一种分泌量提高的谷氨酰胺转氨酶制造技术

本发明专利技术公开了一种谷氨酰胺转氨酶，特别是一种分泌量提高的谷氨酰胺转氨酶；通过在前导肽的C端的融合表达双亲短肤实现酶分泌量的提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种谷氨酰胺转氨酶，特别是一种分泌量提高的谷氨酰胺转氨酶。
技术介绍
谷氨酰胺转胺酶(Transglutaminase,EC2.3.2.13,TGase)，是一种能够发生酰胺基转移反应，最后形成ε-(γ-谷氨酰基)赖氨酸共价键的蛋白。基于上述催化反应的存在，TGase能够促使各种蛋白质分子间、分子内交联以及谷氨酰胺残基的水解，从而提高蛋白质的各种功能性质，比如乳化性、溶解性等；同时，TGase能够通过将一些小分子物质比如赖氨酸等引入蛋白质，来增加蛋白质的营养价值。因此，市场上广泛应用TGase作为别具特色的食品添加剂于面制品、乳制品、碚烤制品、肉制品及水产品等食品的加工处理，市场需求量极其巨大。前导肽又称前导序列(pro-sequence)，是分子内伴侣(Intramolecularchaperones)的一种，位于信号肽与成熟酶之间，主要通过帮助蛋白形成紧凑结构，从而降低蛋白的位形熵，或阻止蛋白的错误折叠和聚集来指导蛋白折叠形成正确结构。前导肽对TGase的折叠和分泌具有重要的影响，基于此，我们将双亲短肽插入前导肽的C端，最终得到分泌量提高的谷氨酰胺转氨酶。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种分泌量提高的谷氨酰胺转氨酶，通过在前导肽的C端的融合表达双亲短肤实现酶分泌量的提高，序列如SEQIDNO.1所示或在SEQIDNO.1基础上进行缺失、突变后活性保持不变的氨基酸序列。所述谷氨酰胺转氨酶的氨基酸序列还可以如SEQIDNO.2所示，SEQIDNO.3所示或SEQIDNO.4所示。SEQIDNO.2ASGGDGEREGSYAETHGLTAEDVKNINALNKRALTAGQPGNSLAELPPSVSALFRAPDAADERVTPPAEPLNRMPDAYRAYGGRATTVVNNYIRKWQQVYSHRDGIQQQMTEEQREKLSYGCVGVTWVNSGPYPTNKLAFAFFDEDKYKSDLENSRPRPNETQAEFEGRIVKDSFDEGKGFKRARDVASIMNKALDSAHDEGTYIDNLKKGLANKNDALRYEDSRSNFYSALRNTPSFKERDGGNYDPSKMKAVVYSKHFWSGQDQRGSSDKRKYGDPDAFRPDQGTGLVDMSKDRNIPRSPARPGESWVNFDYGWFGAQTEADADKTIWTHANHYHAPNGGVGPMNVYESKFRNWSAGYADFDRGTYVITFIPKSWNTAPAEVKQGWSSEQIDNO.3ASGGDGEREGSYAETHGLTAEDVKNINALNKRALTAGQPGNSLAELPPSVSALFRAPDAADERVTPPAEPLNRMPDAYRAYGGRATTVVNNYIRKWQQVYSHRDGIQQQMTEEQREKLSYGCVGVTWVNSGPYPTNKLAXAFFDEDKYKSDLENSRPRPNETQAEFEGRIVKDSFDEGKGFKRARDVASIMNKALDSAHDEGTYIDNLKKELANKNDALRYEDSRSNFYSALRNTPSFKERDGGNYDPSKMKAVVYSKHFWSGQDQRGSSDKRKYGDPDAFRPDQGTGLVDMSKDRNIPRSPARPGESWVNFDYGWFGAQTEADADKTIWTHANHYHAPNGGVGPMNVYESKFRNWSAGYADFDRGTYVITFIPKSWNTAPAEVKQGWSSEQIDNO.4ASGGDGEREGSYAETHGLTAEDVKNINALNKRALTAGQPGNSLAELPPSVSALFRAPDAADERVTPPAEPLNRMPDAYRAYGGRATTVVNNYIRKWQQVYSHRDGIQQQMTEEQREKLSYGCVGVTWVNSGPYPTNKLAFAFFDEDKYKSDLENSRPRPNETQAEFEGRIVKDSFDEGKGFKRARDVASIMNKALDSAHDEGTYIDNLKKELANKNDALRYEDSRSNFYSALRNTPSFKERDGGNYDPSKMKAVVYSKHFWSGQDQRGSSDKRKYGDPDAFRPDQGTGLVDMSKDRNIPRSPARPGESWVNFDYGWFGAQTEADADKTIWTHANHYHAPNGGVGPMNVYESKFRNWSAGYADFDRGTXVITFIPKSWNTAPAEVKQGWS为解决上述问题技术问题,本专利技术采用以下的技术方案示例：1、第一步双亲短肤基因的获得，根据双亲短肤的氨基酸序列，在引物上设计相应的DNA序列。2、以S.hygroscopicuspro-TGase表达质粒pET-22b(+)/pro-TG(LiuS,ZhangD,WangM,CuiW,ChenK,DuG,ChenJ,ZhouZ.TheorderofexpressionisakeyfactorintheproductionofactivetransglutaminaseinEscherichiacolibyco-expressionwithitspro-peptide.MicrobCellFact,2011,10(112):1-7.)为模板，进行全质粒PCR。3、将连接好的pET-22b(+)/pro-SAP-TG转进JM109，测序正确后转进E.coliBL21(DE3)。培养基：种子培养基(LB)：酵母粉5g/L，胰蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，(pH7.0)。发酵培养基(TB)：酵母粉24g/L，胰蛋白胨12g/L，甘油5g/L，K2HPO472mmol/L，KH2PO417mmol/L，(pH7.0)。培养方法：种子培养条件：LB培养基，用250mL摇瓶培养，装液量为10％，培养温度为37℃，转速为220rpm，培养时间为10h。摇瓶发酵条件：TB培养基，采用250mL摇瓶进行培养，装液量为10％，接种量为3％，培养温度为37℃，转速为220rpm，当OD600达到2.0时，终浓度为0.4mmol/mL的IPTG诱导，，20°C诱导培养48h。酶活测定方法：比色法测定酶活。L-谷氨酸-γ-单羟胺酸作为标准曲线，α-N-CBZ-GLN-GLY为底物。1个单位的TGase酶活定义为：在37℃的条件下，每分钟催化上述底物合成1μmol的L-谷氨酸-γ-单羟胺酸所用的酶量(U/mL)。酶活测定条件：在37℃条件下反应10min。具体实施方式以下通过实施例来进一步阐明本专利技术,下列实施例中未注明具体条件的实验方法,基本上都按照常见的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分泌量提高的谷氨酰胺转氨酶，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或在SEQ ID NO.1基础上进行缺失、突变后活性保持不变的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种分泌量提高的谷氨酰胺转氨酶，其特征在于氨基酸序列如SEQIDNO.1所示或在SEQ
IDNO.1基础上进行缺失、突变后活性保持不变的氨基酸序列。
2.权利要求1所述的谷氨酰胺转氨酶，其特征在于氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘松，童理明，陈坚，堵国成，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32