本发明专利技术公开了miR-455-3p在食管鳞状细胞癌中的诊断、治疗和预后的应用，本发明专利技术发现miR-455-3p在ESCC病人中高表达，与ESCC病人的生存率低显著相关。体内、外实验研究发现miR-455-3p能够促进ESCC的恶性发展；而抑制miR-455-3p的表达能够抑制ESCC干细胞特性并增强其对化疗药物的敏感性；可见miR-455-3p的表达抑制剂是肿瘤干细胞的重要抑制物，能够抑制肿瘤的干细胞特性和增加癌症干细胞对化疗药物的敏感性。本发明专利技术首次发现检测癌症病人中miR-455-3p的表达，可以作为ESCC的辅助诊断和/或预后判断。本发明专利技术为肿瘤疾病提供了新的诊断、治疗方法和药物筛选平台。
【技术实现步骤摘要】
miR-455-3p在食管鳞状细胞癌中的诊断、治疗和预后的应用
本专利技术属于生物
，涉及一种新的microRNA及其Antagomir的应用，特别涉及miR-455-3p及Antagomir-455-3p的应用。
技术介绍
食管鳞状细胞癌(Esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率占第六位。我国大约90%的食管癌为鳞状细胞癌，并且其具有显著的地域性，高发区的食管鳞状细胞癌发病率是低发区的500倍。烟酒史、营养缺失、热食以及摄入致癌物等因素都与食管鳞状细胞癌相关。外科手术、放化疗是食管鳞状细胞癌的重要治疗手段，但是其5年生存率只有10%左右。耐药性是食管鳞状细胞癌治疗难以攻克的难关。传统的药物难以杀灭肿瘤干细胞。肿瘤干细胞既具有类似于正常干细胞的特性，如自我更新，低分化及药物抵抗；又具有肿瘤细胞的恶性发展能力。深入了解食管鳞状细胞癌的耐药机制可以制定食管鳞状细胞癌风险评估和有效的诊断措施，并且可以为肿瘤治疗提供新的靶点。microRNA，通常长度为19～25个核苷酸，广泛存在于各种动植物甚至单细胞真核生物中，是一类在进化上高度保守的小分子单链RNA。最近的研究发现，microRNA表达与多种癌症相关，大约50%得到注解的miRNAs在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点（fragilesite）。这说明miRNAs在肿瘤发生过程中起至关重要的作用，其主要通过结合到多种靶向mRNAs的3’UTR从而抑制mRNAs的转录。Antagomir是根据microRNA成熟体序列而设计，经过特殊标记与修饰的单链RNA，专门用于抑制内源性microRNA的高效阻断剂。Antagomir长度一般在22-25nt，3’端进行胆固醇（cholesterol）标记和四个硫代磷酸（PS）位点修饰，5’端两个硫代磷酸（PS）位点修饰，全链2-甲基化修饰，提高杂交效率和优越的稳定性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种食管鳞状细胞癌的检测试剂盒。本专利技术的另一目的在于提供一种食管鳞状细胞癌的预后诊断试剂盒。本专利技术的再一目的在于提供一种治疗食管鳞状细胞癌的药剂。本专利技术所采取的技术方案是：miR-455-3p作为肿瘤检测、治疗、预后靶点的应用。一种肿瘤检测试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测miR-455-3p的试剂。进一步的，上述试剂盒中含有实时荧光定量检测miR-455-3p的引物序列。进一步的，上述试剂盒中含有实时荧光定量检测miR-455-3p的引物序列：5’-GCAGTCCATGGGCATATACAC-3’（SEQIDNO：1）和5’-ACTGGTGTCGTGGAGTCGG-3’（SEQIDNO：2）。一种肿瘤的预后试剂盒，该试剂盒中含有能够定量检测miR-455-3p的试剂。进一步的，上述试剂盒中含有实时荧光定量检测miR-455-3p的引物序列。进一步的，上述试剂盒中含有实时荧光定量检测miR-455-3p的引物序列：5’-GCAGTCCATGGGCATATACAC-3’（SEQIDNO：1）和5’-ACTGGTGTCGTGGAGTCGG-3’（SEQIDNO：2）。一种治疗食管鳞状细胞癌的药剂，该药剂中含有抑制miR-455-3p表达的试剂。进一步的，上述抑制miR-455-3p表达的试剂选自miR-455-3p的拮抗剂Antagomir、miR-455-3p的反义链中的至少一种。本专利技术的有益效果是：本专利技术在食管鳞状细胞癌的肿瘤细胞中发现了miR-455-3p，在207例病人组织样本及15例健康组织样本中发现，miR-455-3p在食管鳞状细胞癌病人中高表达，这提示miR-455-3p具有成为肿瘤辅助诊断标记物的潜能。