技术难以确保中药产品质量稳定性，中药指纹图谱建立的可以全面反映中药内在化学成分的种类与数量，进而反映中药的质量。现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确，采用中药指纹图谱的方式，将有效地表征中药质量。指纹图谱已为国际社会所认可，有利于中药及产品进入国际市场。穿心莲药材的真伪、内在质量对于后期制剂的工艺规范化控制和临床用药的有效性、安全性和稳定性都具有非常重要的意义，所以寻找到一种比较好的穿心莲药材的鉴别和穿心莲提取物含量的测定方法是极其具有价值的，而且采取多成分指标同时测定，也是保证药材质量和确切疗效行之有效的方法。首先，本专利技术从鉴别穿心莲药材的方法入手，利用超高效液相色谱法(UPLC)建立穿心莲药材的指纹图谱；并且同时测定了穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯四个穿心莲主要二萜内酯类成分的含量。本专利技术通过对超高效液相色谱法的提取溶...

【技术保护点】
一种穿心莲超高效液相标准对照指纹图谱，其建立方法如下：1)供试品溶液制备：取穿心莲，采用甲醇水溶液进行提取，再加入甲醇水溶液调整溶液浓度，滤过，取滤液，既得；2)获得色谱图：配制穿心莲内酯溶液作为参照物，将供试品溶液和穿心莲内酯溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；3)生成对照指纹图谱：选择合格的多批穿心莲样品的指纹图谱，以穿心莲内酯峰为参比峰，得到27个共有峰的图谱，按平均值法计算生成标准对照指纹图谱；其中色谱条件如下：采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(1.7μm，2.1×100mm)；梯度洗脱；流动相A为0.2％‑0.4％甲酸水溶液，流动相B为甲醇：乙腈＝1：9～2：8混合溶液；进样量为1‑3μL；色谱柱温度20℃‑30℃；以穿心莲内酯为参照物，检测波长为247‑251nm；其中梯度洗脱程序如下：0～2min，88％～82％→80％～74％B；2～3min，80％～74％B；3～5min，80％～74％→79％～73％B；5～7min，79％～73％→78％～72％B；7～7.5min，78％～72％→72％～66％B；7.5～8min，72％～66％B；8～9m...

