一种镉-极低密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种镉-极低密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用，该镉-极低密度脂蛋白螯合物是镉离子与极低密度脂蛋白通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成，可用于制备检测人体镉-极低密度脂蛋白螯合物的试剂。本发明专利技术首次证实了镉离子可直接作用于极低密度脂蛋白。本发明专利技术建立了镉-极低密度脂蛋白螯合物的定性定量检测方法，以检测一个地区人群体内极低密度脂蛋白的含量，从而间接反映一个地区镉污染程度以及对人群的健康影响。本发明专利技术建立的镉-极低密度脂蛋白螯合物定量检测方法准确度高重、复性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及重金属离子的免疫学检测，具体设及一种簡-极低密度脂蛋白馨合物 及其制备方法和应用。
技术介绍
脂蛋白（lipoproteins)是蛋白质与脂质结合所形成的一种脂质-蛋白质复 合物，按密度分为高密度脂蛋白（hi曲densitylipoprotein,皿L)、中间密度脂蛋白 (intermediatedensitylipoprotein，IDL)、低密度月旨蛋白(lowdensitylipoprotein， LDL)、极低密度脂蛋白（verylowdensitylipoprotein,VLDL)、乳糜颗粒（chylomiCdon， CM)。血液中约70 %的胆固醇由LDL和VLDL所携带，肝脏中产生的内源性甘油S醋 (triglyceride,TG)也主要依靠VLDL运输至肝外。VLDL的增多与高脂血症、脂代谢素乱息 息相关，而血脂异常又是多种疾病发生的重要危险因素，因而VLDL含量水平的稳定对于人 体各方面机能功能的稳定起着重要作用。 VLDL含量水平及结构功能的稳定对机体意义重大。其含量过高与脂肪肝、脂代谢 素乱、屯、血管疾病、肾脏功能损伤等息息相关。定量检测VLDL可W用于该些疾病的早期诊 断W及治疗效果监测，甚至作为预后好坏的评价指标之一。而对于营养不良、慢性贫血、肝 功能受损者等患者，血清VLDL含量也会下降，定量检测VLDL也可用于该些疾病的早期诊 断、治疗效果监测W及作为预后评价的指标之一。 簡是一种常见的有毒金属及环境污染物，广泛应用于工业生产环境中，包括电锻、 制造工业颜料、塑料稳定剂、镶铭电池等，与人们生活息息相关。对于普通人群，主要是通 过吸入簡污染的空气，及食用含簡污水灌概农田生产的农作物（如含簡大米）等方式摄入 簡。研究表明，簡是一种全身性毒物，可引起人和动物的肺、肝、肾等多种器官W及屯、血管、 免疫、神经等多系统功能损伤，还具有较强的致癌作用。1993年国际肿瘤研究机构（IARC) 已将簡及其化合物列为第1类人致癌物。可见簡对机体的影响及其重要，不可忽视。目前已有大量的文献证实簡可W作用于全身各个系统中的蛋白，从而影响机体各 组织器官的机能。众所周知，极低密度脂蛋白是一种特殊意义的蛋白质，簡是否可W作用于 极低密度脂蛋白，而使极低密度脂蛋白结构改变、含量改变、活性改变、功能改变，该些尚缺 乏相关研究。
技术实现思路
针对簡污染严重的问题，本专利技术的目的在于提供一种簡-极低密度脂蛋白馨合物 及其制备方法，并建立簡-极低密度脂蛋白馨合物的定性、定量检测方法，W便定量检测 簡-极低密度脂蛋白馨合物在评价一个地区簡污染程度的应用。通过定量检测一个地区人 群血清中簡-极低密度脂蛋白馨合物，可W间接反映该个地区人群受簡污染的情况，从而 间接反映该个地区簡污染程度。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是；提供一种簡-极低密度脂蛋白馨合 物，该簡-极低密度脂蛋白馨合物是簡离子与极低密度脂蛋白通过琉基或/和半脱氨酸残 基馨合而成。[000引本专利技术还提供一种上述的簡-极低密度脂蛋白馨合物的制备方法，即体外合成 法，包括W下步骤：A)簡-极低密度脂蛋白馨合物的合成；在提纯源于人体的极低密度脂蛋白或按照 生物学方法重组的极低密度脂蛋白中加入簡离子进行馨合反应，得到反应溶液； B)簡-极低密度脂蛋白馨合物纯化；采用免疫亲和层析法，去除步骤A)反应溶液 中未反应的极低密度脂蛋白、特异性抗体和簡离子，即得簡-极低密度脂蛋白馨合物。 