一种高产吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的发酵培养基及其应用制造技术

技术编号:12066042 阅读:241 留言:0更新日期:2015-09-18 00:52
本发明专利技术涉及高产吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的发酵培养基及其应用,可有效解决高产吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的发酵培养基,提高吲哚乙酸产出的问题,方法是,由以下重量百分比计的:果糖0.1~1%、氮源0.5~2%、NaCL 0.1~1.0%、CuSO4  0.01~0.05%、色氨酸0.01~0.15%和余量为水制成,先将色氨酸用0.01M NaOH溶液溶解,0.22μm滤膜过滤除菌,成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液;再将果糖、氮源、NaCL和CuSO4用水溶解,121℃灭菌25min,冷却至室温,然后加入色氨酸溶液混匀,用盐酸或NaOH调pH为8.0~10.0;本发明专利技术提供发酵培养基及培养条件简单,操作方便,生产成本低,吲哚乙酸产量高,易于工业化生产,节能环保,经济和社会效益巨大。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物,特别是一种高产吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的发酵培养基及其应用
技术介绍
微生物必须在产品中保持能够生存,处于潜伏状态或是具有代谢活性。此因素具有两个决定性方面,产品的耐久性以及当被施用至田地中时产品定殖将要被刺激或被保护的作物的根部的能力。在处理不具有形成抵抗结构的能力的细胞时可能会出现一些问题,因为该培养物随着时间的推移逐渐地丧失生存力,此外它们在土壤中的存活能力非常低。于是,人们想到利用它们的代谢产物形成产品,对于此目的要考虑的最重要的标准之一是能获得有相当高浓度的代谢产物。巴西固氮螺菌{Azospirillum brasilense)是一种行自由生活、好氧的固氮微生物,广泛存在于禾木科植物的根际土壤中,可与这些禾本科植物在微好氧的条件下进行联合固氮作用,具有作为生物肥料的潜能。巴西固氮螺菌的促生长作用不仅在于其具有较强固氮能力,而且在于其能够合成植物生长素吲哚乙酸。吲哚乙酸属吲哚类化合物,是植物体内普遍存在的内源生长素,又名茁长素、生长素。吲哚乙酸能诱导番茄单性结实和坐果,增加甜菜块根产量和含糖量等,在农业生产中被广泛使用。综上所述,吲哚乙酸对植物生长均有促进作用。但现在市售的吲哚乙酸大都是化学合成的,生产工艺复杂;而且利用微生物发酵生产吲哚乙酸的报道并不多见,目前除报道有固氮螺菌在添加了色氨酸的LB培养基(简称LBT培养基)上能产吲哚乙酸外,还未见到有通过其它培养基使巴西固氮螺菌发酵高产吲哚乙酸的报道;目前巴西固氮螺菌作为微生物菌剂尚未规模化使用,其原因主要是:(I)发酵单位活菌数较低,一般仅有30-50亿/ml ; (2)保存时间较短,液体菌剂在室温下保存仅3个月;(3)发酵成本高。因此,巴西固氮螺菌规模化应用首要要解决的问题是其发酵培养基的问题,提高发酵水平,降低发酵成本、增加活菌数和其代谢产物产量,有益于应用效果的体现和该类菌剂及其代谢产物的商品化。据调查,配制I L LBT培养基约需3.06元,配制成本较高,并且通过该培养基发酵产吲哚乙酸的量较低,不利于工业化生产,因此,如何高产吲哚乙酸是本领域技术人员所关心的技术问题。
技术实现思路
针对上述情况,为克服现有技术之缺陷,本专利技术之目的就是提供一种高产吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的发酵培养基及其应用,可有效解决高产吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的发酵培养基,提高吲哚乙酸产出的问题。本专利技术解决的技术方案是,本专利技术高产吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的发酵培养基是由以下重量百分比计的:果糖0.1?1%、氮源0.5?2%、NaCL 0.1?1.0%、CuSO4 0.01?0.05%、色氨酸0.01?0.15%和余量为水制成,其中,先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解,0.22 μ m滤膜过滤除菌,成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液;再将果糖、氮源、NaCL和CuSO4用水溶解,121 °C灭菌25min,冷却至室温,然后加入色氨酸溶液混匀,用盐酸或NaOH调pH为8.0 ?10.0 ; 所述的氮源为豆柏粉或大豆粉,豆柏粉为大豆榨油后的一级压榨豆柏粉,大豆粉为黄豆粉; 所述的水为蒸馏水或纯净水; 该发酵培养基在作为高产吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的发酵培养基中的应用。