本发明专利技术公开了一种对黄瓜疫霉菌有抑制作用的放线菌及其筛选方法，其是保藏号为CGMCC No.10042的弗吉尼亚链霉菌（Streptomyces virginiae）X54菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。该放线菌对人畜无致病性，是一种能安全、无毒、有效的防治黄瓜疫霉菌（Phytophthora melonis）的拮抗放线菌。同时，该菌对辣椒炭疽病菌、烟草黑胫病菌、水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌、柑橘炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌等也有一定的抑制作用，尤其该拮抗菌株对防治黄瓜疫病具有重大的开发潜力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种对黄瓜疫霉菌有抑制作用的新菌株及其筛选方法。
技术介绍
黄瓜疫病(Cucumberphytophthora blight)主要是由黄瓜疫霉菌{Phytophthoramelonis)引起的黄瓜上的主要病害，常会造成大片植株的死亡、烂瓜，在我国分布范围广，黄瓜从幼苗期到成株期均有可能染病。幼苗初期染病，始于嫩尖出现暗绿色或褐色、水浸状的腐烂，逐渐萎焉干枯成秃尖。成株时期染病，主要危害茎基部和茎节部以及果实，初为暗绿色、水浸状斑点，逐渐变软缢缩，染病部位以上的叶片逐渐枯萎死亡，黄瓜条表面在潮湿环境中生成白色霉层，并伴有恶臭。严重影响了黄瓜的生长和果实的产量及品质。黄瓜疫病是一种土传性病害，病原菌以菌丝体、卵孢子或厚垣孢子随病残体在土壤或肥料中越冬。翌年，在种子、风雨、灌溉和农具等适合传播病害的媒介下，在适宜的条件下长出孢子囊。影响该病发生的关键因素是湿度过高，一般在90%以上。地洼、重茬田、排水不良、施用带有病残物的肥料的地块，均是发病严重的地方。其次为温度，病菌在5—37°C均能生长发育，在25— 30°C为最佳。因此，连续的阴雨天、降雨量大，都会引起病害的严重发生。黄瓜疫病病原菌为黄瓜疫霉菌从ora属鞭毛菌亚门，卵菌纲，疫霉属。病原菌菌丝无色、无隔膜、多分枝，易产生节状或肿瘤状突起，多个聚集在一起容易形成葡萄球状或束状；孢囊梗细长，顶部长有孢子囊；孢子囊无色，呈柠檬形或卵形，孢子囊萌发形成许多游动孢子；游动孢子无色，单胞，呈卵形或球形，具有两根鞭毛，其静止后长出芽管；孢子囊也可直接萌发长出芽管。菌丝间可产生厚垣孢子，球形，淡黄色。卵孢子球形，淡黄色，表面平滑。黄瓜疫病的防治方法主要有选用耐病品种，加强栽培管理，进行生态防治等都能有效推迟、缓解病害的发生，尤其是化学防治，更是主要的防治措施。但目前化学防治效果不佳且存在生态安全问题。因此，筛选、利用有益微生物及其代谢产物来防治黄瓜疫病是实施绿色植保的具体措施。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术人从湖南省农科院采集土壤样品，利用高氏一号培养基通过稀释平板法获得放线菌的单菌落，再采用平板对峙法筛选对黄瓜疫霉菌有抑制作用的放线菌，该菌对人畜无致病性，能安全地用于黄瓜疫病的生物防治。同时，该菌对辣椒炭疽病菌、烟草黑胫病菌、水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌、柑橘炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌等也有一定的抑制作用。本专利技术提供的技术方案是:一种对黄瓜疫霉菌有抑制作用的放线菌，其是保藏号为CGMCC N0.10042的弗吉尼亚链霉菌X54，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。该放线菌(弗吉尼亚链霉菌，拉丁名-,Streptoinycesvirginiae) X54已于2014年_11月21日为中国微牛物菌种保藏管理委员会普通微牛物中心CGMCC所保藏(保藏地址是:北京市朝阳区北辰西路I号院3号)，其保藏号为CGMCC N0.10042，经检测存活。