一种十五肽及其应用制造技术

技术编号:12570925 阅读:119 留言:0更新日期:2015-12-23 12:51
本发明专利技术公开了一种十五肽及其应用,所述合成十五肽的氨基酸序列如下所示:Trp-Val-Ala-Gly-Leu-Gly-Tyr-Phe-Thr-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Lys,缩写为WVAGLGYFTKNGGPK,分子量1594.6,纯度95%以上。本发明专利技术的多肽使用多肽合成仪,采用固相合成法合成。本发明专利技术的目的是提供了一种具有体外抗氧化活性、保护红细胞溶血以及促进人皮肤成纤维细胞胶原蛋白产生的合成十五肽,可应用于生物制药与化妆品等领域。

【技术实现步骤摘要】
一种十五肽及其应用
本专利技术涉及生物制药与化妆品等领域,具体涉及一种合成十五肽及其应用。
技术介绍
生物活性肽是具有多种人体代谢和生理调节功能,易消化吸收,有促进免疫调节、抗菌、降血压、抗癌、抗氧化等作用的二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称,由25个天然氨基酸通过肽键以不同组成和排列方式构成。活性肽安全性极高,是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。现代营养学表明,蛋白质经消化道酶作用后并不完全以游离氨基酸的形式吸收,大多以低肽的形式吸收,并且低肽比游离氨基酸具有更高的营养价值和生物效价。样品清除自由基的能力是评价其抗氧化活性最常见的方法。自由基与人类的衰老和某些病理过程密切相关,它们都带有不成对的单电子,攻击体内细胞,破坏脂质、蛋白质及DNA结构,最终导致机体功能的缺失和疾病的发生。清除体内过量的自由基在预防某些疾病的过程中具有重要作用。ABTS,2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐,是一种水溶性物质,可被MnO2氧化为比较稳定的蓝绿色ABTS自由基,此自由基在736nm有稳定的最大吸收峰,抗氧化剂能够提供氢原子将自由基还原为无色ABTS,可根据溶液在736nm处的吸光度变化来评估抗氧化剂清除ABTS+的能力。DPPH(1,1-二苯基-2-苦肼基)是一种醇溶性物质,在醇溶液中生成以氮原子为中心的稳定自由基、并呈深紫色,该自由基在522nm处有最大吸收峰,加入抗氧化样品后,溶液会褪色,可以通过其吸光值的变化来检测样品的抗氧化活性。FRAP方法(FerricreducingantioxidantpotentialAssay)是测定物质抗氧化能力的一种方法。原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ,随后在596nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。以上三种模型操作简便、快捷、可控性好得到广泛应用。构建细胞氧化损伤模型是评价样品是否具有抗氧化能力的常用方法,而红细胞由于来源丰富、取材便易,可以作为一种简单的异相介质的代谢模型,是体外生物实验中的常用材料。自由基首先攻击红细胞膜上的脂质和蛋白质,使细胞膜破损,释放出红细胞中的血红蛋白,称为红细胞溶血。AAPH、H2O2和Hemin为常用的诱导红细胞溶血的物质。原子力显微镜(AFM)是一种高分辨率的新型成像工具,在生物医学界已被广泛用于细胞形貌及其超微结构的表征,其原理是通过检测探针扫描样品时所产生的原子间相互作用力来获得样品形貌结构信息,经计算机软件处理成像。自由基攻击细胞膜使之结构和功能丧失,发生细胞溶血。这一结论通过用原子力显微镜(AFM)观察对照组、损伤组和保护组红细胞形貌得到进一步验证。皮肤老化主要是人的遗传倾向性(也称为年代老化)和人对环境应激的生理反应(也称为光老化)的结果。光老化是外界环境对皮肤的生物学应答的效果。皮肤对光老化的应答通常与正常的水合作用的缺乏、皮肤下垂以及线条和皱纹外观有关。UVB照射可使成纤维细胞内活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)堆积,超过了其清除能力,打破氧化与抗氧化平衡,发生氧化应激反应,调节一系列程序化的细胞反应,甚至调控衰老相关的信号通路,促进细胞衰老的发生。有研究表明ROS在细胞内的堆积是皮肤光老化发生发展过程中的重要环节。人皮肤成纤维细胞是人皮肤产胶原蛋白的主要场所,其数量的多少和细胞胶原蛋白的产率与皮肤衰老状态息息相关。因此,人皮肤成纤维细胞胶原蛋白的产率是被广泛应用认可的一种评价皮肤衰老状态的指标。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种具有体外抗氧化活性、保护红细胞溶血以及促进人皮肤成纤维细胞胶原蛋白产生的合成十五肽,可应用于生物制药与化妆品等领域。