用于实现治疗有效剂量的抗CD47剂的方法技术

本文提供用于通过在向受试者施用治疗有效剂量的抗CD47剂之前施用引物剂来用治疗剂量的抗CD47剂治疗所述受试者的方法。细胞的更新开始于诱导标记它们以用于除去的细胞凋亡程序或其它细胞变化，以及通过吞噬细胞(包括巨噬细胞、树突细胞等)随后识别标志物。此过程要求不想要的细胞的特异性和选择性除去。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】用于实现治疗有效剂量的抗CD47剂的方法
技术介绍
细胞的更新开始于诱导标记它们W用于除去的细胞调亡程序或其它细胞变化，W 及通过吞隧细胞（包括巨隧细胞、树突细胞等）随后识别标志物。此过程要求不想要的细 胞的特异性和选择性除去。与健康细胞不同，不想要的/老化的/垂死细胞展示被称为"吃 我（eat-me)"信号即"改变自身"的标志物或配体，其进而可由吞隧细胞上的受体识别。健 康细胞可展示积极抑制吞隧作用的"别吃我"信号；运些信号在垂死细胞中下调、存在于改 变的构象中或它们优先于"吃我"或促吞隧信号的上调。健康细胞上的细胞表面蛋白CD47 W及其吞隧细胞受体SIRPa的接合构成可关闭由多种形式（包括调亡细胞清除和FcR介 导的吞隧作用）介导的吞入的关键"别吃我"信号。阻断CD47介导的吞隧细胞上的SIRPa 的接合或在敲除小鼠中的CD47表达的损失可引起活细胞和非老化红细胞的除去。对于其 中还存在预吞隧信号的那些细胞来说，阻断SIRPa还允许通常不被吞隧的祀标的吞入。CD47是广泛表达的具有单个Ig样结构域和五个跨膜区的跨膜糖蛋白，其充 当SIRPa的细胞配体，其中结合通过SIRPa的N肥末端V样结构域介导。SIRPa主 要在骨髓细胞上表达，包括巨隧细胞、粒细胞、骨髓树突细胞值C)、肥大细胞W及它们 的前体，包括造血干细胞。SIRPa上介导CD47结合的结构决定簇由Lee等（2007) J.Immunol. 179:7741-7750;Hatherley等（2007)J.B.C. 282:14567-75 讨论；并且SIRPa 顺式二聚在CD47结合中的作用由Lee等（2010)J.B.C. 285:37953-63讨论。与CD47抑制 正常细胞的吞隧作用的作用一致，有证据表明它在临迁移期之前和在迁移期期间在造血干 细胞化SC)和祖细胞上瞬时上调，并且运些细胞上的CD47的水平决定它们在体内被吞入的 可能性。 编程性细胞死亡（PCD)和吞隧细胞除去是生物体响应W便除去受损的、癌前或感 染的细胞的常见方式。因此，在此生物体响应情况下存活的细胞（例如，癌性细胞、长期感 染的细胞等）已经设计了用于逃避PCD和吞隧细胞除去的方式。CD47("别吃我"信号）在 各种各样的患病细胞、癌细胞W及受感染细胞上组成型上调，从而允许运些细胞逃避吞隧 作用。阻断一种细胞（例如，癌细胞、感染的细胞等）上的CD47与另一种细胞（例如，吞隧 细胞）上的SIRPa之间的相互作用的抗CD47剂抵消CD47表达的增加并且促进癌细胞和 /或受感染细胞的吞隧作用。因此，抗CD47剂可用于治疗和/或保护免受各种各样的病状 /病症。 然而，初始高剂量的抗CD47剂可引起小鼠和非人灵长类动物（NH巧模型中的红细 胞（RBC)的剂量依赖性损失。运种贫血的严重性可排除实现与治疗功效相关的持续血清浓 度所要求的更高剂量的使用。本专利技术提供减轻抗CD47剂的红细胞毒性、从而能够用治疗有 效量的抗CD47剂治疗的方法。
技术实现思路
提供用于通过在向个体施用治疗有效剂量的抗CD47剂之前施用引物剂来用治疗 剂量的抗CD47剂治疗所述个体的方法。在一些实施方案中，本专利技术的方法适用于优化针对 调节CD47介导的吞隧作用的疗法。在一些此类实施方案中，正在针对癌症用一定剂量的抗CD47剂治疗个体。在其它实施方案中，正在针对细胞内病原体感染用一定剂量的抗CD47剂 治疗个体。在主题方法中，在施用引物剂之后约3天至约21天施用治疗有效剂量的抗CD47 剂。 在本专利技术的一些实施方案中，施用两种或更多种引物剂。适合的引物剂包括红细 胞生成刺激剂巧SA)和/或引发剂量的抗CD47剂。 