本发明专利技术公开了EB病毒编码的microRNA BART6-3p在制备鼻咽癌细胞抑制剂上的应用。microRNA BART6-3p用于制备抑制鼻咽癌细胞生长、增殖和预防肿瘤细胞侵袭转移的制剂；microRNA BART6-3p的序列：CGGGGAUCGGACUAGCCUUAGA。进一步用于制备抑制鼻咽癌细胞骨架组装和重构的制剂。本发明专利技术为鼻咽癌的辅助治疗提供了强有力的分子生物学工具，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及利用EB病毒编码的microRNA BART6-3p制备鼻咽癌细胞抑制剂的方法。
技术介绍
EB病毒(^Epstein Barr virus, EBV)是一种普遍存在的人类疱疹病毒，可以感染全 球95 %左右的成人人口，除偶尔有一小部分人会引起传染性的单核细胞增多症外，大部分 被感染者不会出现任何的临床症状，绝大多数情况下EBV可以在宿主体内长期潜伏感染。 然而，在某些情况下潜伏感染的EBV会导致恶性肿瘤的发生，包括B细胞来源的伯基特和何 杰金氏淋巴瘤，以及上皮细胞来源鼻咽癌和胃癌等。EBV导致恶性肿瘤发生的机制目前尚未 完全明了，可能与EBV本身编码一系列基因的表达有关，如EBV编码的潜伏膜蛋白1 (Latent Membrane Proteinl，LMPl)作为一种致瘤蛋白，能激活许多宿主细胞内癌基因的表达，抑制 抑瘤基因的结构和功能。 EBV作为双链DNA病毒其基因组大小约为170kb，除了可转录一系列蛋白编码基 因外，最近还发现EBV也可编码一类微小RNA (microRNA，miRNA)分子。miRNA是一种长约 20~25nt的调控型非编码RNA，与mRNA不同，miRNA不是DNA和蛋白质之间的"桥梁"，而 是通过与目的基因靶向结合，调控基因的表达水平。EBV是第一个被发现可编码miRNA的病 毒，进入宿主后EBV即开始表达产生miRNA，发挥生物学作用。目前已发现EBV可编码25个 miRNAs前体，加工成44个成熟的miRNAs，且EBV编码的miRNAs在EBV基因组上成簇分布， 可以分为BART和BHRF1两组。EBV编码的miRNAs可能通过调控EBV本身编码的基因或者 宿主细胞内的基因，从而参与了 EBV介导的肿瘤恶性转化，影响包括鼻咽癌、胃癌、淋巴瘤 等在内的多种肿瘤的发生发展。然而目前对于EBV编码miRNAs的研究还不是很透彻，44个 成熟的EBV miRNAs中大部分还没有功能研究的报道，比如有关EBV编码的miRNABART6-3p 的作用及机制的研究就很少。迄今为止有关BART6-3p在鼻咽癌、胃癌等实体瘤发生发展中 的作用的关系及其在实体瘤病人的早期筛查、辅助诊断或者疗效预测等方面均没有文献报 道。 我们通过研究表明，BART6-3P在鼻咽癌和胃癌组织中的表达均显著升高，但是非 常有意思的是在鼻咽癌和胃癌组织中BART6-3p的表达水平与鼻咽癌和胃癌患者的复发转 移呈负相关关系，低表达BART6-3p的患者比高表达BART6-3p的患者更容易发生复发和 转移，预后更差。这表明尽管EBV是比较明确的致瘤性病毒，但并非EBV编码的基因全部 都具有促进肿瘤发生发展的作用，部分基因，包括BART6-3p可能具有抑瘤功能，这也表明 EBV miRNAs的表达水平与肿瘤复发、转移预后等临床表型的关系不能推测，只能通过具体 而细致的实验研究才能确定。因此，针对BART6-3p设计专用原位杂交探针及检测试剂盒， 或者利用BART6-3p特异性引物进行实时荧光定量PCR等技术检测鼻咽癌和胃癌组织中 BART6-3p的表达水平有望为临床上对肿瘤进行复发和转移的预测提供参考。 我们在鼻咽癌及胃癌细胞中转染人工合成的BART6-3p，证实在EBV阴性的鼻咽癌 和胃癌细胞中表达BART6-3p可以明显抑制肿瘤细胞的生长增殖以及侵袭转移能力。因此， BART6-3p又可以用于制备抑制肿瘤细胞生长、增殖和预防肿瘤细胞侵袭转移的制剂。 