本发明专利技术公开了一种采用深层液体发酵提取纳豆激酶的方法。该方法采用如下步骤制备纳豆激酶：菌种培养，空消，投料，实消，接菌种悬浮液，移种，放罐清洗，过滤，低温冷冻干燥，粉碎，分装，包装，储存。采用本发明专利技术的方法制备纳豆激酶，产量高，产品纯净，杂质含量低，纳豆激酶含量可大4000IU/g以上，达到了具有口服药用效果所规定的含量，也可以作为保健品长期服用该产品，该制备方法简单，流程容易控制，重复性高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种高产纳豆激酶的提取方法，特别涉及。
技术介绍
纳豆菌产自纳豆，纳豆是日本人把煮熟的大豆用稻草包起来、在40°C的温度下发酵而成的一种食品。纳豆菌的发酵产物中含有纳豆激酶，是一种能够溶解血栓的酵素，并且无毒副作用，纳豆激酶是一种理想的治疗和预防血栓的潜在药物，只是，纳豆菌发酵产生的纳豆激酶产量低，酶不稳定容易失活，限制了其发展应用，但是，作为纳豆菌发酵的食品和饮料，长期使用，则有一定的预防和保健效果。目前，采用自然发酵的纳豆产生的纳豆菌含量低，且不容易提取，只能作为一种保健食品使用。专利00107589.6公开了一种纳豆激酶的生产方法和用途；专利200610104111.2公开了纳豆激酶粉制备方法及纳豆巴西菇胶囊；专利201310154402.2公开了一种以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法；专利200810228955.7公开了一种产生纳豆激酶的枯草芽孢杆菌纳豆亚种及其应用；专利200710151453.4公开了纳豆制备工艺及含纳豆提取物的保健食品。上述专利公开的方法制备的纳豆激酶产量低，活性不高，含杂质较多，作为保健品使用可以，作为治疗血栓的口服药物使用则不够理想。
技术实现思路
本专利技术是为了克服上述现有技术中缺陷，通过采用深层液体发酵提取纳豆激酶，获得高活性纳豆激酶产品。，按照如下步骤进行:(1)菌种培养将保存的纳豆菌菌种进行活化，斜面培养的步骤，收集斜面培养的菌种加入到含有菌悬液的摇瓶中，镜检孢子数达到lX10s-lX107ml ;(2)空消种子罐经消洗，检查后关闭所有与罐体连通的阀门，盖紧人孔，开三路蒸汽，打开蒸汽阀，排净空气，关闭排气阀，使罐压升至0.10-0.20mpa，打开所有与种子罐有关的小排气阀，排气20-40分钟，再关闭小排气阀，使罐压升至0.10-0.20mpa，然后全开排气阀，待罐压降至0时，打开人孔，排尽管内的冷凝水，关种子罐底阀门，准备进料；⑶投料关闭种子罐底出料阀，开启罐顶入料阀，关闭取样过滤器，冷却水进口 ；打开配料罐出口阀，输送栗入口，起栗，开启栗出口门上料；上料完毕停栗反吹料液管道，扫净料液管中残料；⑷实消按空消方式三路进蒸汽，开排气门，当罐压升至0.01-0.03mpa，调节蒸汽门，保持恒温打开所有罐顶通向外面的阀门，排气10-30分钟，关闭蒸汽，打开空气过滤器出口通入罐内，用牛皮纸包扎接种关口，关闭小排气阀，开启冷却水，使罐温降至35-37 °C，关闭冷却水；(5)接菌种悬浮液将种子罐的压降至0，除去接种口上的盖帽，在火焰下将摇瓶种子倒入种子罐，拧紧种子罐接种口的盖帽，调整罐压至0.05-0.15mpa ;(6)移种将种子罐底阀至分配站、发酵罐的管道灭菌，管道从发酵罐方通入0.1-0.2mpa无菌蒸汽，灭菌10-30分钟，打开所有管道上的小排气阀；灭菌完毕，打开发酵罐接种阀，通入无菌空气，关闭小排气阀，待管路冷却至接种温度30-35°C，种子罐底阀，升高种子罐压力至0.1-0.2mpa，切换分配站阀门，降低发酵罐压至0.02-0.04mpa，将种子液压入发酵罐；接种完毕，调罐压至0.05-0.15mpa，温度30_34°C，发酵周期150_180h，移种完毕，用蒸汽冲洗移种管线中的残料，关闭阀门；(7)放罐清洗当PH达到7.0-7.5，终止发酵，停空气，停搅拌，打开出料阀，发酵液贮罐入料阀，利用压缩空气将料压至发酵液贮罐；料压净后，关闭出料阀，开排污阀，停压缩空气，当罐压为零时，打开人孔，用水清洗罐内所有装置，冲洗完毕通入空气，吹出C02;(8)过滤利用板框压缩，除去菌丝体，至过滤液透明无菌丝，残渣中杂质质量分数小于1% ;(9)低温冷冻干燥:操作温度在-25°C —30°C，操作时间为72小时-96小时；(10)粉碎，分装，包装，储存。所述纳豆菌菌种为枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC N0.11274。所述发酵罐中装填发酵料，所述发酵料为处理加工过的黄豆，处理加工过程为:选取黄豆清洗干净，浸泡24小时，磨碎，121°C高温灭菌60min，降温至常温备用。所述发酵罐中装填发酵料，所述发酵料为处理加工过的红豆，处理加工过程为:选取红豆清洗干净，浸泡36小时，磨碎，121°C高温灭菌60min，降温至常温备用。所述发酵罐中装填发酵料，所述发酵料为水果，所述水果经过去核或去皮，磨碎，115°C灭菌30min，降温至常温备用，所述水果选自苹果，梨，桃，柿子，杏，柑橘，柚子，橙子，香蕉，西瓜，葡萄中的一种或一种以上。所述发酵罐中装填发酵料，所述发酵料为蔬菜，所述蔬菜经过磨碎，115°C灭菌30min，降温至常温备用，所述蔬菜选自白菜，土豆，萝卜，胡萝卜，洋葱，菠菜，韭菜，香菜，芹菜中的一种或一种以上。所述种子罐中装填培养基，所述培养基由以下重量份数的组分组成:蛋白胨50-60份，磷酸二氢钾1-3份，硫酸铵1-5份，氯化钠1-5份，葡萄糖20-45份，硫酸镁1_2份，蔗糖10-30份，琼脂10-20份，去离子水500-800份。所述步骤(8)所述过滤的操作步骤为:1)检查板框液压系统及装置，将合格滤布平整地铺在板框间；2)启动液压栗，顶紧，压力控制在7_9Mpa ；3)将发酵液用栗输入板框，起栗时，掀开板框入料阀、回流阀，开贮罐口、栗入口，起栗；4)过滤时，料液要始终保证温度恒定，搅拌不能停止，滤液要保证清晰透明，出料减慢时，证明滤渣已满，停止进料，罐渣吹干后将接收槽内料液排净，堵好出口，启动液压系统，退回板框，清理框内滤饼，洗好滤布，重新装好顶紧。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果:采用本专利技术的方法制备纳豆激酶，产量高，产品纯净，杂质含量低，纳豆激酶含量可大4000IU/g以上，达到了具有口服药用效果所规定的含量，也可以作为保健品长期服用该产品，该制备方法简单，流程容易控制，重复性尚°【具体实施方式】下面对本专利技术的【具体实施方式】进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受【具体实施方式】的限制。实施例1，按照如下步骤进行:(1)菌种培养将保存的纳豆菌菌种进行活化，斜面培养的步骤，收集斜面培养的菌种加入到含有菌悬液的摇瓶中，镜检孢子数达到5X10s/mL ;所述纳豆菌菌种为枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC N0.11274，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，中国北京朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Bacillus subtilis。