用于在本专利技术的方法中使用的抗CD47剂干扰存在于祀细胞（包括但不限于癌细 胞、感染细胞内病原体的细胞、干细胞等）上的CD47与存在于吞隧细胞上的SIRPa之间的 结合。通常运两种细胞均存在于所治疗的个体中。在促吞隧信号的存在下此类方法可增加 祀细胞的吞隧作用。主题方法可用于针对对CD47介导的SIRPa信号传导的阻断敏感的任 何疾病治疗受试者。适合的抗CD47剂包括可溶性SIRPa多肤；可溶性CD47 ;抗CD47抗体、 抗SIRPa抗体等，其中术语抗体涵盖抗体片段及其变体，如本领域中所已知。 治疗剂量的如上所述的抗CD47剂可导致红细胞（RBC)的损失和贫血。本专利技术的 方法解决运一问题，并且出人意料地显示如本文所用的引物剂显著降低由于红细胞的损失 所致的毒性。不受理论束缚，据信引物剂增加网织红细胞（不成熟的RBC)的产生，其可更 耐CD47介导的吞隧作用并且因此在抗CD47剂的随后施用期间较不易于损失。 本专利技术的某些实施方案任选地包括确定个体对施用引物剂的反应性的步骤。例 如，网织红细胞计数或血红蛋白的减少可用于确定施用引物剂是否增加网织红细胞的产 生。可在引物剂施用之前和之后进行网织红细胞计数，从而允许在有效于网织红细胞的增 加的计数之间的一段时间。任选地，可使用用于确定增加的红细胞生成的任何适合的方法。 在施用引物剂并且允许有效于网织红细胞产生的增加的一段时间之后，施用治疗 剂量的抗CD47剂。治疗剂量可W多种不同方式施用。在一些实施方案中，在施用引物剂之 后施用两个或更多个治疗有效剂量。在一些实施方案中，治疗有效剂量的抗CD47剂作为递 增浓度的两个或更多个剂量施用，在其它实施方案中剂量是等效的。【附图说明】 图1 A-B呈现在单次250 yg腹膜内注射（IP injection)MIAP410(IgGl同种型） 或MIAP470(IgG2a同种型）施用至野生型小鼠之后血细胞比容（肥T)的变化百分比和血红 蛋白的变化百分比。 图2呈现在单次250yg腹膜内注射MIAP410 (IgGl同种型）或MIAP470 (IgG2a同 种型）施用至CD47-/-小鼠之后血红蛋白的变化百分比。[001引 图3A-B呈现在腹膜内注射250yg的对照小鼠IgG、MIAP410或MIAP740每3天 施用至野生型小鼠之后血细胞比容化CT)的变化百分比和血红蛋白的变化百分比。 图4描绘在Ig-样细胞外结构域中人与雜猴CD47之间的序列比对。人 CD47ECD(SEQIDN0:4);食蟹猴（雜猴）CD47ECD(SEQIDN0:5)。 图5证明化5F9-G4识别人和食蟹猴CD47，但不识别小鼠CD47。通过涂覆抗小鼠 Fc特异性抗体，接着添加人、小鼠和食蟹猴CD47-mFc融合蛋白来进行化ISA。不相关的小 鼠Fc(mFc)融合蛋白用作阴性对照。然后添加化5F9-G4。使用HRP缀合的抗人K抗体检 测结合的抗体。 图6呈现针对化5F9-G4结合测量的结合常数的总结。使用GLM传感器忍片在 BioRadProte化XPR36系统上进行SPR结合研究。在25°C下收集结合数据。使用1:1相互 作用模型对反应数据全局拟合。括号中的数字表示最后一次报道的数字的标准误差。（A) 结合至人CD47。度）结合至食蟹猴CD47。 图7呈现来自非人灵长类动物化5F9-G4毒理动力学研究的数据。通过所指示水 平下的单剂量对食蟹猴NHP施用化5F9-G4。（A)贫血W剂量依赖性方式发展，但自发消退。 阴影本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用治疗剂量的抗CD47剂治疗受试者的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用第一引物剂；以及(b)向所述受试者施用治疗有效剂量的抗CD47剂，其中步骤(b)在开始步骤(a)之后至少约3天之后进行。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬·威林汉，莫林·霍华德，杰·刘，莱文德拉·吗杰提，苏珊·斯威尼·普劳哈斯卡，安妮·K·沃奥科迈，詹斯·彼得·沃奥科迈，欧文·L·唔斯曼，
申请(专利权)人：小利兰·斯坦福大学托管委员会，
类型：发明
国别省市：美国;US