砷-低密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种砷-低密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用，该砷-低密度脂蛋白螯合物是由砷离子通过锌指结构、巯基、半胱氨酸残基中的至少一种结构与低密度脂蛋白螯合形成。本发明专利技术建立了砷-低密度脂蛋白螯合物的定性定量检测方法，以便定量检测砷-低密度脂蛋白螯合物在评价一个地区砷污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中砷-低密度脂蛋白螯合物可以间接反映这个地区人群受砷污染的情况，从而间接反映这个地区砷污染程度。本发明专利技术建立的砷-低密度脂蛋白螯合物定量检测方法其准确度大大提高，并且使检测的重复性得到大大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及医学领域，具体设及神-低密度脂蛋白馨合物及其制备方法和应用。
技术介绍
脂蛋白（lipoproteins)是蛋白质与脂质结合所形成的一种脂质-蛋白质复 合物，按密度分为高密度脂蛋白化i曲densitylipoprotein,皿L)、中间密度脂蛋白 (intermediatedensitylipoprotein，IDL)、低密度月旨蛋白(lowdensitylipoprotein， LDL)、极低密度脂蛋白（verylowdensitylipoprotein,VLDL)、乳糜颗粒扣1171〇111143〇]1， CM)。在血液中约70%的胆固醇由LDL和VLDL所携带，而LDL所携带的胆固醇含量大于 VLDL由于LDL富含胆固醇，因而被称为"坏胆固醇"，其与多种疾病的发生、发展密切相关， 特别是冠屯、病，糖尿病等疾病，研究发现"坏胆固醇"还可促进癌症细胞的发展和转移。 LDL是动脉粥样硬化发生和发展的主要危险因素，其改变在血清蛋白中对动脉粥 样硬化有很强的影响作用，是冠状动脉疾病的重要危险因子，与屯、血管疾病危险程度呈正 相关。因而定量检测血清中LDL对于屯、血管疾病具有重要意义，不仅可W用于早期识别动 脉粥样硬化的危险性，而且可W作为降脂药物治疗过程的检测W及预后评价的指标之一。 此外，肾病综合征、慢性肾功能衰竭、肝病及糖尿病等，也可使血清中LDL含量上升，而定量 检测LDL也可用于该些疾病的早期诊断W及治疗效果监测，甚至作为预后好坏的评价指标 之一。而对于营养不良、慢性贫血、骨髓瘤、急性屯、肌梗死、创伤和严重肝病等患者，血清LDL 的含量将会下降，定量检测LDL也可用于该些疾病的早期诊断、治疗效果监测W及作为预 后评价的指标之一。 神是常见的环境毒物之一，广泛存在于水、±壤、空气W及食物之中神能对人体产 生急性或慢性毒性，急性神中毒会导致呕吐、口干、肌肉疫李、腹痛、手脚刺痛等剧烈症状， 而慢性神中毒对人类健康的影响也已成为人们关注的一个重大问题。通过饮用水和空气是 两种与环境中神接触最直接的方式，它会诱发屯、血管疾病、引起神经功能失调、并导致糖尿 病化及肺癌、皮肺癌、膀脱癌等。而目前流行病学显示，在自然界存在的神引起的地下饮用 水污染，已在多个国家和地区造成高剂量的神暴露，成为环境污染和危害健康的全球性问 题。 目前已有大量的文献证实神可W作用于全身各个系统中的蛋白，从而影响机体各 组织器官的机能。众所周知，低密度脂蛋白是一种特殊意义的蛋白质，神是否可W作用于低 密度脂蛋白，而使低密度脂蛋白结构改变、含量改变、活性改变、功能改变，该些尚缺乏相关 研究。
技术实现思路
针对神污染严重的问题，本专利技术的目的在于提供一种神-低密度脂蛋白馨合物及 其制备方法，并建立神-低密度脂蛋白馨合物的定性、定量检测方法，W便定量检测神-低 密度脂蛋白馨合物在评价一个地区神污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中 神-低密度脂蛋白馨合物可w间接反映该个地区人群受神污染的情况，从而间接反映该个 地区神污染程度。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是；提供一种神-低密度脂蛋白馨合 物，该神-低密度脂蛋白馨合物是神离子与低密度脂蛋白通过琉基或/和半脱氨酸残基馨 合而成。[000引本专利技术还提供一种上述的神-低密度脂蛋白馨合物的制备方法，即体外合成法， 包括W下步骤：A)神-低密度脂蛋白馨合物的合成；在提纯源于人体的低密度脂蛋白或按照生物 学方法重组的低密度脂蛋白中加入神离子进行馨合反应，得到反应溶液； B)神-低密度脂蛋白馨合物纯化；采用免疫亲和层析法，去除步骤A)反应溶液中 未反应的低密度脂蛋白、特异性抗体和神离子，即得神-低密度脂蛋白馨合物。 