【技术特征摘要】
1.一种穿心莲超高效液相标准对照指纹图谱，其建立方法如下：
1)供试品溶液制备：
取穿心莲，采用甲醇水溶液进行提取，再加入甲醇水溶液调整溶液浓度，滤
过，取滤液，既得；
2)获得色谱图：
配制穿心莲内酯溶液作为参照物，将供试品溶液和穿心莲内酯溶液注入超高
效液相色谱仪，得到色谱图；
3)生成对照指纹图谱：
选择合格的多批穿心莲样品的指纹图谱，以穿心莲内酯峰为参比峰，得到
27个共有峰的图谱，按平均值法计算生成标准对照指纹图谱；
其中色谱条件如下：采用AcquityUPLCBEHC18色谱柱(1.7μm，
2.1×100mm)；梯度洗脱；流动相A为0.2％-0.4％甲酸水溶液，流动相B为甲醇：
乙腈＝1：9～2：8混合溶液；进样量为1-3μL；色谱柱温度20℃-30℃；以穿心莲
内酯为参照物，检测波长为247-251nm；其中梯度洗脱程序如下：0～2min，
88％～82％→80％～74％B；2～3min，80％～74％B；3～5min，80％～74％→79％～73％B；
5～7min，79％～73％→78％～72％B；7～7.5min，78％～72％→72％～66％B；7.5～8min，
72％～66％B；8～9min，72％～66％→68％～62％B；9～11min，68％～62％→63％～57％B；
11～12min，63％～57％→61％～55％B；12～13min，61％～55％B；13～15min，
61％～55％→38％～32％B；15～17min，38％～32％→23％～17％B；17～19min，
23％～17％→88％～82％B；19～21min，88％～82％B。
2.根据权利要求1所述的标准对照指纹图谱，其建立方法如下：
1)供试品溶液的制备，方法如下：
精密称定穿心莲药材粉末，加入重量体积比为20-200倍量的60％～80％甲醇
-水溶液超声提取20-60min，超声后，放置至室温，用60％～80％甲醇-水溶液据
体积定容，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
2)获得色谱图，方法如下：
精密称取穿心莲内酯对照品适量，加60％～80％甲醇-水溶解制成
0.5～1.5mg/ml的溶液，即得，将供试品溶液和对照品溶液注入超高效液相色谱仪，
得到色谱图；
3)生成对照指纹图谱，方法如下：
将多批穿心莲样品的指纹图谱中27个共有峰，按平均值法计算生成标准对
照指纹图谱，其中，与穿心莲内酯对照品峰保留时间相同的色谱峰为17号峰；
其中，色谱条件如下：采用AcquityUPLCBEHC18色谱柱(1.7μm，
2.1×100mm)；梯度洗脱；流动相A为0.3％甲酸水溶液，流动相B甲醇：乙腈
＝1：9；进样量为2μL；色谱柱温度25℃；以穿心莲内酯为参照物，检测波长为
249nm；其中梯度洗脱程序如下：0～2min，85％→77％B；2～3min，77％B；3～5min，
77％→76％B；5～7min，76％→75％B；7～7.5min，75％→69％B；7.5～8min，69％B；
8～9min，69％→65％B；9～11min，65％→60％B；11～12min，60％→58％B；12～13min，
58％B；13～15min，58％→35％B；15～17min，35％→20％B；17～19min，20％→
85％B；19～21min，85％B。
3.根据权利要求2所述的标准对照指纹图谱，其建立方法如下：
其中，
步骤1)供试品溶液的制备，方法如下：
精密称定穿心莲药材粉末，加入重量体积比为50倍量的80％甲醇-水溶液超
声提取20min，超声后，放置至室温，用80％甲醇-水溶液据体积定容，用0.22μm
微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
步骤2)获得色谱图，方法如下：
精密称取穿心莲内酯对照品适量，加80％甲醇-水溶解制成1mg/ml的溶液，
即得，将供试品溶液和对照品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图。
4.一种穿心莲超高效液相色谱指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)待测样品色谱图的制备：
取穿心莲，采用甲醇水溶液进行提取，再加入甲醇水溶液调整溶液浓度，滤
过，取滤液，注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；
2)待测样品色谱图和标准对照指纹图谱相似度计算：
将待测样品的色谱图按平均值法进行计算，比较待测样品的色谱图和标准对

\t照指纹图谱相似度；
色谱条件如下：采用AcquityUPLCBEHC18色谱柱(1.7μm，2.1×100mm)；
梯度洗脱；流动相A为0.2％-0.4％甲酸水溶液，流动相B为甲醇：乙腈＝1：9～2：
8混合溶液；进样量为1-3μL；色谱柱温度20℃-30℃；以穿心莲内酯为参照物，
检测波长为247-251nm；其中梯度洗脱程序如下：0～2min，
88％～82％→80％～74％B；2～3min，80％～74％B；3～5min，80％～74％→79％～73％B；
5～7min，79％～73％→78％～72％B；7～7.5min，78％～72％→72％～66％B；7.5～8min，
72％～66％B；8～9min，72％～66％→68％～62％B；9～11min，68％～62％→63％～57％B；
11～12min，63％～57％→61％～55％B；12～13min，61％～55％B；13～15min，
61％～55％→38％～32％B；15～17min，38％～32％→23％～17％B；17～19min，
23％～17％→88％～82％B；19～21min，88％～82％B。
5.根据权利要求4的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)待测样品色谱图的制备：
精密称定穿心莲药材粉末，加入重量体积比为20-200倍量60-80％甲醇-水溶
液超声提取10-60min，超声后，放置至室温，用60-80％甲醇-水溶液据体积定容，
微孔滤膜滤过，...

【专利技术属性】
技术研发人员：佟玲，刘小琳，周水平，黄竞怡，
申请(专利权)人：天士力制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12

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