本专利技术以ABTS自由基、DPPH自由基清除实验、FRAP实验、APPH诱导的红细胞溶血实验以及紫外损伤人皮肤成纤维细胞来评价多肽的抗氧化及抗皮肤衰老活性。本专利技术所述的合成十五肽缩写为WVAGLGYFTKNGGPK,分子量1594.6,序列为:Trp-Val-Ala-Gly-Leu-Gly-Tyr-Phe-Thr-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Lys。其中,Trp表示英文名称为Tryptophan,中文名称为色氨酸的氨基酸的相应残基;Val表示英文名称为Valine,中文名称为缬氨酸的氨基酸的相应残基;Ala表示英文名称为Alanine,中文名称为丙氨酸的氨基酸的相应残基;Gly表示英文名称为Glycine,中文名称为甘氨酸的氨基酸的相应残基;Leu表示英文名称为Leucine,中文名称为亮氨酸的氨基酸的相应残基;Tyr表示英文名称为Tyrosine,中文名称为酪氨酸的氨基酸的相应残基;Phe表示英文名称为phenylalanine,中文名称为苯丙氨酸的氨基酸的相应残基;Thr表示英文名称为Threonine,中文名称为苏氨酸的氨基酸的相应残基;Lys表示英文名称为lysine,中文名称为赖氨酸的氨基酸的相应残基;Asn表示英文名称为Asparagine,中文名称为天冬酰胺的相应残基;Pro表示英文名称为proline,中文名称为脯氨酸的氨基酸的相应残基。本专利技术所述的氨基酸序列采用标准Fmoc方案,通过树脂的筛选,合理的多肽合成方法。将目标多肽的C-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这个氨基酸的氨基作为起点,与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键。不断重复这一过程,即可以得到目标多肽产物。合成反应完成后,去除保护基,将肽链与树脂分离,即得到目标产物。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,固相合成顺序从C端向N端合成。本专利技术将终浓度为1-100µg/mL的合成十五肽与正常人血红细胞混匀,孵育,经AAPH损伤2h后,使得细胞溶血抑制率达到56.76%~86.60%。用100µg/mL的合成十五肽处理后的与仅用AAPH损伤的红细胞组相比,其形貌比单纯AAPH处理组光滑,有序,呈现饼状结构。用5µg/mL样品处理红细胞,其SOD活力由2.5976mgprot/ml上升到5.1958mgprot/mL,结果表明,合成十五肽处理后红细胞的SOD活性相对于有较大提高,能在生物医药与化妆品等领域中应用。本专利技术将浓度为1-10µg/mL的合成十五肽加入人皮肤成纤维细胞培养液中孵育,经中波紫外(UVB)80mJ/cm2损伤后,细胞存活率变化不大,使得细胞内胶原蛋白得率提高了14.9-30.65%。与现有技术相比,本专利技术具有如下优点和技术效果:本专利技术首次合成了该肽,并且采用了体外化学抗氧化方法检测了合成十五肽的抗氧化活性,所述合成十五肽具有很强的DPPH、ABTS+自由基清除能力,且其供电子能力较强,同时应用于AAPH损伤的正常人红细胞进行保护,使得红细胞溶血率显著降低,SOD活性有较大的提高,同时,合成十五肽能促进紫外损伤的人皮肤成纤维细胞胶原蛋白的产生。附图说明图1为合成十五肽Trp-Val-Ala-Gly-Leu-Gly-Tyr-Phe-Thr-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Lys的ESI-MS图谱,其中横坐标为m/z(质荷比值)、纵坐标为Intensity本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种十五肽,其特征是该合成十五肽的氨基酸序列为Trp‑Val‑Ala‑Gly‑Leu‑Gly‑Tyr‑Phe‑Thr‑Lys‑Asn‑Gly‑Gly‑Pro‑Lys。

【技术特征摘要】
1.一种十五肽,其特征是该十五肽的氨基酸序列为Trp-Val-Ala-Gly-Leu-Gly-Tyr-Phe-Thr-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Lys;所述十五肽浓度为1-100µg/mL时,与红细胞混合,在AAPH的作用下,孵育2h后,能使得细胞溶血抑制率达到56.76%~86.60%,其形貌比单纯AAPH处理组光滑,有序,呈现饼状结构。2.根据权利要求1所述的一种十五肽,其特征在于所述十五...

【专利技术属性】
技术研发人员:张学武曾巧辉
申请(专利权)人:华南理工大学
类型:发明
国别省市:广东;44

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