作为优选，所述步骤B)中具体包括W下步骤： (1)溶解样品；将上述步骤A)的提取的神-低密度脂蛋白馨合物溶解于生理盐水 中，得神-低密度脂蛋白馨合物的溶液；[001引似平衡层析柱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与低密 度脂蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱； 所述能与低密度脂蛋白特异性结合的填料为吸附有可与低密度脂蛋白特异性结 合物质的硅胶或树脂； (3)上样；待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1)的溶液，然后上柱，使低密 度脂蛋白与填料特异性结合； (4)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 05-0.lOmol/L的 化2册〇4溶液进行洗脱； (5)收集；收集步骤（4)的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；[001引 （6)透析；将步骤巧）的洗脱液，装透析袋，用d地20透析除盐，换水S次后，4°C透 析过夜，收集样本； (7)平衡层析柱；采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与神特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱； 所述能与神特异性结合的填料为吸附有可与神特异性结合物质的硅胶或树脂； [002U做上样；待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤做中样本，然后上柱； (9)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1.Omol/L的 化2册〇4溶液进行洗脱； (10)收集；收集步骤巧）的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原； (11)透析；将步骤（10)的洗脱液，装透析袋，用dd&O透析除盐，换水立次后，4°C 透析过夜，收集样本，即得神-低密度脂蛋白馨合物。 作为优选，上述神-低密度脂蛋白馨合物的制备方法，还包括W下对神-低密度脂 蛋白馨合物的鉴定步骤，具体包括W下步骤： (1)制备胶床；W琼脂糖凝胶、聚丙締酷胺凝胶中的一种作为介质制备胶床； 似加样；取步骤B)中提取纯化得到的神-低密度脂蛋白馨合物，加入上样缓冲 液，并混匀，然后加样于样品槽中；[00測 做电泳：连接电泳板，进行电泳； (4)检测；在胶床上找出含神的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带溶解， 然后再采用ICP-MS或AAS检测该液体中是否含有神W及检测神的含量。 本专利技术还提供一种如上述的神-低密度脂蛋白馨合物在制备检测人体内神-低密 度脂蛋白馨合物的试剂或试剂盒中的应用。 本专利技术还提供一种至少包括如上述的神-低密度脂蛋白馨合物作为标准品的试 剂盒。 优选地，该试剂盒中还包括包被液，该包被液含有捕获低密度脂蛋白的物质或捕 获神的物质。 本专利技术还提供一种定量检测神-低密度脂蛋白馨合物的方法，W已知含量的上述 的神-低密度脂蛋白馨合物作为标准品，采用W下方法之一对样品进行检测；酶联免疫法、 酶联免疫与原子吸收光谱结合法、酶联免疫与电感禪合等离子体质谱结合法、提纯神-低 密度脂蛋白馨合物与酶联免疫结合法、提纯神-低密度脂蛋白馨合物与原子吸收光谱结合 法、提纯神-低密度脂蛋白馨合物与电感禪合等离子体质谱结合法、电泳与酶联免疫或原 子吸收光谱或电感禪合等离子体质谱结合法。 相比现有技术，本专利技术的有益效果在于： 1.本专利技术首次合成了神-低密度脂蛋白馨合物； 2.本专利技术首次提出神-低密度脂蛋白馨合物可用于制备检测血样中神-低密度脂 蛋白馨合物的试剂或试剂盒中的应用； 3.本专利技术实现了 -低密度脂蛋白馨合物的特异性识别和定量检测，W便定量检测 人群血清中神-低密度脂蛋白馨合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种砷‑低密度脂蛋白螯合物，其特征在于，该砷‑低密度脂蛋白螯合物是砷离子与低密度脂蛋白通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张积仁，阳帆，董欣敏，吴婧，蔡睿，孙遥，赵乙木，
申请(专利权)人：上海拜豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31