一种羊血液的IgG提取物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种羊血液的IgG提取物，该提取物是通过如下方法制备的：1)向羊血浆中加入硫酸铵至20％饱和度，静置后离心所得上清液中加入硫酸铵至50％饱和度，静置后离心所得沉淀溶解于PBS后加入硫酸铵至33％饱和度，静置后离心所得沉淀为IgG提取物粗品；2)IgG提取物粗品用100kd的超滤膜超滤至少一次实现脱盐浓缩，超滤膜的截留物干燥后即得IgG提取物。本发明专利技术的羊血液的IgG提取物具有高免疫活性，能够给新生羔羊提供理想的被动免疫保护，并能得到较好的生产效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种动物饲料添加剂，尤其涉及一种利用羊血制成的IgG提取物及其 应用。
技术介绍
在现代畜牧业中，为了提高出生动物的存活率，降低其患病，通常在饲料中添加抗 生素、益生素等生物制剂，多年来的持续研究显示大规模、普遍使用抗生素会导致胃肠道细 菌产生耐药性，使得抗生素用量越来越大，应用成本越来越高，其在畜产品中的残留也直接 威胁着人类的健康与安全；而采用益生素则效果较差，益生素所用的益生菌在动物肠道、消 化道中存活时间短，繁殖量低，导致其难以产生理想的效果。 针对上述问题，本领域近年来尝试使用在幼畜饲料中添加免疫球蛋白G代替部分 抗生素、益生素，从而增强动物自身对疾病的免疫效果。免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig) 是具有抗体活性的，能与相应的抗原发生特异性结合反应的球蛋白，普遍存在于哺乳动物 的血液、组织液、淋巴液和体外分泌液中的蛋白质。免疫球蛋白在动物体内具有重要的免疫 和生理调节作用，对于改善婴幼儿、中老年人及免疫力低下人群的健康具有重要的作用。 已有的研究显示，猪、牛、羊等动物的IgG分子一般不能通过动物胎盘，只能依靠 吮吸初乳获得免疫球蛋白形成被动免疫体系。由于母体胎盘的特殊结构，羔羊刚出生时体 内基本没有抗体，而自身开始产生抗体的时间一般都在出生后的三周以后，羔羊从出生到 自身产生主动免疫之前属于抗体空白期。因此，羔羊出生后必须通过吸吮初乳才能获得被 动免疫，从而克服在生长发育的早期阶段免疫系统不健全、对病原菌感染的抵抗力弱等缺 陷。对于出生后适宜时间内未能吃到充足初乳的幼畜来说，就面临着因获得被动免疫的能 力下降而引起低血清IgG，容易患各种传染性疾病，使得新生仔畜抗病力降低、死亡率提高。 由于动物血液中含有1. 5~2%具有活性的免疫球蛋白，是一种丰富、廉价的活性 免疫球蛋白的来源，因此本领域最近几年来开展了多种从动物血液中提取免疫球蛋白的研 究，常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、变性沉淀法、超滤法、柱层析法等，目前生产上应用 的主要有盐析法、低温乙醇沉淀法、超滤法等。其中盐析法可以在常温下生产，是操作最简 单、成本最低廉的技术方案，被本领域广为使用。例如CN101766252A公开了一种羊血高活 性免疫球蛋白浓缩物及制备方法，利用柠檬酸三钠盐析结合超滤法从羊血中获得免疫球蛋 白；也有其他类似的技术方案，利用硫酸铵盐析结合超滤法从羊血中获得免疫球蛋白。这两 种技术方案均面临如下突出的问题：首先是分辨能力差，纯化倍数低，容易在产物中引入非 免疫球蛋白成分，例如白蛋白和纤维蛋白；其次是脱盐过程时间长、耗水量大。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术公开了一种羊血液的IgG提取物，作为饲喂羔羊的 免疫增强成分，通过对提取方法的改进不仅提高了IgG的提取率，而且保证了IgG的活性。 具体地说，本专利技术是通过如下技术方案实现的： -种羊血液的IgG提取物，通过如下方法制备： 1)向羊血浆中加入硫酸铵至20%饱和度，静置后在4°C下离心所得上清液加入硫 酸铵至50%饱和度，静置后离心所得沉淀溶解于PBS后加入硫酸铵至33%饱和度，静置后 离心所得沉淀为IgG提取物粗品； 2)IgG提取物粗品用100kd的超滤膜超滤至少一次实现脱盐浓缩，超滤膜的截留 物干燥后即得IgG提取物。 上述的技术方案，通过使用不同饱和度的饱和硫酸铵，并结合PBS控制pH值在 7. 0-7. 2,提高了IgG的提取率，且不影响IgG活性。 