本发明专利技术公开了一株具有抑制产气荚膜梭菌作用的枯草芽孢杆菌，该菌株命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BLCC1-0155。本发明专利技术的枯草芽孢杆菌BLCC1-0155对产气荚膜梭菌具有较强的抑制作用，同时对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌也具有抑制作用。动物试验证明以枯草芽孢杆菌BLCC1-0155为有效成分的微生态制剂产品能够较好的预防肉鸡的坏死性肠炎，减少坏死性肠炎对肉鸡肠道的伤害，并大大降低了死亡率，同时该微生态制剂产品还能够提高肉鸡的日增重，是一种能够应用于临床的较为理想的预防肉鸡坏死性肠炎的微生态制剂产品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
坏死性肠炎是1961年在英国肉鸡上发现并报道的，随后在全球大多数家禽生 产国陆续报道。该病对全世界的畜禽生产具有重要的经济影响，至今被广泛研究。2011 年，钟永庆在现代农业科技上指出，鸡坏死性肠炎是由A型魏氏梭菌引起的一种急性散 发性传染病，该菌在体内繁殖后，从大肠和盲肠向小肠迀移并在小肠产生毒素，从而引起 该病的发生。魏氏梭菌（Clostridiumwelchii)原名产气荚膜梭状杆菌（Clostridium Perfringengs,CP)，最初是由welchii和Nutall从一具腐败的人类尸体产生气泡的血管 中分离得到，命名为魏氏梭菌。据中国禽业导刊报道，关于该病，2005年以前仅有30多篇 报道，而最近3年报道占到总数的2/3,且呈现逐年增加的趋势。该病对山东半岛养鸡行业 的冲击最为严重，长江以南对该类疾病很少报道，几篇相关报道也只是集中在贵州、湖南两 地。该病的发生主要针对2~5周龄的幼禽，急性病程主要症状为采食量突然下降、精神沉 郁、翅下垂、腹泻、增重率下降，有时突然死亡，有些病例平均每天死亡率可达1%。主要病灶 包括小肠下端肠皱壁的大面积坏死，并伴有肝脏及盲肠坏死。典型的坏死性肠炎对肉用鸡 具有很高的致病率与死亡率，在经济上对肉鸡养殖业有很大的影响。目前主要通过硫酸新 霉素、硫酸粘菌素等抗生素进行治疗，但这种方法容易造成耐药性和药物残留问题。因此研 制安全有效而又价格低廉的产品是防治此病的关键。 微生态制剂是一种新型活菌制剂，广泛用于人类、动物和植物，利用动物体正常微 生物群成员，通过鉴定、培养、干燥等系列工艺制成的一种活菌制剂。益生菌作为活的微生 物制剂，当摄入充足数量时能改善肠道微生物系统，有利于宿主健康。益生菌作为一种特殊 的饲料添加剂或食材原料对动物的生长起到有利作用，可通过调节肠道菌群动态平衡来维 持宿主健康状态。益生菌可作为抗生素替代物，其主要作用是提高动物对致病菌抵抗力的 同时能加强宿主的黏膜屏障作用，可减少动物体内致病菌的入侵，改善其健康状态进而减 少食品中的食源性致病菌。Hara等人发现乳杆菌属和双歧杆菌属细菌均可有效改善肠道疾 病。Takahashi等人发现仔猪饲料中添加屎肠球菌可使仔猪体重增加，免疫能力显著提高， 且体内的大肠杆菌数量明显减少，乳酸菌数量增多。益生菌还可降低新生儿坏死性肠炎的 发病率。Butel发现，将肠道双歧杆菌定植到一对3日龄的双胞胎中，可防治新生儿坏死性 小肠结肠炎的发生。Srinivas等人通过实验证明，补充双歧杆菌能够降低新生大鼠坏死性 小肠结肠炎的发病率。Lin等人的研究表明，母乳喂养的同时添加微生态制剂可降低早产儿 坏死性小肠结肠炎的发病率并减缓症状。Caplan等人通过实验证明，肠内双歧杆菌定植后 可通过下调炎症级联反应等作用降低新生鼠发生坏死性肠炎的危险性。黄生树等人用枯草 芽孢杆菌PB6代替抗生素来控制肉种鸡坏死性肠炎，平均2X 106cfu/只，达到了良好的防 治效果。 但是，不同芽孢杆菌的益生性能差异较大，筛选出新的具有较强抑制产气荚膜梭 菌作用的枯草芽孢杆菌，对于开发新的用于坏死性肠炎疾病防治的药物具有重要的意义。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一株具有抑制产气荚膜梭 菌作用的枯草芽孢杆菌。 本专利技术的另一目的是提供以该枯草芽孢杆菌为有效成分的微生态制剂在防治肉 鸡坏死性肠炎中的应用。 为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案： -株具有抑制产气荚膜梭菌作用的枯草芽孢杆菌，该菌株命名为枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)BLCCl_0155,于2015年05月07日保藏于位于中国武汉市武汉大学 的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCN0:M2015278。 