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重构的HDL配制剂制造技术

技术编号:11856299 阅读:89 留言:0更新日期:2015-08-11 02:54
本发明专利技术涉及重构的高密度脂蛋白(rHDL)配制剂,其包含载脂蛋白,脂质和冻干稳定剂。所述配制剂具有降低的肾毒性和良好的长期稳定性,特别是呈冻干形式的配制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及重构的高密度脂蛋白配制剂,尤其涉及具有适宜的稳定性和药物用途 的生物学特性的配制剂。
技术介绍
高密度脂蛋白(HDLs)构成一系列存在于普通血清的脂蛋白颗粒。成熟HDL颗粒以 含有蛋白质和脂质的球状结构形式存在。这些颗粒的外层中是更具极性的脂质、磷脂和游 离胆固醇,全部具有向外指向含水环境的带电基团。更疏水的脂质比如酯化的胆固醇和甘 油三酯位于颗粒的核心。新形成的或初生的HDL颗粒缺少脂质从而呈盘状。蛋白质组分包 埋在外层中。主要蛋白质组分是具有较少量的ApoA-II,ApoA-IV,ApoCIII,ApoD,Apo E和ApoJ的载脂蛋白A-I(ApoA-I)。各种其它蛋白质位于HDL颗粒上,比如卵磷脂-胆 固醇乙酰基转移酶,PAF乙酰基水解酶和对氧磷酶。HDLs的特征是高密度(>1. 063g/ml)和 小尺寸(Stoke直径=5至17nm)。 已经努力开发人工HDLs,其能够输注入患者血流中以模拟天然HDLs的生物学效 果。这些人工颗粒一般称为〃重构的HDL〃 (rHDL),或有时称为HDL模拟物或合成的HDL颗 粒。人工颗粒含有天然颗粒组分,尤其是ApoA-I和脂质。例如,WO2012/000048描述包 含ApoA-I,磷脂酰胆碱(PC)和少量胆酸钠的rHDL。WO2012/109162描述包含ApoA-I, 鞘磷脂(SM)和磷脂酰甘油(例如1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3- (DPPG))的rHDL。 方便的是在使用前冻干(冷冻-干燥)rHDL配制剂。冻干是制备固体蛋白质药物 所通常使用的方法。然而,该过程产生各种冷冻和干燥压力,比如溶剂化蛋白质的浓度,形 成冰晶体,pH变化等。全部这些压力能够以不同程度使蛋白质变性。从而,在蛋白质配制剂 中常常需要稳定剂来保护在冷冻和干燥过程期间的蛋白质稳定性。为了保持rHDL配制剂 在冻干期间的稳定性,已使用稳定剂如糖类和糖醇。例如,US5, 089, 602公开血浆衍生的脂 蛋白,其用10%蔗糖或10%蔗糖和5%甘露醇的混合物稳定化。WO2012/000048公开糖和 糖醇稳定剂,以约65至85g/LrHDL配制剂(相当于约6.5至8.5%w/w)的浓度使用。WO 2012/109162公开作为稳定剂的鹿糖和甘露醇,分别以4%w/w和2%w/w用于混合物中。 Kim等人,BiotechnologyandBioprocessEngineering16, 785-792 (2011)调查了rHDL 的制备和放置稳定性。其中,ApoA-I:大豆PC比率1:150的rHDL并不能被1或5%蔗糖 充分地稳定化,而10%鹿糖被描述为最佳。 这些文献的rHDL配制剂期望用于输注疗法,但是输注产品中的高糖浓度可以导 致或恶化肾问题。在rHDL的靶标患者群体这是特别的问题,原因在于这些患者常常有肾损 伤。 因此本专利技术的目的是,提供与这些先前的配制剂相比备择或改善的rHDL配制剂。 尤其是,专利技术人寻求具有降低的肾毒性的稳定的rHDL配制剂。 该问题通过根据权利要求1的配制剂得以解决。进一步优选实施方式定义在从属 权利要求中。 令人惊讶地,已发现权利要求1的rHDL配制剂显示良好的长期稳定性。通过含有 比先前配制剂更少的冻干稳定剂,本申请配制剂也具有更低的肾毒性风险。低冻干稳定剂 浓度还可以允许rHDL在rHDL功能的功能测试表现更佳。专利技术人还已发现氨基酸、特别是 脯氨酸是有用的rHDL配制剂冻干稳定剂。 专利技术概要 本专利技术提供rHDL配制剂,其包含载脂蛋白、脂质和冻干稳定剂,其中载脂蛋白与 脂质的比率是约1:20至约1:120 (mol:mol)。 优选,冻干稳定剂以约1. 