其中，在步骤1)中33%饱和度盐析过程离心速度为4000~6000g，离心15~ 25min〇 为了保证提取效率，在上述步骤中优选采用阶梯离心，步骤1)中33%饱和度盐析 过程离心速度为6000g、5000g、4000g，各离心20min。 也就是说，将50%饱和度的上清液静置后用6000印111、201^11离心，离心后所得沉 淀溶解于PBS后加硫酸铵至33%饱和度静置后用500〇rpm、20min离心，离心后所得沉淀溶 解于？83后加硫酸铵至33%饱和度静置后用4000印111、201^11离心，所得沉淀即为免疫球蛋 白提取物粗品。 在本专利技术中，为了提高超滤脱盐效果，步骤2)中将IgG提取物粗品溶解于PBS至 浓度为8~10%，超滤2~3次，收取截留液。 通过上述方法，通过加入到PBS中调整pH值避免了等电聚焦现象的产生，通过少 量多次脱盐，缩短脱盐时间，避免静电聚焦现象的产生。 在此基础上，申请人深入研究了本专利技术所得羊血免疫球蛋白提取物在喂养出生羔 羊中的应用。 申请人进行的大量研究显示，提取物的用量、喂养方法、时间等都对喂养后羔羊的 发病率、死亡率具有重要影响。从而确定了如下的优化方法：采用加入到人工初乳中一次性 或分两次饲喂的方法，人工初乳中含有IgG提取物3~12g。 采用上述方法，其喂养效果最大程度的接近于完全母乳喂养的效果或优于母乳喂 养的效果，可用作母乳喂养的替代品。 优选的，在羔羊出生后半小时或两小时内饲喂，人工初乳中含有IgG提取物3~ 12g，最优选为3g-次性饲喂。在该用量下，能够给新生羔羊提供理想的被动免疫保护，并 能得到较好的生产效益。 本领域技术人员容易理解，本专利技术的IgG提取物在使用时还需要加入到牛乳等中 配制成人工初乳，这是本领域所通用的，在实际应用中可选择任何可用的类型。 本专利技术的技术方案，具有如下技术进步： i.羊血液来源广、价格便宜、容易获得且IgG含量较高，是提取羊IgG粗品的理想 材料。ii.盐析法结合超滤技术粗提羊IgG，能获得较高浓度、纯度及效价的羊IgG粗品。iii.将提取物配制成人工初乳配方具有原料（牛奶羊IgG提取物）来源广、配制 操作简单、免疫增强剂效价高、成本低、稳定性好、使用方便等特点，因此，具有广泛的应用 推广前景。【附图说明】 图1为本专利技术的IgG提取物制备方法流程图。【具体实施方式】 在下述实施例中，申请人提供了本专利技术的若干具体实现，如下所用到的原料、设 备、制剂等仅为示意性的，并不构成特别限定。本领域技术人员在理解本专利技术实质精神基础 上所进行的改进、替换、调整依旧属于本专利技术的保护范围。 在下述实验中，所用的羊全血用10%的草酸钾抗凝，抗凝血于5000rpmX15min离 心，弃去红细胞，制备血浆，在4°C的条件下保存备用。 在下述实验中，所用的各种试剂和实验设备均可从市场购买，也可根据需要自行 配制。 在免疫球蛋白提取物提取过程中，主要使用了盐析使目标蛋白沉淀和超滤法脱盐 的步骤。在盐析过程中，使用了硫酸铵。在超滤过程中，使用了l〇〇kd的超滤膜。 参考附图1所示，显示了本专利技术所用IgG提取物的制备方法，取保存的血浆向其中 加入硫酸铵至其为20%饱和度，静置后在4°C下离心得到血清。离心所得上清液以1L:189g 的比例加硫酸铵，至其为50 %饱和度，静置过夜后在6000rpm下离心20min，所得沉淀溶解 于PBS(pH7. 0，0. 01M)，充分溶解后加入硫酸铵至其为33 %饱和度，静置过夜后在5000rpm 下离心20min，所得沉淀溶解于PBS(pH7. 0,0. 01M)，充分溶解后加入硫酸铵至其为33%饱 和度，静置过夜后在4000rpm下离心20min，所得沉本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羊血液的IgG提取物，其特征在于通过如下方法制备：1)向羊血浆中加入硫酸铵至20％饱和度，静置后在4℃下离心所得上清液中加入硫酸铵至50％饱和度，静置后离心所得沉淀溶解于PBS后加入硫酸铵至33％饱和度，静置后离心所得沉淀为IgG提取物粗品；2)IgG提取物粗品用100kd的超滤膜超滤至少一次实现脱盐浓缩，超滤膜的截留物干燥后即得IgG提取物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：照日格图，
申请(专利权)人：照日格图，斯日古楞，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15