当药药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用技术

本发明专利技术公开了当药药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，所述的指纹图谱采用高效液相色谱法测定其指纹图谱，并检测了11批次的当药药材，采用本发明专利技术所提供的方法建立的当药药材HPLC指纹图谱与11批次的当药制剂相似度在0.9以上，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；本发明专利技术建立了当药药材HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了23个共有峰，建立的指纹图谱专属性好、重复性好、精密度高、选取特征峰全面，能准确地评价当药药材的质量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药材指纹图谱构建和中药材质量控制方法
，尤其当药药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用。
技术介绍
当药又名獐芽菜为龙胆科獐芽菜属植物瘤毛獐牙菜（SwertiapseudochinensisHara），《内蒙古中草药》中有记载当药生长在500－600米的灌木、林下或山坡中。当药全草入药、性寒、味苦、当药有清肝利胆、清湿热、健胃、抗炎、改善微循环的功效，目前主要用于急慢性黄疸型肝炎、胆囊炎等疾病的治疗。中国专利CN104013638A公开了当药黄素或其衍生物药效学分析，提出了当药黄素在抗抑郁药物中的新用途。目前，其主要的中药制剂有当药片、愈肝片、当飞利肝宁胶囊，主要用于肝病的防治与治疗，并取得了良好的效果。当药作为治疗肝病的首选药物，需求量巨大，拥有广泛的临床应用前景。当药作为传统治疗肝炎的药物已被收入《中华人民共和国药典2015版一部》药材标准中以獐芽菜苦苷、当药苷为对照品用高效液相色谱法用于当药的鉴别。众多獐芽菜属植物都含有獐牙菜苦苷和当药苷，当药替代品种类繁多，依产地不同各有差异，使用及其混乱，如标准只能粗略地鉴别当药的真伪，为全面、准确、有效地控制当药的质量及合理利用当药有必要建立当药的指纹图谱，弥补当药质量控制不足，使其更加完善、科学。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种当药药材指纹图谱的建立方法，通过此方法可以保证当药药材的质量稳定性、一致性和可控性，从而确保当药药材的安全性和有效性。同时提供由此方法所得到的当药药材的指纹图谱及应用。为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：技术方案一：一种当药药材指纹图谱的建立方法，其具体包括如下步骤：（1）供试品溶液的制备：取当药药材，粉碎后，提取溶液提取，过滤，得到供试品溶液；（2）制作当药药材指纹图谱：将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在高效液相色谱检测条件下进行分析，得到当药药材的指纹图谱，所述高效液相色谱检测条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为甲醇-乙腈-pH为2.5~5.0的磷酸二氢钠缓冲液，采用梯度洗脱，进样量为10~30μL；流速0.8~1.0mL/min，紫外检测波长200~400nm，柱温20~40℃。作为本专利技术进一步的改进，所述供试品溶液的制备方法中以25mL乙醇为提取溶液。作为本专利技术进一步的改进，步骤（1）中，提取方法为浸渍/超声提取。作为本专利技术进一步的改进，所述供试品溶液的制备方法为：取当药药材0.5~1.0g至于锥形瓶中，加50~80%乙醇25mL，精密称重，浸泡12h，超声20min，放冷，用50~80%乙醇补足减失重量，经0.22μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。作为本专利技术进一步的改进，所述高效液相色谱检测条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相：A有机相：甲醇-乙腈，B水相：pH为2.5~5.0的磷酸二氢钠缓冲液，梯度洗脱程序为：0min→6min→20min→30min→40min→70min→80min→95min→120min，A有机相5~10%→12~15%→18~20%→22~25%→30~36%→40~44%→46~50%→58~65%→70~90%；进样量：10~30μL；流速：0.8~1.0mL/min；柱温为20~40℃；检测波长：200~400nm。作为本专利技术进一步的改进，所述高效液相色谱检测条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相：A有机相：体积比为5:3的甲醇-乙腈，B水相：pH为3.5-4.0的磷酸二氢钠缓冲液，梯度洗脱程序为：0min→6min→20min→30min→40min→70min→80min→95min→120min，A有机相5~10%→12~15%→18~20%→23%→35%→40%→48%→60%→90%；进样量：10-20μL；流速：0.8~1.0mL/min；柱温为25-35℃；检测波长：247nm。作为本专利技术进一步的改进，所述高效液相色谱检测条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相：A有机相：体积比为5:3的甲醇-乙腈，B水相：pH为3.9的磷酸二氢钠缓冲液，梯度洗脱程序为：0min→6min→20min→30min→40min→70min→80min→95min→120min，A有机相5%→12%→18%→23%→35%→40%→48%→60%→90%；色谱柱：CosmosilC18柱(4.6mm×250mm,5μm)；进样量：10μL；流速：0.8mL/min；柱温为：30℃；检测波长：247nm。作为本专利技术进一步的改进，还包括步骤（3）标准指纹图谱的确定：按照步骤（1）和步骤（2）提供的方法，对11批当药药材建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了23个共有特征峰，所述23个共有特征峰的相对保留时间如下：1号峰平均保留时间为22.23min；2号峰平均保留时间为23.35min；3号峰平均保留时间为26.22min；4号峰平均保留时间为28.17min；5号峰平均保留时间为30.43min；6号峰平均保留时间为39.32min；7号峰平均保留时间为39.92min；8号峰平均保留时间为40.45min；9号峰平均保留时间为43.84min；10号峰平均保留时间为44.60min；11号峰平均保留时间为45.91min；12号峰平均保留时间为49.86min；13号峰平均保留时间为52.01min；14号峰平均保留时间为61.59min；15号峰平均保留时间为68.06min；16号峰平均保留时间为84.60min；17号峰平均保留时间为85.53min；18号峰平均保留时间为91.20min；19号峰平均保留时间为98.85min；20号峰平均保留时间为105.11min；21号峰平均保留时间为108.37min；22号峰平均保留时间为115.67min；23号峰平均保留时间为117.22min；以上23个共有特征峰构成了当药药材的指纹特征，可作为当药药材的标准指纹图谱。技术方案二：一种当药药材指纹图谱，包括23个共有特征峰，相对保留时间如下：1号峰平均保留时间为22.23min；2号峰平均保留时间为23.35min；3号峰平均保留时间为26.22min；4号峰平均保留时间为28.17min；5号峰平均保留时间为30.43min；6号峰平均保留时间为39.32min；7号峰平均保留时间为39.92min；8号峰平均保留时间为40.45min；9号峰平均保留时间为43.84min；10号峰平均保留时间为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种当药药材指纹图谱的建立方法，其具体包括如下步骤：（1）供试品溶液的制备：取当药药材，粉碎后，提取溶液提取，过滤，得到供试品溶液；（2）制作当药药材指纹图谱：将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在高效液相色谱检测条件下进行分析，得到当药药材的指纹图谱，所述高效液相色谱检测条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为甲醇‑乙腈‑ pH为2.5~5.0的磷酸二氢钠缓冲液，采用梯度洗脱，进样量为10~30μL；流速0.8~1.0mL/min，紫外检测波长200~400nm，柱温20~40℃。

