一种具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法技术

技术编号:11906741 阅读:101 留言:0更新日期:2015-08-19 20:03
本发明专利技术公开了一种具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法。取葡糖酸醋酸杆菌GD-BC-1进行发酵培养,得到含有细菌纤维素的发酵液,再在发酵液中加入产抗菌肽的细菌,细菌纤维素包埋所加产抗菌肽的细菌并继续发酵,得到含有纤维素团的菌液,取出纤维素团,放入MRS培养基中进行培养,然后再取出纤维素团,用水漂洗,得到具有抗菌性能的细菌纤维素。本发明专利技术通过混合多重发酵方法,在细菌纤维素合成的过程中包裹产抗菌肽的细菌。通过转换发酵培养基,使抗菌肽的细菌合成抗菌肽,并挂载在细菌纤维素上,制成具有抗菌性能的细菌纤维素。解决了直接加入抗菌剂对产细菌纤维素菌的毒害作用。简化传统抗菌细菌纤维素的繁复制备过程。

【技术实现步骤摘要】

:本专利技术属于微生物领域,具体涉及。
技术介绍
:细菌纤维素是一种由细菌分泌出的高聚物。它除了具有一般纤维素的特点,还具有众多独特性质。其具有一个三维的网络结构。使细菌纤维素具有很高的结合水能力;表面积要比植物纤维大,具有更高的化学吸附能力;较好的机械性能,其具有高弹性,高回弹性及高拉伸强度。这众多优点使细菌纤维素具有作为伤口的贴料的潜力。细菌纤维素的成份只为纤维素,其没有抗菌的功能。为了让细菌纤维素具有抗菌的功能,目前采用浸泡方式和化学接枝方式。制备过程通过多个步骤,过程繁复。并且目前国内没有通过混合多重发酵方式制备出具有抗菌性能的细菌纤维素的报道。
技术实现思路
:本专利技术的目的是提供,利用该制备方法能够制备得到具有抗菌性能的细菌纤维素。该制备方法还具有简单易行,成本低廉的优点。本专利技术的具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:取葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobactersp.) GD-BC-1CCTCC M208149 进行发酵培养,得到含有细菌纤维素的发酵液,再在发酵液中加入产抗菌肽的细菌,细菌纤维素包埋所加产抗菌肽的细菌并继续发酵,得到含有纤维素团的菌液,取出纤维素团,放入MRS培养基中进行培养,然后再取出纤维素团,用水漂洗,得到具有抗菌性能的细菌纤维素。优选,所述的具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法,具体步骤如下:将葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobactersp.) GD-BC-1CCTCC M208149 种子液按照5?10% v/v的接种量,接入发酵培养基中,28?32°C往复式摇床振荡培养18?36小时,摇床转速为20?80r/m,冲程为65?75mm或28?32°C旋转式摇床振荡培养18?36小时,摇床转速为20?120r/m,得到发酵液;在发酵液中加入产抗菌肽的细菌菌液,接种量为1.9?10% v/v, 28?32°C往复式摇床振荡培养2?5天,摇床转速为20?60r/m,冲程为65?75mm或28?32°C旋转式摇床振荡培养2?5天,摇床转速为20?80r/m,细菌纤维素包埋所加产抗菌肽的细菌一起发酵,得到含有纤维素团的菌液,取出菌液中的纤维素团,放入MRS培养基中进行培养,然后再取出纤维素团,用水漂洗,得到具有抗菌性能的细菌纤维素。所述的发酵培养基优选为:每升含有葡萄糖20?50g,酵母膏5?12g,蛋白胨5?10g,梓檬酸I?2g,磷酸氢二钠1.5?3g,余量为水,pH值6.0?7.0 ;或葡萄糖20?60g,酵母膏0.8?1.2g,蛋白胨6?8g,磷酸氢二钠6?10g,生化级玉米楽4?8g,乙酸0.8?1.2g,无水乙醇2?12g,余量为水,pH值5.8?6.2。所述的葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobactersp.)GD-BC-1CCTCC M208149 种子液是通过以下方法获得的:葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)⑶-BC-1CCTCCM208149接种于液体活化培养基中,在28?32°C往复式摇床振荡培养18?36小时,摇床转速为80?110r/m,冲程为65?75mm,由此获得葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149种子液,所述的液体活化培养基配方为,每升含有葡萄糖或甘露醇20?50g,酵母膏5?12g,蛋白胨5?10g,朽1檬酸I?2g,磷酸氢二钠1.5?3g,余量为水,pH 值 6.0 ?7.0。