0%至约6. 0% (w/wrHDL配制剂),例如1. 0,1. 1,1. 2或 1. 3至5. 5, 5. 6, 5. 7, 5. 8, 5. 9或6. 0的浓度存在。这种低量的冻干稳定剂可以降低肾毒性 风险。其也特别适于在急性冠脉综合征治疗(ACS)期间接受造影剂的患者,原因在于这些 试剂可以与冻干稳定剂竞争在肾清除。在优选的实施方式中,冻干稳定剂以约1.0%至小 于6. 0%例如约1. 0%至5. 9%的浓度存在。优选冻干稳定剂以约3. 0至小于6. 0%,例如 约3. 0至5. 9%的浓度存在。更优选,冻干稳定剂以约4. 0至5. 5%,特别4. 3至5. 3%,更 特别4. 3至5. 0%,和最优选4. 6至4. 8% (w/w)的浓度存在。所述配制剂显示良好的稳定 性和低肾毒性。 另选或此外,优选的载脂蛋白与冻干稳定剂的比率是约1:1至约l:3(w:w)。尤其 是,载脂蛋白与冻干稳定剂的比率是约1:1至约1:2. 4(w:w),例如小于l:2(w:w)。专利技术人 已发现这些配制剂保持稳定、冻干样品尺度分布显示很少的变化或不显示变化,甚至在贮 藏(储存)数月之后亦如此。然而,在某些实施方式中,载脂蛋白与冻干稳定剂的比率可以 小于该,例如约1:1至约1:7,和尤其是约1:1至约l:5(w:w)。 本专利技术也提供包含载脂蛋白、脂质和冻干稳定剂的rHDL配制剂,其中冻干稳定剂 包含氨基酸。优选氨基酸是脯氨酸。专利技术人已发现氨基酸是rHDL配制剂的良好冻干稳定 剂,特别是在具有低量其它稳定剂的混合物中如此。 本专利技术也提供前述的rHDL配制剂,用于预防或治疗人类的疾病、障碍或病症。适 宜地,疾病、障碍或病症响应rHDL配制剂的预防性或治疗性给予。 专利技术详述 在本专利技术的上下文中,术语〃重构的HDL(rHDL)配制剂〃意指任何人工制备的脂 蛋白配制剂或组合物,其功能上相似、类似、相应于或模拟高密度脂蛋白(HDL),一般存在于 血浆中。rHDL配制剂在其范围内包括〃HDL模拟物〃和〃合成的HDL颗粒〃。 在本专利技术的上下文中,术语〃冻干稳定剂〃意指在冻干期间稳定化蛋白质的物 质。这种冻干稳定剂是本领域熟知的且综述于例如Wang(2000)InternationalJournalof Pharmaceuticals203:1-60。用于本专利技术中的优选冻干稳定剂包含糖,糖醇,氨基酸或其混 合物。例如,专利技术人已发现二糖比如蔗糖是用作冻干稳定剂的特别适宜的糖类。可以使用 的其它二糖包括果糖,海藻糖,麦芽糖和乳糖。除了二糖之外,还可以使用三糖如棉子糖和 麦芽三糖。更大的低聚糖例如麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖也可以是适宜的。另选地,可 以使用单糖如葡萄糖,甘露糖和半乳糖。这些一、二、三和更大的寡糖可以单独或彼此组合 使用。如上文所述,还可以使用糖醇作为冻干稳定剂。这些糖醇还可以单独或组合使用。本 专利技术中所用的特别糖醇是甘露醇。可以使用的其它糖醇包括肌醇,木糖醇,半乳糖醇和山梨 醇。其它多元醇如甘油也可以是适宜的。可以用作冻干稳定剂的氨基酸包括脯氨酸,甘氨 酸,丝氨酸,丙氨酸和赖氨酸。还可以使用修饰的氨基酸例如4-羟脯氨酸,L-丝氨酸,谷氨 酸钠,肌氨酸和Y-氨基丁酸。专利技术人已发现脯氨酸是用作冻干稳定剂的特别适宜的氨基 酸。 在特别的实施方式中,冻干稳定剂包含糖和糖醇的混合物。例如,可以使用蔗糖和 甘露醇的混合物。糖和糖醇可以以任意适宜比率,例如约I:I(w:w)至约3:1 (w本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含载脂蛋白、脂质和冻干稳定剂的重构的高密度脂蛋白(rHDL)配制剂,其中载脂蛋白与脂质的比率是约1:20至约1:120(mol:mol)和冻干稳定剂以约1.0%至小于6.0%(w/w rHDL配制剂)的浓度存在。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:Y·武契察G·L·沃伦
申请(专利权)人:CSL有限公司
类型:发明
国别省市:澳大利亚;AU

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