(2)空消种子罐经消洗，检查后关闭所有与罐体连通的阀门，盖紧人孔，开三路蒸汽，打开蒸汽阀，排净空气，关闭排气阀，使罐压升至0.15mpa，打开所有与种子罐有关的小排气阀，排气30分钟，再关闭小排气阀，使罐压升至0.15mpa，然后全开排气阀，待罐压降至0时，打开人孔，排尽管内的冷凝水，关种子罐底阀门，准备进料；(3)投料关闭种子罐底出料阀，开启罐顶入料阀，关闭取样过滤器，冷却水进口 ；打开配料罐出口阀，输送栗入口，起栗，开启栗出口门上料；上料完毕停栗反吹料液管道，扫净料液管中残料；所述种子罐中装填培养基，所述培养基由以下重量份数的组分组成:蛋白胨55份，磷酸二氢钾2份，硫酸铵2份，当前第1页1 2 3 4 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种采用深层液体发酵提取纳豆激酶的方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)菌种培养将保存的纳豆菌菌种进行活化，斜面培养的步骤，收集斜面培养的菌种加入到含有菌悬液的摇瓶中，镜检孢子数达到1X108‑1X109/ml；(2)空消种子罐经消洗，检查后关闭所有与罐体连通的阀门，盖紧人孔，开三路蒸汽，打开蒸汽阀，排净空气，关闭排气阀，使罐压升至0.10‑0.20mpa，打开所有与种子罐有关的小排气阀，排气20‑40分钟，再关闭小排气阀，使罐压升至0.10‑0.20mpa，然后全开排气阀，待罐压降至0时，打开人孔，排尽管内的冷凝水，关种子罐底阀门，准备进料；(3)投料关闭种子罐底出料阀，开启罐顶入料阀，关闭取样过滤器，冷却水进口；打开配料罐出口阀，输送泵入口，起泵，开启泵出口门上料；上料完毕停泵反吹料液管道，扫净料液管中残料；(4)实消按空消方式三路进蒸汽，开排气门，当罐压升至0.01‑0.03mpa，调节蒸汽门，保持恒温打开所有罐顶通向外面的阀门，排气10‑30分钟，关闭蒸汽，打开空气过滤器出口通入罐内，用牛皮纸包扎接种关口，关闭小排气阀，开启冷却水，使罐温降至35‑37℃，关闭冷却水；(5)接菌种悬浮液将种子罐的压降至0，除去接种口上的盖帽，在火焰下将摇瓶种子倒入种子罐，拧紧种子罐接种口的盖帽，调整罐压至0.05‑0.15mpa；(6)移种将种子罐底阀至分配站、发酵罐的管道灭菌，管道从发酵罐方通入0.1‑0.2mpa无菌蒸汽，灭菌10‑30分钟，打开所有管道上的小排气阀；灭菌完毕，打开发酵罐接种阀，通入无菌空气，关闭小排气阀，待管路冷却至接种温度30‑35℃，种子罐底阀，升高种子罐压力至0.1‑0.2mpa，切换分配站阀门，降低发酵罐压至0.02‑0.04mpa，将种子液压入发酵罐；接种完毕，调罐压至0.05‑0.15mpa，温度30‑34℃，发酵周期150‑180h，移种完毕，用蒸汽冲洗移种管线中的残料，关闭阀门；(7)放罐清洗当PH达到7.0‑7.5，终止发酵，停空气，停搅拌，打开出料阀，发酵液贮罐入料阀，利用压缩空气将料压至发酵液贮罐；料压净后，关闭出料阀，开排污阀，停压缩空气，当罐压为零时，打开人孔，用水清洗罐内所有装置，冲洗完毕通入空气，吹出CO2；(8)过滤利用板框压缩，除去菌丝体，至过滤液透明无菌丝，残渣中杂质质量分数小于1％；(9)低温冷冻干燥：操作温度在‑25℃‑‑30℃，操作时间为72小时‑96小时；(10)粉碎，分装，包装，储存。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张淑莲，赵廷远，陈旅平，包选平，
申请(专利权)人：张淑莲，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。