新颖的胰岛素类似物及其用途制造技术

本发明专利技术以增加胰岛素在血液中的半衰期为目的，涉及一种不仅胰岛素效价低于天然胰岛素且对胰岛素受体的结合力减少的胰岛素类似物、所述胰岛素类似物与载体连接而成的复合物、包含所述复合物的长效制剂、及制造所述复合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术W增加膜岛素在血液中的半衰期为目的，设及一种不仅膜岛素效价低于天 然膜岛素且对膜岛素受体的结合力减少的膜岛素类似物、所述膜岛素类似物与载体连接而 成的复合物、包含所述复合物的长效制剂、及制造所述复合物的方法。
技术介绍
众所周知，生物体内的蛋白质是通过被血液中的蛋白质分解酶分解、或通过肾脏 排泄或由受体清除等多种途径来清除。对此，不断进行规避如上所述的蛋白质清除机理而 增加生物活性蛋白质的半衰期，提高治疗功效的多种尝试。 另一方面，膜岛素作为从人体的膜腺分泌的血糖调节激素，发挥向细胞移送血液 内多余的葡萄糖来对细胞供给能源，并且使血糖保持正常水准的作用。但对于糖尿病患者 而言，因该种膜岛素不足或膜岛素抵抗性及0细胞丧失功能而膜岛素无法发挥正常的功 能，从而无法将血液内的葡萄糖用作能源，血液中的葡萄糖水准呈现出较高的高血糖症状， 最终通过小便排出糖，并伴随着多种并发症。因此，对于膜岛素的生成存在异常（I型）或 因膜岛素的耐性引起的（II型）糖尿病患者而言，膜岛素治疗是必不可少的，当投用膜岛素 时，可将血糖调节在正常水准。然而，膜岛素与其他蛋白质及肤激素同样地存在因体内的 半衰期极短而需持续地反复投用的缺点。该种频繁的投用会给患者带来非常大的痛苦和不 便。因此，为了通过增加蛋白质在生物体内的半衰期来减少投用次数而提高患者的生活质 量，不断进行多种蛋白质的剂型化研究和对化学复合物等（脂肪酸复合物、聚己締聚合物 复合物）的研究。作为目前市售的长效膜岛素，有赛诺菲-安万特公司（Sanofi-Aventis) 的甘精膜岛素（insulinglargine，Ian化S，药效持续时间为约20~22小时）、诺和诺德公 司（NovoNordisk)的地特膜岛素（insulindetemir，levemi;r，药效持续时间为约18~22 小时）、及tres化a(德谷（degludec)，药效持续时间为约40小时）。该些长效膜岛素因在 血液中没有膜岛素浓度峰值而适合用作基础膜岛素，但它们的半衰期也不够长，因而仍存 在每天需投用一次或两次的不便，该对于需要长期投用的糖尿病患者而言，在实现通过大 幅减少投用频率而提高患者的便利性的目的方面有限。 根据现有的研究结果报告，已知体内膜岛素的清除过程具体如下；50%W上的膜 岛素通过肾脏清除，剩余的膜岛素通过受体介导清除（rec巧tormediatedclearance， RMC)步骤从肌肉、脂肪、肝脏等祀标部位（targetsite)清除。与此相关，在JF*ha;rmacolExp"Ther(1998) 286:959、Diabetes Care(1990) 13:923、Di油etes(1990) 39:1033等多个报告中指出，为了规避膜岛素的RMC， 可通过削弱in-vitro活性而增加血液中的浓度，但对于该些对受体的结合力减少的膜岛 素类似物而言，即使减少RMC，也无法规避主要清除机制即从肾脏的清除，因而在大幅增加 血液中的半衰期方面有限。
技术实现思路
本专利技术人等为了增加膜岛素在血液中的半衰期而进行了锐意研究，结果确认到按 照非天然膜岛素序列而并非天然膜岛素序列新颖地制造的膜岛素类似物不仅in-vitro效 价减少，而且因与膜岛素受体的结合力减少而从肾脏的清除减少，并且确认到通过在所述 膜岛素类似物结合可有效增加半衰期的代表性的载体即免疫球蛋白化片段而膜岛素在血 液中的半衰期进一步增加，由此完成了本专利技术。 本专利技术的目的在于，W延长膜岛素在体内的半衰期为目的，制造in-vitro效价减 少的膜岛素类似物，并提供一种其与载体形成的复合物。 具体而言，本专利技术的一目的在于提供一种膜岛素效价低于天然膜岛素的膜岛素类 似物。 