同时，本专利技术还提供所述对黄瓜疫霉菌有抑制作用的放线菌在防治黄瓜疫霉菌(Phytophthora melonis)、辣椒炭疽病菌、烟草黑胫病菌、水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌、柑橘炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌所致植物病害中的应用。所述的应用，是利用所述放线菌的发酵液、发酵液提取物进行应用。所述的应用，所述的植物病害是黄瓜疫病。本专利技术还提供一种农用杀菌剂，其包含所述放线菌，优选的是其包含所述菌株的发酵液，或其发酵液提取物。本专利技术具有以下有益效果: 本专利技术经鉴定为弗吉尼亚链霉菌{Streptomyces，该菌对人畜无致病性，是一种能安全、无毒、有效的防治黄瓜疫霉菌的措抗放线菌。同时，该菌对辣椒炭疽病菌、烟草黑胫病菌、水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌、柑橘炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌等也有一定的抑制作用，抑菌带宽分别为7.2mm、9.2mm、4.0mm、7.7mm、7.0mm、2.0mm。应用实施例表明，X54发酵液稀释50倍后，第二次施药前、末次施药后7天对黄瓜疫病的防效与于对照药剂25%嘧菌酯悬浮剂100克/公顷的防效相当。目前国内鲜有对黄瓜疫霉菌拮抗菌的报道，尤其是没有报道弗吉尼亚链霉菌对黄瓜疫霉菌的抑制作用。因此，该拮抗菌株对防治黄瓜疫病具有很好应用价值和重大的开发潜力。【附图说明】图1为对峙筛选抑制黄瓜疫霉菌的放线菌。图2为放线菌的培养性状。图3为放线菌X54的PCR图。图4为放线菌X54的16S rDNA构建系统发育树。【具体实施方式】下面提供实施例以进一步说明本专利技术。实施例一菌株的筛选和鉴定 本专利技术对黄瓜疫霉菌有抑制作用的放线菌的筛选方法如下: 1、土壤样品的采集 从湖南省农科院附近随机采集土样5份。去除表面土壤，采集5-20cm深处的土样约300g，分装标记后带回实验室。2、放线菌的分离 采用土壤稀释法分离，称取1g 土壤倒入装有玻璃珠的90ml无菌水三角瓶中，振荡1min后为KT1的稀释液，并将此以十倍稀释的方式，稀释成10 _4，10_5，10_6的稀释液。吸取10_4和10 _5稀释液10ul加入到高氏一号培养基(可溶性淀粉20克、NaCl 0.5克、KNO 3I 克、MgSOJH2O 0.5 克、琼脂 20 克、K2HPO4 0.5 克、FeS047H20 0.01 克、蒸馏水 1000ml，pH7.2)，每个梯度3次重复，涂布均匀，倒置于28°C培养箱中培养。3、拮抗放线菌的筛选 采用平板对峙法，将黄瓜疫霉菌从PDA培养基上活化后，用7_打孔器打成菌饼备用。取其中一个菌饼，菌丝面朝下，接于PDA培养基中央，在离指示菌等距离接入纯化后的放线菌，进行对峙培养，重复3次，于28 °C倒置培养至CK长满平板后观察、测量抑菌圈，将拮抗作用显著的放线菌和细菌进行保存。采用5倍稀释发酵液对黄瓜疫霉菌进行抑菌活性检测，将初筛到的拮抗效果好的生防菌接种于高氏一号液体培养基中，28°C、200r/min摇床培养5天左右，用细菌过滤器过滤。取过滤后的发酵液5ml与20ml的PDA培养基混合均匀倒平板，并以无菌水5ml代替发酵液与PDA培养基混匀作为CK对照。取黄瓜疫霉菌菌饼，接于混合的培养基中央，重复3次，于28°C倒置培养至CK长满平板，测得发酵液对黄瓜疫霉菌的抑制率为72%。筛选结果请见图1。4、拮抗放线菌X54抑菌广谱性 采用平板对峙法，将不同的靶标菌株:辣椒炭疽病菌(Cca/zsici)、烟草黑胫病菌(P.parasitica)、水稻纹枯病菌(Λ soIani)>小麦赤霉病菌(G.zeae)、柑橘炭疽病菌(C.黄瓜枯萎病菌(/7.等进行活化后，同样打当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种对黄瓜疫霉菌有抑制作用的放线菌，其是保藏号为CGMCC No. 10042的弗吉尼亚链霉菌。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：易图永，孙莉，刘双清，王运生，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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