所述枯草芽孢杆菌BLCC1-0155的菌种生物学特性如下：菌落呈圆形或不规则 性，边缘不整齐，表面有皱褶、粗糙，污白色或微带黄色，有隆起；该菌种的细胞大小为 (0. 7ym~0. 8ym)X(2. 0ym~3. 0ym)，呈杆状，染色均匀，无荚膜，鞭毛侧生，能运动；芽 孢呈卵圆形或柱状，中生或偏生，大小为0. 8ymX(1. 5ym~1. 8ym);游离孢子表面着色 弱；革兰氏阳性，接触酶阳性，能发生V-P反应；能利用葡萄糖、阿拉伯糖、木糖和甘露醇产 酸，能水解淀粉，分解色氨酸形成吲哚；生长温度最高值45~55°C，最低值5~20°C，最适 温度为37°C。 本专利技术还提供一种菌剂，该菌剂的活性成分为枯草芽孢杆菌BLCC1-0155。 该菌剂具体可采用如下制备工艺，具体步骤为：⑴菌种：选用枯草芽孢杆菌 BacillussubtilisBLCC1-0155,CCTCCN0:M 2015278 ； (ii)斜面培养：将枯草芽孢杆菌BacillussubtilisBLCC1-0155的冻干粉菌种 接种于固体斜面培养基上，在32~40°C培养20~28h; (iii) -级种子培养：将培养好的斜面，在无菌条件下用接种环接两环于50mL~ 100mL种子液体培养基中，在32~40°C条件下，静置培养14~18h，制得一级种子液； (iv)扩大培养：以4-6 % (v/v)的接种量，将一级种子液接于500mL~1000mL种 子液体培养基中，在32~40°C条件下，静置培养10~16h，制得二级种子液； (v)发酵罐培养：以4-6% (v/v)的接种量，将二级种子液接于液体发酵培养基中， 于32~40°C条件下，静置培养16~24h; ( vi)收集发酵产物：待步骤（v)之发酵液黏度达12000~15000cP时，收集发 酵液； ( vii)发酵结束后，立即将发酵液离心，菌体沉淀用生理盐水清洗，如此反复2~3 遍后加入冻干保护剂冷冻干燥，粉碎，即为菌粉成品；或：发酵结束后，立即喷雾干燥，即得 菌粉成品； 上述步骤（iii)、（iv)中所述种子液体培养基配方为：葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/ L、酵母膏5g/L，使用时，调节pH至6. 5~7. 5,115°C条件下灭菌20min;步骤（ii)中所述 固体斜面培养基为上述种子液体培养基中添加1. 5~2. 0%的琼脂粉；步骤（v)中所述 液体发酵培养基配方为：葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L，氯化钠5g/L，使用时，调 节pH至6. 5~7. 5〇 所述菌株和/或菌剂在制备防治肉鸡坏死性肠炎的微生态制剂中的应用也属于 本专利技术的保护范围。 本专利技术还提供了一种用于预防和/或治疗肉鸡坏死性肠炎的微生态制剂，该微生 态制剂以枯草芽孢杆菌BLCC1-0155为有效成分。 该微生态制剂为枯草芽孢杆菌BLCC1-0155的菌粉与玉米淀粉载体复配而成，复 配后微生态制剂中枯草芽孢杆菌BLCC1-0155的活菌数大于或等于lX10scfu/g。 本专利技术的有益效果： 本专利技术的枯草芽孢杆菌BLCC1-0155对产气荚膜梭菌具有较强的抑制作用，同 时对鸡大肠杆菌与金黄色葡萄球菌也具有抑制作用。动物试验证明以枯草芽孢杆菌 BLCC1-0155为有效成分的微生态制剂产品能够较好的预防肉鸡的坏死性肠炎，减少坏死性 肠炎对肉鸡肠道的伤害，并大本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株具有抑制产气荚膜梭菌作用的枯草芽孢杆菌，其特征在于，该菌株命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BLCC1‑0155，于2015年05月07日保藏于位于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2015278。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：单宝龙，陈雷，谷巍，程福亮，徐海燕，王红，陈甜甜，樊梅娜，辛国芹，聂兆晶，房栋，赵影，王春凤，
申请(专利权)人：山东宝来利来生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。