一种不孕不育联合检测试剂盒及其检测方法技术

技术编号:12200419 阅读:100 留言:0更新日期:2015-10-14 12:50
本发明专利技术公开一种不孕不育联合检测试剂盒,包括样本稀释液、酶结合物、冲洗液以及底物四种试剂。本发明专利技术还公开了该联合检测试剂盒的检测方法,包括检测试剂盒平衡至室温、样本处理、卡片窗口内膜面的润洗、加入样本、冲洗液、加入酶结合物、显色及终止等步骤。该发明专利技术可以做到多通道多人份检测同时进行,并且灵敏度可以达到ELISA产品的检测水平,并远高于胶体金产品;同时本发明专利技术的检测试剂盒的检测时间可以接近于胶体金的并远远优于ELISA的检测时间,且不需要专业人员进行操作,方便且高效,能很好的满足临床使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及一种检测试剂盒,更为具体地说是指一种不孕不育联合检测试剂盒及 其检测方法。
技术介绍
目前市场上常见的用于不孕不育检测的产品主要有胶体金检测、ELISA检测等检 测形式的产品。胶体金检测是将抗原或抗体结合在硝酸纤维素膜上,并将标记有抗体或抗 原胶体金干燥在结合垫上,若样品含有特异性抗体或抗原可先于胶体金上的抗原或抗体结 合,并一同向吸水纸的方向层析,当层析至检测线时,在与检测线上的抗原或抗体结合,最 后通过颜色判断阴阳性。胶体金主要是进行单人份单项目检测(即相关走个检测项目单次 只能进行一个项目检测),无法做到单人份多项目检测即检测单通道,同时胶体金检测相关 项目的灵敏度较低,W上原因都限制了该类产品在临床中的使用。 而化ISA检测则是将抗原或抗体结合于聚苯己締板孔内,此时抗原或抗体仍可具 有免疫活性,可进行抗原抗体反应,配合酶催化底物呈色反应(灵敏度高),即可显示特定抗 原或抗体是否存在,并可利用呈色之深浅进行定性或定量分析。ELISA的检测形式虽然可W 做到多人份检测,但是该类产品同样是单通道单项目检测(即相关走个检测项目单次只能 进行一个项目检测),并且需要专业的操作人员进行临床检测W及相关配套的仪器如酶标 仪、洗板机、水浴箱等进行协作;同时,该类产品检测的底物由A/B液组成,操作麻烦,混合 后易失效,阴性对照非特异性显色较强、信噪比较低;最后限制该类产品使用的是化ISA检 测需要耗时将近3个小时,试剂反应慢,在实际的临床使用中导致诸多不便。
技术实现思路
本专利技术提供,W解决现有不孕不育检 测产品存在无法做到单人份多项目检测、灵敏度较低、操作麻烦、阴性对照非特异性显色较 强、试剂反应慢等缺点。 本专利技术采用如下技术方案: 一种不孕不育联合检测试剂盒,包括W下四种体积份数含量的试剂:样本稀释液10 份、酶结合物5~6份、冲洗液10份W及底物5~6份;其中,所述样本稀释液包括0. 46%磯 酸二氨钢、0. 58%十二水合磯酸氨二钢、2%氯化钢、5%的新生小牛血清、0. 2%氯化裡、0. 2%酪 蛋白、0. 1%駿甲基纤维素钢盐、0. 04%己二胺四己酸、0.l%Proclin-300,其余为去离子水或 蒸馈水;所述酶结合物包括0. 46%S哲甲基氨基甲烧、1%牛血清白蛋白、0. 2%氯化裡、0. 8% 氯化钢、0. 1%吐温80、0. 2%聚己二醇、0. 04%己二胺四己酸、0. 5%对哲基苯甲酸钢、0. 05%HRP 标记的羊抗人IgG、0.l%Proclin-300,其余为去离子水或蒸馈水;所述冲洗液包括0. 46%磯 酸二氨钢、0. 58%十二水合磯酸氨二钢、0. 01%十二烷基硫酸钢、0. 1%吐温80、0. 1%吐温20、 0. 04%己二胺四己酸、0.l%Proclin-300,其余为去离子水或蒸馈水;所述底物包括0. 12% - 水合巧樣酸钢、0. 05%咪挫、0. 05%聚己締化咯烧酬、0. 04%己二胺四己酸、0. 05%核糖、0. 4〇/〇 葡萄糖、0. 01%聚己締醇、0. 08%硫代硫酸钢、0. 02%TMB、0. 03%过氧化氨、0.l%Proclin-300, 其余为去离子水或蒸馈水。 上述一种不孕不育联合检测试剂盒的检测方法,包括W下步骤: 一、 检测准备 (1) 平衡室温;取出检测试剂盒平衡至室温18~26°C; (2) 样本处理:将3000巧m的待测血清离屯、lOmin,取200yL样本稀释液,混入5yL已 离屯、处理的血清,即为已处理样本; 二、 样本检测 (3) 润洗;在卡片窗口内膜面上加200yL样本稀释液,均匀润洗卡片窗口内膜面,待其 渗入; (4) 加入样本;将已处理样本全部加于步骤(3)中润洗过的卡片窗口内膜面,待其渗 入; (5) 冲洗;待样本完全渗入后,加入200yL冲洗液,待其渗入; (6) 加入酶结合物;往步骤(5)冲洗过的卡片窗口内膜面上加入200yL酶结合物,完全 渗入后加入200yL冲洗液,W除去未结合的酶结合物; (7) 显色及终止;继续往卡片窗口内膜面上加入200yL底物并开始计时,10~15min 后加入100yL去离子水或蒸馈水W终止显色。 