可可粉中活性成分的指纹图谱测定方法技术

本发明专利技术公开了一种可可粉中活性成分的指纹图谱测定方法。该测定方法以可可粉为原料，采用高效液相色谱法进行分析，以乙腈-0.05％磷酸缓冲盐溶液为洗脱体系进行梯度洗脱，通过高效液相色谱仪所得的供试品溶液的指纹图谱与可可粉标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统试验，应用指纹图谱特征对可可粉的质量进行全面控制，确保可可制品的质量与保健功效。本发明专利技术具有精密度高、稳定性好、重复性好的特点，能对可可粉活性成分进行有效分离并全面监控其质量。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种。该测定方法以可可粉为原料，采用高效液相色谱法进行分析，以乙腈-0.05%磷酸缓冲盐溶液为洗脱体系进行梯度洗脱，通过高效液相色谱仪所得的供试品溶液的指纹图谱与可可粉标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统试验，应用指纹图谱特征对可可粉的质量进行全面控制，确保可可制品的质量与保健功效。本专利技术具有精密度高、稳定性好、重复性好的特点，能对可可粉活性成分进行有效分离并全面监控其质量。【专利说明】
本专利技术涉及可可粉的质量控制方法，具体地指一种可可粉中活性成分的指纹图谱 测定方法。
技术介绍
可可粉为梧桐科可可属植物可可树的种子可可（Theobroma cacao Linn.)经加工 而成的粉末。可可树原产于南美洲亚马逊河上游的热带雨林地区，现主要分布在印度尼西 亚、加纳、东南亚、西非等赤道南北纬10°以内的狭窄地带，我国海南有引进栽种。可可粉具 有抗氧化、调节免疫、调节血糖水平、降低血浆胆固醇、抗龋齿、助消化等多种生理功效，现 已广泛应用于巧克力、糕点、冰激凌、饮料等食品行业。现代研究表明，可可粉中所含有的表 儿茶素是其多酚类生理活性物质的主要有效成分之一，能有效地抑制包括糖尿病、心脏病、 中风、癌症等在内的多种疾病，具有调节血小板、保护心血管系统、改善视力、降血压、抗氧 化等多种生理功效。 但目前我国可可制品所执行的行业标准仅对可可粉感官指标、理化指标及微生物 指标进行了相关规定，未能反映可可粉的内在质量，不能对其质量进行有效控制。 指纹图谱作为一种综合鉴定手段，以样品中化学成分系统研究为基础，能全面的 反映样品中所含化学成分的种类和含量，可用于对样品的真实性、特征性和优良性等进行 评价，是样品质量控制的主要方法之一，现已成为国际公认的质量控制最有效技术之一。目 前，指纹图谱作为可可粉的质量控制手段仅对其多糖和脂类成分进行了研究，尚无基于可 可粉中主要活性成分指纹图谱的相关研究。
技术实现思路
本专利技术为了全面评价可可粉活性成分的变化及差异，提供一种可可粉中活性成分 的指纹图谱测定方法。 为实现上述目的，本专利技术所提供的，它包 括以下步骤： (a)对照品溶液的制备：精密称取表儿茶素对照品，加入甲醇与水体积比为1:1的 溶液溶解，制成每lmL含表儿茶素66 μ g的溶液，即得； (b)供试品溶液的制备：精密称取可可粉0. 25?2. 5g，加入甲醇与水体积比为 1:1的溶液50?500mL，超声提取30?60min，过滤，取续滤液，即得； (c)设定色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相A为乙腈，流动相B 为质量百分数为〇. 05%磷酸缓冲盐溶液；采用梯度洗脱方式，其洗脱程序为： Omin -20min，流动相 A 为 10%- 15%、流动相 B 为 90%-85%， 2〇11^11 - 3〇1^11，流动相六为15%-30%、流动相8为85%-70%; 检测波长210nm，流速为0. 8mL/min，柱温30°C ;理论塔板数按表儿茶素峰计，不低 于 6000 ; (d)标准指纹图谱的获得：精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 μ L，按照设定的 色谱条件，注入高效液相色谱仪，通过对照品表儿茶素的色谱峰，确定供试品溶液色谱图中 的表儿茶素峰，按照色谱图方法学考察的方法得到可可粉的标准指纹图谱； (e)色谱分析：将每批次所得的供试品溶液的指纹图谱与可可粉标准指纹图谱经 中药色谱指纹图谱相似度评价系统比较，来确定可可粉的质量。 本专利技术所得到的可可粉的标准指纹图谱检测出5个特征指纹峰，5号峰为表儿茶 素， 1 号峰：保留时间：4. 82±(X 2min， 2 号峰：保留时间：6. 87±0· 2min， 3 号峰：保留时间：14. 64±0· 2min， 4 号峰；保留时间：17. 52±0· 2min， 5 号峰：保留时间：21. 13±0· 2min。 本专利技术的有益效果：本专利技术采用高效液相色谱法对可可粉活性成分的指纹图谱进 行了研究，将所得的供试品溶液的指纹图谱与可可粉标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相 似度评价系统试验。本专利技术具有以下优点： ①本专利技术建立的色谱方法具有精密度高、稳定性好、重复性好的优点，符合指纹图 谱的要求，可作为可可粉质量检测方法，全面监控可可粉的质量； ②本专利技术能将可可粉活性成分进行有效分离，构建了可可粉的指纹图谱，填补了 可可粉在活性成分分离和指纹图谱中研究的空白； ③对可可粉的质量评价不再局限于对某一种成分的研究，而是从整体评价，应用 指纹图谱特征对可可粉的质量进行全面控制，确保可可粉的保健功效及可可制品的质量与 安全，提供了一种有效的产品质量检测方法和工艺技术创新的评价平台。 【专利附图】【附图说明】 图1为对照品表儿茶素的色谱图。 图2为可可粉的标准指纹图谱。 图3为十批可可粉指纹图谱叠加图。 【具体实施方式】 以下结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步的详细描述。 下述实施例中，表儿茶素购买于中国药品生物制品检定所，批号110878 ;甲醇为 色谱纯，购买于美国天地公司。 实施例1 (a)对照品溶液的制备：精密称取表儿茶素，加甲醇与水体积比为1:1的溶液溶 解、混匀、定容，制成每lmL含表儿茶素66 μ g的溶液，制得对照品溶液。 (b)供试品溶液的制备：取如表1所示的10个不同来源可可粉各0. 25g，精密称 定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇与水体积比为1:1的溶液50mL，超声提取30min，过滤，取 续滤液，制得供试品溶液。 表1可可粉样品来源 【权利要求】1. 一种，其特征在于，它包括以下步骤： (a) 对照品溶液的制备：精密称取表儿茶素对照品，加入甲醇与水体积比为1:1的溶液 溶解，制成每lmL含表儿茶素66 μ g的溶液，即得； (b) 供试品溶液的制备：精密称取可可粉0. 25?2. 5g，加入甲醇与水体积比为1:1的 溶液50?500mL，超声提取30?60min，过滤，取续滤液，即得； (c) 设定色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相A为乙腈，流动相B为质 量百分数为〇. 05%磷酸缓冲盐溶液；采用梯度洗脱方式，其洗脱程序为： Omin -20min，流动相 A 为 10%- 15%、流动相8为90%-85%， 2〇11^11 - 3〇1^11，流动相六为15%-30%、流动相8为85%-70%; 检测波长210nm，流速为0. 8mL/min，柱温30°C ;理论塔板数按表儿茶素峰计，不低于 6000 ； (d) 标准指纹图谱的获得：精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 μ L，按照设定的色谱 条件，注入高效液相色谱仪，通过对照品表儿茶素的色谱峰，确定供试品溶液色谱图中的表 儿茶素峰，按照色谱图方法学考察的方法得到可可粉的标准指纹图谱； (e) 色谱分析：将每批次所得的供试品溶液的指纹图谱与可可粉标准指纹图谱经中药 色谱指纹图谱相似度评价系统比较，来确定可可粉的质量。2. 根据权利要求1所述，其特征在于：所得到 的可可粉的标准指本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可可粉中活性成分的指纹图谱测定方法，其特征在于，它包括以下步骤：(a)对照品溶液的制备：精密称取表儿茶素对照品，加入甲醇与水体积比为1:1的溶液溶解，制成每1mL含表儿茶素66μg的溶液，即得；(b)供试品溶液的制备：精密称取可可粉0.25～2.5g，加入甲醇与水体积比为1:1的溶液50～500mL，超声提取30～60min，过滤，取续滤液，即得；(c)设定色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相A为乙腈，流动相B为质量百分数为0.05％磷酸缓冲盐溶液；采用梯度洗脱方式，其洗脱程序为：0min→20min，流动相A为10％→15％、流动相B为90％→85％，20min→30min，流动相A为15％→30％、流动相B为85％→70％；检测波长210nm，流速为0.8mL/min，柱温30℃；理论塔板数按表儿茶素峰计，不低于6000；(d)标准指纹图谱的获得：精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μL，按照设定的色谱条件，注入高效液相色谱仪，通过对照品表儿茶素的色谱峰，确定供试品溶液色谱图中的表儿茶素峰，按照色谱图方法学考察的方法得到可可粉的标准指纹图谱；(e)色谱分析：将每批次所得的供试品溶液的指纹图谱与可可粉标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统比较，来确定可可粉的质量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱颖，郑翊，李丹，
申请(专利权)人：湖北中烟工业有限责任公司，武汉市黄鹤楼科技园有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42