进一步，专利技术人发现miR-455-3p高表达与食管鳞状细胞癌患者5年总生存率及无病生存率显著负相关，miR-455-3p高表达明确指示较差的生存预后。这提示了miR-455-3p具有成为食管鳞状细胞癌患者生存预后指标的潜能。体内和体外的功能性研究分析表明，miR-455-3p能够促进食管鳞状细胞癌细胞的恶性发展，Antagomir-455-3p功效与其相反。此外，抑制miR-455-3p的表达能够抑制肿瘤干细胞特性和增强其对化疗药物的敏感性。并且，抑制miR-455-3p的表达可抑制肿瘤干细胞相关生物标志物的表达。综上所述，本研究发现Antagomir-455-3p是肿瘤干细胞的重要抑制物，在癌症的发展过程中具有重要意义。此外，Antagomir-455-3p能够降低癌症干细胞对化疗药物的敏感性。检测癌症病人中miR-455-3p的表达，可以作为食管鳞状细胞癌的辅助诊断和/或预后判断。本专利技术为肿瘤疾病提供了新的诊断、治疗方法和药物筛选平台。附图说明图1为miR-455-3p在ESCC临床标本和细胞系中表达情况及生存预后情况；显示为miR-455-3p在ESCC的TCGA数据库、临床标本和细胞系中表达上调，miR-455-3p高表达与患者5年总生存率（Overallsurvival,OS）及无病生存率（Disease-freesurvival,DFS）呈显著负相关；图2为原代ESCC肿瘤细胞经CDDP药物筛选后分为CDDP处理的ESCC（EC-CR）和CDDP未处理的ESCC（EC-NT），EC-CR的耐药性、肿瘤发生率、肿瘤干性等功能均高于EC-NT；图3为microRNA表达谱分析EC-CR和EC-NT细胞中microRNA的表达情况，显示miR-455-3p在EC-CR和EC-NT细胞中均表达上调；图4为miR-455-3p的体内体外的功能实验。体外实验中的克隆形成实验、SP+分选实验、CD90+实验显示高表达miR-455-3p促进ESCC的肿瘤细胞干性；而抑制miR-455-3p的表达抑制了ESCC肿瘤细胞干性。体内实验中高表达miR-455-3p增强了ESCC细胞的体内成瘤能力，而沉默miR-455-3p的表达减弱了ESCC细胞的体内成瘤能力；图5为miR-455-3p的表达量对ESCC肿瘤的的影响，高表达miR-455-3p增强了ESCC细胞的淋巴结和肺内转移，而沉默miR-455-3p的表达减弱了ESCC细胞淋巴结和肺内转移；图6为miR-455-3p表达量与肿瘤对化疗药物的敏感性的关系，显示为高表达miR-455-3p增强对化疗药物CDDP和5-FU的耐药性；在肿瘤形成过程中高表达miR-455-3p促进了肿瘤细胞的生长；在肿瘤形成过程中，注射Antagomir-455-3p可抑制肿瘤细胞对化疗的药物的影响，抑制肿瘤的生长；图7为TargetScan网站预测结果显示miR-455-3p可能通过作用于PTPN9、PIAS3、SOCS3、DKK3、GSK3β、SMURF1、NEDD4L、PPM1A这8个基因mRNA的3'UTR发挥功能；miRNPs免疫共沉淀实验、免疫印迹实验检测表明高表达miR-455-3p促进RISC复合体（RNA-inducedsilencingcomplex）与靶基因PTPN9、PIAS3、SOCS3、DKK3、GSK3β、SMURF1、NEDD4L、PPM1A的mRNA结合，下调靶基因的本文档来自技高网...
【技术保护点】
miR‑455‑3p作为食管鳞状细胞癌检测靶点的应用。
【技术特征摘要】
1.定量检测miR-455-3p的试剂在制备食管鳞状细胞癌的检测试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：该试剂盒中含有实时荧光定量检测miR-455-3p的引物序列。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：该试剂盒中含有实时荧光定量检测miR-455-3p的引物序列5’-GCAGTCCATGGGCATATACAC-3’（SEQIDNO：1）和5’-ACTGGTGTCGTGGAGTCGG-3’（SEQIDNO：2）。4.定量检测miR-455-3p的试剂在制备食管鳞状细胞癌的预后诊断试剂盒中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋立兵，李隽，刘爱斌，曹丽雪，朱金容，吴阁艳，吴淑，
申请(专利权)人：中山大学肿瘤防治中心，
类型：发明
国别省市：广东;44
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