【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及比伐芦定中间体的固相合成方法。
技术介绍
凝血酶是胰蛋白酶样高度特异的丝氨酸蛋白酶,催化活性位点为作用于精氨酸残基的特异性袋状结构。除活性位点外,凝血酶上还有阴离子结合位点识别纤维蛋白原或肝素。凝血酶在生理止血过程中起核心作用。水蛭素是天然存在的活性最强的凝血酶抑制蛋白,由65个氨基酸组成,含硫酸化酪氨酸,和凝血酶通过二价结合形成特异紧密的1:1复合物。水蛭素由N-端含紧密核心结构域与C-端延展带负电结构域组成,C-端结构域识别阴离子结合位点后导致凝血酶发生微小的构象转换,随后N-端结构域与催化位点及邻近的非极性区域结合,将十肽环状结构挤出活性位点。凝血酶活性位点抑制剂与阴离子结合位点抑制剂有协同效应,1990年Maraganore,Feton和Kline在美国专利US5196404中,据此设计了凝血酶二价抑制剂比伐芦定:H-D-Phe1-Pro2-Arg3-Pro4-Gly5-Gly6-Gly7-Gly8-Asn9-Gly10-Asp11-Phe12-Glu13-Glu14-Ile15-Pro16-Glu17-Glu18-Tyr19-Leu20-OH。C-端12肽为水蛭素片段,能够结合阴离子结合位点;N-端四肽D-Phe1-Pro2-Arg3-Pro4与活性位点结合;中间用四个连续的甘氨酸Gly5-Gly6-Gly7-Gly8连接。因其Arg3-Pro4会被凝血酶缓慢水解而游离出活性位点,故为可逆性二价凝 ...
【技术保护点】
一种肽树脂18的固相合成方法,其特征在于包括以下步骤:步骤1,在非质子极性溶剂中,将有机碱与肽树脂17进行脱除脯氨酸芴甲氧羰酰基氨基保护基的反应,得到肽树脂17’;所述的肽树脂17为Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑Asn(R3)‑Gly‑Asp(R4)‑Phe‑Glu(R5)‑Glu(R6)‑Ile‑Pro‑Glu(R7)‑Glu(R8)‑Tyr(R9)‑Leu‑R10;所述的肽树脂17’为H‑Pro‑Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑Asn(R3)‑Gly‑Asp(R4)‑Phe‑Glu(R5)‑Glu(R6)‑Ile‑Pro‑Glu(R7)‑Glu(R8)‑Tyr(R9)‑Leu‑R10;步骤2,在非质子极性溶剂中,缩合剂和催化剂存在的条件下,将步骤1中制得的肽树脂17’与Fmoc‑Arg(R2)‑OH进行缩合反应,得到肽树脂18;所述的肽树脂18为Fmoc‑Arg(R2)‑Pro‑Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑Asn(R3)‑Gly‑Asp(R4)‑Phe‑Glu(R5)‑Glu(R6)‑Ile‑Pro‑Glu(R7)‑Glu(R8)‑Tyr(R9)‑Leu‑R ...
【技术特征摘要】
1.一种肽树脂18的固相合成方法,其特征在于包括以下步骤:步骤1,
在非质子极性溶剂中,将有机碱与肽树脂17进行脱除脯氨酸芴甲氧羰酰基
氨基保护基的反应,得到肽树脂17’;所述的肽树脂17为
Fmoc-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(R3)-Gly-Asp(R4)-Phe-Glu(R5)-Glu(R6)-Ile-Pro-
Glu(R7)-Glu(R8)-Tyr(R9)-Leu-R10;所述的肽树脂17’为
H-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(R3)-Gly-Asp(R4)-Phe-Glu(R5)-Glu(R6)-Ile-Pro-Glu
(R7)-Glu(R8)-Tyr(R9)-Leu-R10;
步骤2,在非质子极性溶剂中,缩合剂和催化剂存在的条件下,将步骤
1中制得的肽树脂17’与Fmoc-Arg(R2)-OH进行缩合反应,得到肽树脂18;
所述的肽树脂18为
Fmoc-Arg(R2)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(R3)-Gly-Asp(R4)-Phe-Glu(R5)-Glu(R6)
-Ile-Pro-Glu(R7)-Glu(R8)-Tyr(R9)-Leu-R10;
其中,R2为胍基保护基;R3为酰胺保护基;R4、R5、R6、R7和R8各自
独立的为羧基保护基;R9为酚羟基保护基;Leu-R10为Trityl-Cl类型树脂或
羟基类型树脂与亮氨酸中的羧基缩合后的基团;
步骤1或步骤2中,所述的非质子极性溶剂为N,N-二甲基甲酰胺和二氯
甲烷的混合溶剂。
2.如权利要求1所述的肽树脂18的固相合成方法,其特征在于:
所述的R2为2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基、4-甲氧基-2,3,6-
三甲基苯磺酰基或2,2,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基;
和/或,
所述的R3为三苯甲基、2,4,6-三甲氧基苄基或4-甲基三苯甲基;
和/或,
所述的R4、R5、R6、R7和R8各自独立的为叔丁基或金刚烷基;
和/或,
所述的R9为叔丁基或2-氯三...
【专利技术属性】
技术研发人员:江锡铭,丁金国,黄臻辉,
申请(专利权)人:上海第一生化药业有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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