火焰南天竹的再生培养方法技术

技术编号:12816706 阅读:554 留言:0更新日期:2016-02-07 09:44
本发明专利技术公开了一种火焰南天竹的再生培养方法,包括:以火焰南天竹的叶片为外植体,接种于含有TDZ和2,4-D的再生培养基上进行再生培养,获得再生不定芽;将所述的再生不定芽置于芽伸长培养基上进行培养,获得无根植株;取所述无根植株的茎段进行生根培养,获得火焰南天竹再生植株。本发明专利技术建立了以叶片为外植体的火焰南天竹高效稳定的再生体系,通过改良培养基、培养条件,提高不定芽再生率,促进不定芽新梢生根,为火焰南天竹的分子生物学以及基因工程研究提供了一条新的途径,为火焰南天竹基因工程研究和基因转化提供基础。

【技术实现步骤摘要】
火焰南天竹的再生培养方法
本专利技术涉及植物生物
,特别涉及一种火焰南天竹的再生培养方法。
技术介绍
火焰南天竹是一种新型的绿化苗木,它冬季叶色娇艳似火深受人民的喜爱。由于火焰南天竹植株矮小,茎节短,节间只有普通南天竹的l/10,枝条细弱,扦插繁殖困难且繁殖速度慢。自从1995年上海植物园作为资源收集引进该品种以来,我国对火焰南天竹的研究才开始,生产上通常采用扦插育苗法,繁殖周期长,繁殖率极低,在生产中不能取得很好的效果。随着近年组织培养技术的不断发展,特别是利用植物组织培养及快速繁殖技术,进行苗木繁殖,更是对常规繁殖技术的一次重大革命,显示了其强大的生命力和广阔的发展前景。采用组织培养快繁技术繁殖既可以得到整齐一致的无性系材料,又能提高繁殖系数,在短期内获得大量苗木,克服常规繁殖的弊端,为火焰南天竹的快速推广和产业化提供保障,具有较为广泛的社会效益、生态效益和经济效益。但是,由于火焰南天竹的节间短、增殖系数低,传统的组织培养技术对于火焰南天竹的培养效果较差。而且,目前随着分子生物学研究的不断深入,越来越多的研究转向与对植物基因的研究,转基因的研究是其中的一个重点和热点问题,转基因的成功与否依赖一个高效、稳定的再生体系。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的缺陷而提供一种高效稳定的以叶片为外植体的火焰南天竹的再生培养方法。为达到上述目的,本专利技术是通过以下的技术方案来实现的:本专利技术所述的火焰南天竹的再生培养方法,包括:(1)以火焰南天竹的叶片为外植体,接种于含有TDZ和2,4-D的再生培养基上进行再生培养,获得再生不定芽;(2)将所述的再生不定芽置于芽伸长培养基上进行培养,获得无根植株;(3)取所述无根植株的茎段进行生根培养,获得火焰南天竹再生植株。本专利技术以叶片作为外植体,在再生培养基中添加TDZ和2,4-D两种植物生长调节剂,可诱导火焰南天竹的叶片产生再生不定芽,再生不定芽经伸长、生根后即可获得火焰南天竹再生植株。优选的,所述的叶片取自火焰南天竹的无菌组培苗。一般选取30~35天叶龄的无菌组培苗上嫩绿、平展的叶片,去除叶尖和叶缘,剪成2~4mm2的叶块进行接种。所述无菌组培苗的获取方法包括:取火焰南天竹的顶芽,消毒后置于分化培养基上进行培养,将分化的植株进行继代培养,获取无菌组培苗。优选的,所述的分化培养基为改良MS+6-BA1.5mg/L+IBA0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L,pH5.8,所述的继代培养的培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L,pH5.8。所述的再生培养基的配方可以为:改良MS+TDZ+2,4-D+蔗糖25~35g/L+琼脂5~7g/L。具体的,再生培养基中,蔗糖的浓度可以为30g/L,琼脂的浓度可以为6g/L。再生培养时,使用合适的浓度、比例的TDZ和2,4-D,能够提高不定芽的再生率及每外植体的再生芽数,优选的,所述再生培养基中,TDZ的浓度为1.5~2.5mg/L,2,4-D的浓度为0.2~0.3mg/L。进一步优选的,TDZ的浓度为2.5mg/L,2,4-D的浓度为0.2mg/L;或TDZ的浓度为1.5mg/L,2,4-D的浓度为0.2mg/L。采用前者的植物生长调节剂组合,不定芽再生率可达95.8%,采用后者的植物生长调节剂组合,可以维持较高的不定芽再生率(81.5%)的同时减少玻璃化芽。优选的,所述的再生培养为暗培养,所述暗培养的时间为12~21天。更优选的,所述暗培养的时间为14天。再生不定芽一般长至1cm左右,即可接种到芽伸长培养基上进行培养。优选的,所述的芽伸长培养基含有6-BA0.4~0.6mg/L和NAA0.1~0.2mg/L。进一步优选的,所述的芽伸长培养基含有6-BA0.5mg/L和NAA0.1mg/L。所述的芽伸长培养基的配方可以为:改良MS+0.4~0.6mg/L+NAA0.1~0.2mg/L+蔗糖25~35g/L+琼脂5~7g/L。具体的,芽伸长培养基中,蔗糖的浓度可以为30g/L,琼脂的浓度可以为6g/L。一般,再生不定芽伸长培养成3cm左右的无根植株时,即可取无根植株1~1.5cm的茎段进行生根培养。优选的,所述的生根培养的培养基为添加植物生长调节剂、蔗糖和琼脂的改良MS培养基,所述的改良MS培养基以水为溶剂,由大量元素、微量元素和有机物质组成,其中,大量元素包括:(NH4)2SO4580~620mg/L、CO(NH2)480~520mg/L、KNO3930~970mg/L、CaCl2·2H2O200~240mg/L、MgSO4·7H2O175~195mg/L和KH2PO475~95mg/L;微量元素包括:KI0.35~0.45mg/L、H3BO33~3.2mg/L、MnSO4·4H2O1.1~1.2mg/L、ZnSO4·7H2O4.2~4.4mg/L、Na2MoO4·2H2O0.12~0.13mg/L、FeSO4·7H2O27.5~28mg/L和Na2-EDTA·2H2O37~37.5mg/L;有机物质包括:肌醇45~55mg/L、烟酸0.4~0.6mg/L、盐酸吡哆醇0.4~0.6mg/L、盐酸硫胺素0.05~0.15mg/L、泛酸钙0.8~1.2mg/L、维生素C1.8~2.2mg/L和甘氨酸1.8~2.2mg/L。进一步优选的,所述的改良MS的组成为:大量元素:(NH4)2SO4600mg/L、CO(NH2)500mg/L、KNO3950mg/L、CaCl2·2H2O220mg/L、MgSO4·7H2O185mg/L和KH2PO485mg/L;微量元素:KI0.41mg/L、H3BO33.1mg/L、MnSO4·4H2O1.15mg/L、ZnSO4·7H2O4.3mg/L、Na2MoO4·2H2O0.125mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L和Na2-EDTA·2H2O37.3mg/L;有机物质:肌醇50mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、泛酸钙1mg/L、维生素C2mg/L和甘氨酸2.0mg/L。优选的,生根培养基中,所述的植物生长调节剂为NAA,浓度为0.4~0.6mg/L。进一步优选的,生根培养基中,NAA的浓度为0.4mg/L。生根培养基中,蔗糖的浓度为25~35g/L,琼脂的浓度为5~7g/L,进一步,蔗糖的浓度可以为30g/L,琼脂的浓度可以为6g/L。本专利技术中,再生培养基、芽伸长培养基、分化培养基、继代培养基中涉及的改良MS,均采用上述的改良MS的配方。与现有技术相比,本专利技术的有益效果为:本专利技术建立了以叶片为外植体的火焰南天竹高效稳定的再生体系,通过改良培养基、培养条件,提高不定芽再生率(可达95.8%),促进不定芽新梢生根,为火焰南天竹的分子生物学以及基因工程研究提供了一条新的途径,为火焰南天竹基因工程研究和基因转化提供基础。附图说明图1为添加TDZ2.5mg/L和2,4-D0.2mg/L的再生培养基中叶片再生情况图;图2为添加TDZ1.5mg/L和2,4-D0.2mg/L的再生培养基中叶片再生情况图;图3为添加TDZ2.5mg/L和2,4-D0.2mg/L的再生培养基中平均每本文档来自技高网...
火焰南天竹的再生培养方法

【技术保护点】
一种火焰南天竹的再生培养方法,其特征在于,包括:(1)以火焰南天竹的叶片为外植体,接种于含有TDZ和2,4‑D的再生培养基上进行再生培养,获得再生不定芽;(2)将所述的再生不定芽置于芽伸长培养基上进行培养,获得无根植株;(3)取所述无根植株的茎段进行生根培养,获得火焰南天竹再生植株。

【技术特征摘要】
1.一种火焰南天竹的再生培养方法,其特征在于,包括:(1)以火焰南天竹的叶片为外植体,接种于再生培养基上进行再生培养,获得再生不定芽;(2)将所述的再生不定芽置于芽伸长培养基上进行培养,获得无根植株;(3)取所述无根植株的茎段进行生根培养,获得火焰南天竹再生植株;所述的再生培养基的配方为:改良MS+TDZ1.5~2.5mg/L+2,4-D0.2~0.3mg/L+蔗糖25~35g/L+琼脂5~7g/L;所述的芽伸长培养基的配方为:改良MS+6-BA0.4~0.6mg/L+NAA0.1~0.2mg/L+蔗糖25~35g/L+琼脂5~7g/L;所述生根培养的培养基配方为:改良MS+NAA0.4~0.6mg/L+蔗糖25~35g/L+琼脂5~7g/L;所述的改良MS培养基由大量元素、微量元素和有机物质组成,其中,大量元素为:(NH4)2SO4580~620mg/L、CO(NH2)2480~520mg/L、KNO3930~970mg/L、CaCl2·2H2O200~240mg/L、MgSO4·7H2O175~195mg/L和KH2...

【专利技术属性】
技术研发人员:贾思振张立伟王媛花颜志明
申请(专利权)人:江苏农林职业技术学院
类型:发明
国别省市:江苏;32

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