本专利技术的又一目的在于提供一种膜岛素类似物与载体结合而成的膜岛素类似物 复合物。 本专利技术的另一目的在于提供一种包含所述膜岛素类似物复合物的膜岛素长效制 剂。 本专利技术的又一目的在于提供一种制造所述膜岛素类似物复合物的方法。 本专利技术的又一目的在于提供一种利用所述膜岛素类似物、或膜岛素类似物与载体 结合而成的膜岛素类似物复合物来增加在生物体内的半衰期的方法。 本专利技术的又一目的在于提供一种治疗与膜岛素相关的疾病的方法，所述方法包含 将所述膜岛素类似物或膜岛素类似物复合物投用给需要其的个体的步骤。 本专利技术的非天然膜岛素类似物不仅提供膜岛素效价低于天然膜岛素且因对膜岛 素受体的结合力减少而规避在生物体内的清除机制，增加在生物体内的血液中的半衰期的 膜岛素类似物，而且利用该种膜岛素类似物的膜岛素类似物-免疫球蛋白化复合物可通过 大幅增加在血液中的半衰期而提高需投用膜岛素的患者的便利性。【附图说明】 图1是表示通过蛋白质电泳方式对膜岛素类似物的纯度进行分析的结果的图。其 是对作为代表性的膜岛素类似物的第7号类似物进行分析的结果。第1色带；尺寸标记 (sizemarker)，第2色带；天然膜岛素，第S色带；膜岛素类似物（第7号）。 图2是通过高压色谱法对膜岛素类似物的纯度进行分析的结果。其是对作为代 表性的膜岛素类似物的第7号类似物进行分析的结果。图2(A)为RP-HPLC，图2炬）为 沈-册LC。 图3是对膜岛素类似物的肤图谱进行分析的结果。关于膜岛素类似物，对作为代 表性的类似物的第7号类似物进行了分析。图3(A)为天然膜岛素，图3炬）为膜岛素类似 物（第7号）。 图4是通过蛋白质电泳方式对膜岛素类似物-免疫球蛋白化复合物的纯度进行 分析的结果。其是对作为代表性的膜岛素类似物的第7号类似物进行分析的结果。第1色 带：尺寸标记（sizemarker),第2色带；膜岛素类似物（第7号）-免疫球蛋白化复合物。 图5是通过高压色谱法对膜岛素类似物-免疫球蛋白化复合物的纯度进行分析 的结果。其是对作为代表性的膜岛素类似物的第7号类似物进行分析的结果。图5(A)为 RP-HPLC，图 5 炬）为SE-HPLC，图 5 (C)为IE-HPLC。 图6是表示天然膜岛素-免疫球蛋白化复合物及膜岛素类似物-免疫球蛋白化 复合物在正常大鼠中的药代动力学分析的结果。其是对作为代表性的膜岛素类似物的第7 号类似物进行分析的结果。〇;天然膜岛素-免疫球蛋白化复合物（21. 7nmol/kg)，?：天 然膜岛素-免疫球蛋白化复合物化5.Inmol/kg)，□;膜岛素类似物-免疫球蛋白化复合 物（21. 7nmol/kg)，;膜岛素类似物-免疫球蛋白化复合物化5.Inmol/kg)。图6(A)为 天然膜岛素-免疫球蛋白化复合物及膜岛素类似物（第7号）-免疫球蛋白化复合物，图 6炬）为天然膜岛素-免疫球蛋白化复合物及膜岛素类似物（第8号）-免疫球蛋白化复 合物，图6(C)为天然膜岛素-免疫球蛋白化复合物及膜岛素类似物（第9号）-免疫球蛋 白化复合物。【具体实施方式】作为一实施方式，本专利技术提供一种膜岛素类似物，其膜岛素效价低于天然膜岛素 类似物且B链或A链的氨基酸发生变异。作为一具体例，本专利技术提供一种对膜岛素受体的结合力减少的膜岛素类似物。 作为又一具体例，本专利技术提供一种选自由B链的第8号氨基酸、B链的第23号氨 基酸、B链的第24号氨基酸、B链的第25号氨基酸、A链的第1号氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰岛素类似物，其胰岛素效价低于天然胰岛素，且胰岛素的B链或A链的氨基酸发生变异。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄祥渊，许容豪，金真英，洪性熙，崔仁荣，郑圣烨，权世昌，金大振，金贤煜，张明贤，金承洙，
申请(专利权)人：韩美药品株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR