修剪式多位点组合装配制造技术

本发明专利技术提供通过修剪式多位点组合装配产生多个修饰的多核苷酸的新方法，所述修饰的多核苷酸在多个位点具有各种突变的不同组合，该方法包括在单一反应混合物中将至少两种或至少三种引物添加至双链模板多核苷酸，其中所述引物不重叠，并且其中所述引物的每一种包括至少一个不同于其他引物的突变，其中至少一种引物是可退火至所述模板的负链的正向引物以及至少一种引物是可退火至所述模板的正链的反向引物，并使所述反应混合物进行聚合酶延伸反应以从所述至少三种引物产生多个延伸的修饰的多核苷酸。该方法可在将延伸的修饰的多核苷酸转化至细胞之前在不使用连接步骤的情况下进行。所述多个延伸的修饰的多核苷酸可用酶处理，以在转化至细胞之前破坏模板多核苷酸。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种产生多个修饰的多核苷酸的方法，其包括：(a)在单一反应混合物中将至少三种引物添加至双链模板多核苷酸，其中所述至少三种引物不重叠，并且其中所述至少三种引物的每一种包括至少一个不同于其他引物的突变，其中至少一种引物是可与所述模板的负链退火的正向引物以及至少一种引物是可与所述模板的正链退火的反向引物，和(b)使所述反应混合物进行聚合酶延伸反应以从所述至少三种引物产生多个延伸的修饰的多核苷酸。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：X·谭，
申请(专利权)人：BP法人北美有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US