【技术特征摘要】
1.一种当药药材指纹图谱的建立方法，其具体包括如下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取当药药材，粉碎后，提取溶液提取，过滤，得到供试品溶液；
（2）制作当药药材指纹图谱：将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，在高效液相色谱检测条件下进行分析，得到当药药材的指纹图谱，所述高效液相色谱检测条件如下：
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为甲醇-乙腈-pH为2.5~5.0的磷酸二氢钠缓冲液，采用梯度洗脱，进样量为10~30μL；流速0.8~1.0mL/min，紫外检测波长200~400nm，柱温20~40℃。
2.根据权利要求1所述的一种当药药材指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法中以50~80%乙醇溶液为提取溶液。
3.根据权利要求1所述的一种当药药材指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤（1）中，提取方法为浸渍或/和超声提取。
4.根据权利要求1所述的一种当药药材指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：取当药药材0.5g至于锥形瓶中，加70%乙醇25mL，精密称重，浸泡12h，超声20min，放冷，用70%乙醇补足减失重量，经0.22μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。
5.根据权利要求1所述的一种当药药材指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
流动相：A有机相：甲醇-乙腈，B水相：pH为2.5~5.0的磷酸二氢钠缓冲液，梯度洗脱程序为：0min→6min→20min→30min→40min→70min→80min→95min→120min，A有机相5~10%→12~15%→18~20%→22~25%→30~36%→40~44%→46~50%→58~65%→70~90%；
进样量：10~30μL；
流速：0.8~1.0mL/min；
柱温为20~40℃；
检测波长：200~400nm。
6.根据权利要求1所述的一种当药药材指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；
流动相：A有机相：体积比为5:3的甲醇-乙腈，B水相：pH为3.5-4.0的磷酸二氢钠缓冲液，梯度洗脱程序为：0min→6min→20min→30min→40min→70min→80min→95min→120min，A有机相5~10%→12~15%→18~20%→23%→35%→40%→48%→60%→90%；
进样量：10-20μL；
流速：0.8~1.0mL/min；
柱温为25-35℃；
检测波长：247nm。
7.根据权利要求1所述的一种当药药材指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测条件：
色谱柱：CosmosilC18柱(4.6mm×250mm,5μm)；
流动相：A有机相：体积比为5:3的甲醇-乙腈，B水相：pH为3.9的磷酸二氢钠缓冲液，梯度洗脱程序为：0min→6min→20min→30min→40min→70min→80min→95min→120min，A有机相5%→12%→18%→23%→35%→40%→48%→60%→90%；
进样量：10μL；
流速：0.8mL/...

【专利技术属性】
技术研发人员：哈婧，张珊，赵帆帆，王娇娇，李建晨，
申请(专利权)人：河北科技大学，
类型：发明
国别省市：河北;13