由上述对本专利技术的描述可知,和现有技术相比,本专利技术具有如下优点: 1、本专利技术的检测试剂盒通过蛋白生物巧片的形式,可W做到多通道多人份检测同时进 行(即不孕不育走个检测项目可W同时进行检测),并且灵敏度可W达到ELISA产品的检测 水平,并远高于胶体金产品;同时本专利技术的检测试剂盒的检测时间可W接近于胶体金的并 远远优于化ISA的检测时间,且不需要专业人员进行操作,方便且高效,能很好的满足临床 使用。 2、本专利技术检测试剂盒的样本稀释液,加入駿甲基纤维素钢盐和氯化裡,其中,駿甲 基纤维素钢盐起到很好的封闭作用,氯化裡可W促进特异性反应,故该样本稀释液具有封 闭效果好,可很好地降低非特异性、增强特异性的特点。 3、本专利技术检测试剂盒的酶结合物,加入对哲基苯甲酸钢和聚己二醇,其中,对哲基 苯甲酸钢可增强酶的稳定性,聚己二醇则可增强酶反应过程的灵敏度,故该酶结合物具有 增强酶稳定性、封闭效果良好W及灵敏度高等特点。 4、本专利技术检测试剂盒的冲洗液,加入十二烷基硫酸钢、吐温20W及吐温80,其中, 吐温20与吐温80的组合使用可增强使用效果,可很好的完成清洗过程,故该冲洗液可很好 地冲洗未完全反映的残留实际,提高信噪比。 5、本专利技术检测试剂盒的底物,加入核糖、葡萄糖、聚己締醇W及硫代硫酸钢,核糖、 葡萄糖、聚己締醇等可W很好的保护并稳定TMB及过氧化氨的化学性质,增强试剂稳定性, 而硫代硫酸钢则可W很好的增强特异性反应。故该底物具有示踪反应结果,单组份成分,操 作简便,稳定性良好等特点。【具体实施方式】 下面说明本专利技术的【具体实施方式】。[001引 实施例一 一种不孕不育联合检测试剂盒,内含20片检测卡,具体包括W下四种试剂;样本稀释 液lOmL、酶结合物5mL、冲洗液lOmLW及底物5mL。其中,样本稀释液包括0. 46%磯酸二氨 钢、0. 58%十二水合磯酸氨二钢、2%氯化钢、5%的新生小牛血清、0. 2%氯化裡、0. 2%酪蛋白、 0. 1%駿甲基纤维素钢盐、0. 04%己二胺四己酸、0.l%Proclin-300,其余为去离子水或蒸馈 水;酶结合物包括0. 46%S哲甲基氨基甲烧、1%牛血清白蛋白、0. 2%氯化裡、0. 8%氯化钢、 0. 1%吐温80、0. 2%聚己二醇、0. 04%己二胺四己酸、0. 5%对哲基苯甲酸钢、0. 05%HRP标记的 羊抗人IgG、0.l%Proclin当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种不孕不育联合检测试剂盒,其特征在于,包括以下四种体积份数含量的试剂:样本稀释液10份、酶结合物5~6份、冲洗液10份以及底物5~6份;其中,所述样本稀释液包括0.46%磷酸二氢钠、0.58%十二水合磷酸氢二钠、2%氯化钠、5%的新生小牛血清、0.2%氯化锂、0.2%酪蛋白、0.1%羧甲基纤维素钠盐、0.04%乙二胺四乙酸、0.1%Proclin‑300,其余为去离子水或蒸馏水;所述酶结合物包括0.46%三羟甲基氨基甲烷、1%牛血清白蛋白、0.2%氯化锂、0.8%氯化钠、0.1%吐温80、0.2%聚乙二醇、0.04%乙二胺四乙酸、0.5%对羟基苯甲酸钠、0.05%HRP标记的羊抗人IgG、0.1%Proclin‑300,其余为去离子水或蒸馏水;所述冲洗液包括0.46%磷酸二氢钠、0.58%十二水合磷酸氢二钠、0.01%十二烷基硫酸钠、0.1%吐温80、0.1%吐温20、0.04%乙二胺四乙酸、0.1%Proclin‑300,其余为去离子水或蒸馏水;所述底物包括0.12%一水合柠檬酸钠、0.05%咪唑、0.05%聚乙烯吡咯烷酮、0.04%乙二胺四乙酸、0.05%核糖、0.4%葡萄糖、0.01%聚乙烯醇、0.08%硫代硫酸钠、0.02%TMB、0.03%过氧化氢、0.1%Proclin‑300,其余为去离子水或蒸馏水。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:陈隆玉史正文
申请(专利权)人:三明市和众生物技术有限公司
类型:发明
国别省市:福建;35

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