我们还设计了一系列的实验检测了 BART6-3P在鼻咽癌和胃癌细胞中发挥生物学 功能的分子机制，我们发现BART6-3p可抑制细胞内一个长链非编码RNA(long non-coding RNA，IncRNA)基因 L0C553103 的表达（Reference Sequence :NR_110997)，我们设计了针对 L0C553103的RNA干扰序列（siRNA)转染鼻咽癌和胃癌细胞，抑制L0C553103的表达后，细 胞出现类似转染BART6-3p的细胞生物学表型，即抑制肿瘤细胞生长和增殖以及抑制肿瘤 细胞侵袭与转移能力。因此，针对L0C553103的RNA干扰序列（siRNA)也可以用于制备抑 制肿瘤细胞生长、增殖和预防肿瘤细胞侵袭转移的制剂。此前，有关L0C553103的功能未见 任何文献报道。 细胞骨架是真核细胞中由微管、微丝和中间纤维三种蛋白纤维搭建而成的存在于 胞浆内的网络结构，三种成分高度协调分布，将胞核、质膜、各细胞器连在一起，构成了细胞 形态维持和运动协调的支持系统。近年来的研究表明肿瘤细胞运动迀移和侵袭能力与细胞 骨架的动态调控密切相关，靶向细胞骨架的药物也可以诱导肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤细胞的 增殖。我们通过系列实验证实了 BART6-3p可通过靶向抑制宿主细胞中L0C553103的表达， 影响肿瘤细胞中微管微丝的组装，调控细胞骨架的重构，最终导致肿瘤细胞生长、增殖、侵 袭、转移等表型的变化。因此，BART6-3p和针对L0C553103的RNA干扰序列（siRNA)还可 以用于制备抑制肿瘤细胞骨架组装和重构的制剂。 另外，我们又在鼻咽癌和胃癌的临床样本中检测L0C553103的表达状况，发现其 在癌旁对照组织中高表达，而在大部分肿瘤组织中低表达，且与BART6-3p的表达呈负相 关，L0C553103的表达可以作为患者预后的指标，因此，针对L0C553103设计专用的实时荧 光定量PCR引物及检测试剂盒或原位杂交探针及检测试剂盒，用于检测鼻咽癌和胃癌组织 L0C553103的表达水平有望为临床上对这两种肿瘤进行复发转移及预后预测提供参考。 总之，我们的研究揭示了 BART6-3p及一个新的IncRNA基因 L0C553103在鼻咽癌 和胃癌等恶性肿瘤发病过程中的功能，为BART6-3p和L0C553103的应用方法提供了实证。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种EB病毒编码的microRNA BART6-3P的应用方法，具体 是利用BART6-3p的序列制备用于抑制鼻咽癌细胞的制剂。 EBV编码mi croRNA BART6-3P在制备鼻咽癌细胞抑制剂上的应用，mi croRNA BART6-3p用于制备抑制鼻咽癌细胞生长、增殖和预防肿瘤细胞侵袭转移的制剂；microRNA BART6-3p 的序列：CGGGGAUCGGACUAGCCUUAGA。microRNA BART6-3p 进一步用于制备抑制鼻 咽癌细胞骨架组装和重构的制剂。 本专利技术探讨了 BART6-3p抑制肿瘤细胞生长、增殖、侵袭和转移能力的具体机制， 发现表达BART6-3p可以改变肿瘤细胞中细胞骨架的完整性，而细胞骨架的动态组装是肿 瘤细胞侵袭转移的基础，细胞骨架完整性的破坏可以诱导肿瘤细胞凋亡抑制肿瘤细胞增 殖，这就可以解释BART6-3p为什么具有抑制肿瘤恶性表型（生长、增殖、侵袭、转移）的能 力。本专利技术为鼻咽癌的辅助治疗提供了强有力的分子生物学工具，具有深远的临床意义和 重要的推广应用前景。【附图说明】 图1为实时荧光定量PCR技术检测BART6-3p在鼻咽癌和正常鼻咽上皮中的表达 情况， BART本文档来自技高网...
【技术保护点】
EB病毒编码的microRNA BART6‑3p在制备鼻咽癌细胞抑制剂上的应用，其特征在于，microRNA BART6‑3p用于制备抑制鼻咽癌肿瘤细胞生长、增殖和预防肿瘤细胞侵袭转移的制剂；microRNA BART6‑3p的序列：CGGGGAUCGGACUAGCCUUAGA。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曾朝阳，何宝玉，李桂源，熊炜，李小玲，李夏雨，张文玲，石磊，向波，龚朝建，陈攀，廖前进，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。