作为优选，所述步骤B)中具体包括W下步骤： (1)溶解样品；将上述步骤A)的提取的簡-极低密度脂蛋白馨合物溶解于生理盐 水中，得簡-极低密度脂蛋白馨合物的溶液； (2)平衡层析柱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与极低 密度脂蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱； 所述能与极低密度脂蛋白特异性结合的填料为吸附有可与极低密度脂蛋白特异 性结合物质的硅胶或树脂； (3)上样；待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1)的溶液，然后上柱，使极低 密度脂蛋白与填料特异性结合； (4)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 05-0.lOmol/L的 化2册〇4溶液进行洗脱； (5)收集；收集步骤（4)的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；[001引 （6)透析；将步骤巧）中的收集的洗脱液，装透析袋，用d地20透析除盐，换水S次 后，4°C透析过夜，收集样本；(7)平衡层析柱；采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与簡特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱； 所述能与簡特异性结合的填料为吸附有可与簡特异性结合物质的硅胶或树脂； 做上样；待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤做中样本，然后上柱； (9)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1.Omol/L的 化2册〇4溶液进行洗脱；(10)收集；收集步骤巧）的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原； (11)透析；将步骤（10)的洗脱液，装透析袋，用dd&O透析除盐，换水立次后，4°C 透析过夜，收集样本，即得簡-极低密度脂蛋白馨合物。 作为优选，上述簡-极低密度脂蛋白馨合物的制备方法，还包括W下对簡-极低密 度脂蛋白馨合物的鉴定步骤，具体包括W下步骤： (1)制备胶床；W琼脂糖凝胶、聚丙締酷胺凝胶中的一种作为介质制备胶床； (2)加样；取步骤B)中提取纯化得到的簡-极低密度脂蛋白馨合物，加入上样缓 冲液，并混匀，然后加样于样品槽中；[00測 做电泳：连接电泳板，进行电泳； (4)检测；在胶床上找出含簡的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带溶解， 然后再采用ICP-MS或AAS检测该液体中是否含有簡W及检测簡的含量。 本专利技术还提供一种如上述的簡-极低密度脂蛋白馨合物在制备检测人体内簡-极 低密度脂蛋白馨合物的试剂或试剂盒中的应用。 本专利技术还提供一种至少包括如上述的簡-极低密度脂蛋白馨合物作为标准品的 试剂盒。 优选地，该试剂盒中还包括包被液，该包被液含有捕获极低密度脂蛋白的物质或 捕获金属簡的物质。 本专利技术还提供一种定量检测簡-极低密度脂蛋白馨合物的方法，W已知含量的上 述的簡-极低密度脂蛋白馨合物作为标准品，采用W下方法之一对样品进行检测；酶联免 疫法、酶联免疫与原子吸收光谱结合法、酶联免疫与电感禪合等离子体质谱结合法、提纯 簡-极低密度脂蛋白馨合物与酶联免疫结合法、提纯簡-极低密度脂蛋白馨合物与原子吸 收光谱结合法、提纯簡-极低密度脂蛋白馨合物与电感禪合等离子体质谱结合法、电泳与 酶联免疫或原子吸收光谱或电感禪合等离子体质谱结合法。 相比现有技术，本专利技术的有益效果在于： 1.本专利技术首次合成了簡-极低密度脂蛋白馨合物； 2.本专利技术首次提出簡-极低密度脂蛋白馨合物可用于制备检测血样中簡-极低密 度脂蛋白馨合物的试剂或试剂盒中的应用； 3.本专利技术实现了-极低密度脂蛋白馨合物的特异性识别和定量检测，W便定量检 测人群血清中簡-极低密度脂蛋白馨合物的含量，W评价一个地区簡污染程度的应用，为 工业地区的簡污染水平提供间接指标。本专利技术建立的簡-极低密度脂蛋白馨合物定量检测 方法的准确度高、重复性好。【附图说明本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种镉‑极低密度脂蛋白螯合物，其特征在于，该镉‑极低密度脂蛋白螯合物是镉离子与极低密度脂蛋白通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张积仁，阳帆，董欣敏，吴婧，蔡睿，孙遥，赵乙木，
申请(专利权)人：上海拜豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31