所述的巴西固氮螺菌R,分类命名为巴西固氮螺菌brasilense),2012年4月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为:CGMCCNO 6029,地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号。本专利技术提供发酵培养基及培养条件简单,操作方便,生产成本低,吲哚乙酸产量高,易于工业化生产,节能环保,经济和社会效益巨大。【具体实施方式】以下结合实施例和具体情况对本专利技术的【具体实施方式】作详细说明。本专利技术在具体实施中,可由以下实施例给出。实施例1 本专利技术在具体实施中,由以下重量百分比计的:果糖0.3?0.7%、氮源0.9?1.2%、NaCL 0.3?0.7%,CuSO4 0.02?0.03%、色氨酸0.06?0.11%和余量为水制成,其中,先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解,0.22 μ m滤膜过滤除菌,成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液;再将果糖、氮源、NaCL和CuSO4用水溶解,121°C灭菌25min,冷却至室温,然后加入色氨酸溶液混匀,用盐酸或NaOH调pH为8.0?10.0。实施例2 本专利技术在具体实施中,由以下重量百分比计的:果糖0.55%、豆柏1.25%、NaCL 0.55%、CuSO4 0.03%、色氨酸0.08%和余量为水制成,其中,先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解,0.22 μ m滤膜过滤除菌,成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液;再将果糖、豆柏、NaCL和CuSO4用水溶解,121 °C灭菌25min,冷却至室温,然后加入色氨酸溶液混匀,用盐酸或NaOH调pH为8.0。实施例3 本专利技术在具体实施中,还可由以下重量百分比计的:果糖0.2%、豆粉1.9%、NaCL 0.2%、CuSO4 0.04%、色氨酸0.02%和余量为水制成,其中,先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解,0.22 μ m滤膜过滤除菌,成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液;再将果糖、豆粉、NaCL和CuSO4用水溶解,121 °C灭菌25min,冷却至室温,然后加入色氨酸溶液混匀,用盐酸或NaOH调pH为9.0 ο实施例4 本专利技术在具体实施中,也可由以下重量百分比计的:果糖0.9%、豆粉0.6%、NaCL 0.9%、CuSO4 0.02%、色氨酸0.14%和余量为水制成,其中,先将色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解,0.22 μ m滤膜过滤除菌,成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液;再将果糖、豆粉、NaCL和CuSO4用水溶解,121 °C灭菌25min,冷却至室温,然后加入色氨酸溶液混匀,用盐酸或NaOH调pH为10.0o所述的高产吲哚乙酸的巴西固氮螺菌R发酵培养基的应用,方法是: 1、菌种的活化:挑取巴西固氮螺菌R斜面菌种,在LB培养基平板上三区划线,置30°C培养箱当前第1页1 2 本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种高产吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的发酵培养基,其特征在于,由以下重量百分比计的:果糖0.1~1%、氮源0.5~2%、NaCL 0.1~1.0%、CuSO4  0.01~0.05%、色氨酸0.01~0.15%和余量为水制成,其中,先将色氨酸用0.01M NaOH溶液溶解,0.22μm滤膜过滤除菌,成质量浓度为10.2115%色氨酸溶液;再将果糖、氮源、NaCL和CuSO4用水溶解,121℃灭菌25min,冷却至室温,然后加入色氨酸溶液混匀,用盐酸或NaOH调pH为8.0~10.0;所述的巴西固氮螺菌R,分类命名为巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense),2012年4月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为:CGMCC NO 6029,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:王继雯岳丹丹刘莉赵俊杰李冠杰陈国参慕琦胡宜亮巩涛杨文玲甄静
申请(专利权)人:河南省科学院生物研究所有限责任公司
类型:发明
国别省市:河南;41

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