本发明专利技术首先公开了一种曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞株BT-474/HR，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：C2014245，保藏日期为2015年1月14日；本发明专利技术其次公开了上述曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞株BT-474/HR的构建方法，即利用人乳腺癌细胞株BT-474，结合曲妥珠单抗体外和体内诱导两种手段，得到一种同时具有很强的体外和体内曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞株BT-474/HR，该细胞株既保留了其亲本细胞株的HER2过表达特性，又对HER2靶向抗体药物曲妥珠单抗表现出很强的体外和体内耐药性，因此可直接用于新的抗肿瘤治疗药物的开发和研究。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞及其制备方法和用途。
技术介绍
HER2 又称 ErbB2，是表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)的家族成员之一，它是由HER2基因编码的具有受体酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白。HER2作为一个重要的肿瘤标志物分子，其在乳腺癌、胃癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中都存在基因扩增或蛋白过度表达的现象，临床上称为HER2阳性肿瘤。经统计，乳腺癌病人中HER2过表达的比例高达20-30%，HER2阳性肿瘤临床表现为恶性程度高、对放疗和化疗不敏感、治疗后易复发和转移，其潜在的危害性更大(详见Ross JS, FletcherJA, (1999)The HER2/neu oncogene:prognostic factor, predictive factor and targetfor therapy, Semin Cancer B1l,9:125-138)。由于HER2在正常细胞和肿瘤细胞中的表达水平具有显著的差异，因而成为肿瘤免疫生物治疗的理想靶点，对于靶向HER2抗肿瘤药物的研宄，1998年美国FDA批准了第一个针对HER2人源化单克隆抗体的药物曲妥珠单抗(Trastuzumab，商品名赫赛汀)上市，如今采用曲妥珠单抗联合化疗药物已成为国际公认的治疗HER2阳性晚期转移性乳腺癌的标准治疗方案，与传统化疗方法相比，采用该联合化疗方案可以明显提高乳腺肿瘤的治疗效果，2010年美国FDA又批准曲妥珠单抗用于HER2阳性晚期胃癌的治疗。但是，大量临床应用发现，很多HER2阳性肿瘤病人对曲妥珠单抗治疗产生了原发性和继发性的耐药现象，因此研宄人员需要深入研宄抗体药物的作用机理，以更好地进行肿瘤个体化的治疗，近几年新上市的人源化抗体药物帕妥珠单抗(Pertuzumab)、小分子激酶抑制剂拉帕替尼(Lapatinib)以及抗体药物偶联物曲妥珠单抗-DMl (Trastuzumab-DMl)等HER2靶向抗肿瘤药物，这些都是研宄人员基于HER2阳性肿瘤对曲妥珠单抗治疗的耐药性产生的分子机理进行研宄而取得的成果。当然，开发新型的HER2靶向抗肿瘤药物需要寻找和建立合适的曲妥珠单抗耐药的肿瘤模型。人乳腺癌细胞系BT-474是一种从临床肿瘤病人体内分离出的对曲妥珠单抗高度敏感的HER2过表达肿瘤细胞，其在裸鼠体内具有较好的肿瘤生长特性，因此经常用作构建耐药的肿瘤模型。现有技术中，有些研宄人员使用曲妥珠单抗体外诱导的方法建立BT-474耐药细胞株，一般抗体处理时间为3-9个月(详见Konecny GE, et al, (2006) Activity ofthe Dual Kinase Inhibitor Lapatinib(GW572016)against HER-2-0verexpressing andTrastuzumab-Treated Breast Cancer Cells, Cancer Res, 66:1630—1639 ；Yoshida R，etal, (2012)Mechanism of resistance to trastuzumab and molecular sensitizat1n viaADCC activat1n by exogenous express1n of HER2_extracellular domain in humancancer cells, Cancer Immunol Immunotherj 61:1905 - 1916),但是有研究认为体外诱导的方法建立的BT-474耐药细胞株在小鼠体内的耐药性不明显，曲妥珠单抗依旧可以明显抑制体内肿瘤的生长(详见 Kute TE, et al, (2009)Breast tumor cells isolated fromin vitro resistance to trastuzumab remain sensitive to trastuzumab ant1-tumoreffects in vivo and to ADCC killing.Cancer Tmmunol Immunother, 58:1887 - 1896),因此也有研宄使用曲妥珠单抗体内诱导的方法建立BT-474耐药细胞株，该细胞株也表现出一定程度的体外耐药特性(详见 Emerson E0, et al, (2005) In vivo select1n andcharacterizat1n of herceptin-resistance in the human breast adennocarcinomamodel, BT-474, Proc Amer Assoc Cancer Res, Abstract 2646 ；Ritter CA, et al.(2007)Human Breast Cancer Cells Selected for Resistance to Trastuzumab In vivoOverexpress Epidermal Growth Factor Receptor and ErbB Ligands and RemainDependent on the ErbB Receptor Network.Clin Cancer Res.13:4909-4919)，但是，关于BT-474耐药细胞株对曲妥珠单抗产生耐药性的相关信号转导的分子机理的研宄结果却不一致，具体使用BT-474耐药细胞株时，Emerson EO等人发现HER2和EGFR受体表达降低，IGF-1R受体表达升高，而Ritter RA等发现HER2受体表达不变，EGFR受体和EGF生长因子表达均升高，另外也有其他文献资料报告使用了曲妥珠单抗耐药的BT-47人乳腺癌细胞株，但是并未公开该细胞株的制备流程。因此，制备出一种同时具有很强的体外和体内耐药特性的人乳腺癌细胞株，这对于研宄人员深入研宄曲妥珠单抗的耐药机制，并进一步筛选新的抗肿瘤药物以开发肿瘤耐药逆转药物来说，具有较高的科研和生产应用价值。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是提供一种同时具有很强的体外和体内曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞株。为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案:一种曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞株BT-474/HR，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC C2014245，保藏日期为2015年I月14日。本专利技术的第二个目的是提供一种上述曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞株BT-474/HR的构建方法，包括以下步骤:I)将普通的人乳腺癌细胞株BT474在体外培养至处于对数生长期，向培养基中加入曲妥珠单抗至有效浓度为10ug/ml，所用的普通的人乳腺癌细胞株BT-474购自中国科学院上海细胞库，曲妥珠单抗购自Roche公司，其规格为320mg/支；2)分2-4次逐步增加培养基中曲妥珠单抗的有效浓度，每次增加后维持曲妥珠单抗的有效浓度一段时间，直至细胞能在该浓度中稳定生长和传代，如此最终获得在曲妥珠单抗的有效浓度为100ug/ml的培养基中可稳定生长、传代、冻存和复苏的曲妥本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞株BT‑474/HR，其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC C2014245。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：宋礼华，胡思怡，张志辉，
申请(专利权)人：安徽安科生物工程集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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