所述的产抗菌肽的细菌优选为乳酸链球菌(Lactococcus lactis sp.)、片球菌属(Ped1coccus sp.)的细菌、明串球菌属(Leuconostoc sp.)的细菌、乳球菌属(Lactococcus sp.)的细菌或乳杆菌属(Lactobacillus sp.)的细菌,这些细菌都能产生抗菌肽。这些菌株都属于现有技术中的常用菌株,可以从保藏机构,或者试剂公司购买到。所述的放入MRS培养基中进行培养,然后再取出纤维素团,用水漂洗优选为将纤维素团放入MRS培养基中,37°C静止培养2?5天,或37°C厌氧静止培养2?5天,然后用无菌水漂洗,得到具有抗菌性能的细菌纤维素。所述的MRS培养基,其中文名称为:乳酸细菌培养基,其是现有技术中的培养基,能够购买到。其配方为:每升含有酪蛋白胨10g,牛肉浸取物10g,酵母提取液5g,葡萄糖5g,乙酸钠5g,柠檬酸二胺2g,吐温801g,磷酸氢二钾2g,七水硫酸镁0.2g,七水硫酸锰0.05g,余量为水,pH值6.5。本专利技术通过混合多重发酵方法,在细菌纤维素合成的过程中包裹产抗菌肽的细菌。通过转换发酵培养基,使抗菌肽的细菌合成抗菌肽,并挂载在细菌纤维素上,制成具有抗菌性能的细菌纤维素。解决了直接加入抗菌剂对产细菌纤维素菌的毒害作用。简化传统抗菌细菌纤维素的繁复制备过程。【具体实施方式】:以下实施例是对本专利技术的进一步说明,而不是对本专利技术的限制。以下实施例中所使用的葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)⑶-BC-1CCTCCM208149,于2008年10月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),编号为:CCTCC NO:M 208149。该菌株在专利号为:200810218500.7,专利技术名称为:细菌纤维素产生菌及利用该菌株制备细菌纤维素的方法中也公开过。实施例1:(I)种子液制备:从葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD-BC-1CCTCC M208149斜面取两环菌体接入500mL三角瓶装有50mL的液体活化培养基中,28 °C,100r/m,冲程为65mm振荡培养36h,得到种子液。(液体活化培养基每升配方组分如下:葡萄糖20g,蛋白胨5g,酵母膏5g,磷酸氢二钠2.7g,柠檬酸1.15g,余量为水,将上述成份混合均匀后,调PH值为6.0,灭菌备用)。(2)细菌纤维素的发酵:取5mL种子液加入装有500mL三角瓶装有50mL发酵培养基中,28°C往复式摇床振荡培养36小时,摇床转速为60r/m,冲程为75mm,得到发酵液。(发酵培养基为每升含有葡萄糖20g,酵母膏5g,蛋白胨10g,柠檬酸lg,磷酸氢二钠1.5g,余量为水,将上述成份混合均匀后,调pH值为7.0,灭菌备用)。(3)产抗菌肽的细菌的活化:将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei sp.)斜面取两环菌体接入50mL MRS培养基中,37°C静止培养2天,得干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei sp.)活化菌液。(MRS培养基为每升含有酪蛋白胨10g,牛肉浸取物10g,酵母提取液5g,葡萄糖5g,乙酸钠5g,柠檬酸二胺2g,吐温801g,磷酸氢二钾2g,七水硫酸镁0.2g,七水硫酸锰0.05g,余量为水,将上述成份混合均匀后,调pH值为6.5,灭菌备用)。(4)包裹产抗菌肽的细菌:从步骤(3)的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei sp.)活化菌液中取2.5mL加入步骤(2)的发酵液中,28°C往复式摇床振荡培养2天,摇床转速为30r/m,冲程为65mm,得到含有纤维素团的菌液。(5)抗菌肽的发酵:从步骤(4)的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有抗菌性能的细菌纤维素的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:取葡糖酸醋酸杆菌(Gluconacetobacter sp.)GD‑BC‑1CCTCC M208149进行发酵培养,得到含有细菌纤维素的发酵液,再在发酵液中加入产抗菌肽的细菌,细菌纤维素包埋所加产抗菌肽的细菌并继续发酵,得到含有纤维素团的菌液,取出纤维素团,放入MRS培养基中进行培养,然后再取出纤维素团,用水漂洗,得到具有抗菌性能的细菌纤维素。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:冯劲施庆珊谢小保黄小茉
申请(专利权)人:广东省微生物研究所
类型:发明
国别省市:广东;44

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