本发明专利技术提供了一种咔唑类的比率型pH荧光探针及其制备方法，以及该探针的应用，属于pH荧光探针领域。其制备方法是：将3-甲酰基-N-乙基咔唑和2-甲基苯并噻吩加入一定比例的二甲基亚砜和50％NaOH的混合溶液中微热使其溶解，再用微波辐射，抽滤得粗产品，粗产品用乙醇重结晶得到纯品。该探针对H+显示了高的灵敏性、选择性、可逆性和稳定性。通过结合激光共聚焦扫描显微技术，还可获取该新型荧光分子探针在活细胞内的荧光成像。与现有的pH响应荧光分子探针相比，本发明专利技术制备方法简单，Stocks位移值大。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及荧光探针，尤其涉及一种咔唑类的比率型pH荧光探针及其制备方法 和应用。
技术介绍
细胞内PHi在包括细胞循环调控、细胞的生长和凋亡、离子转运、酶活性、钙调控、 肌肉收缩和多要耐药性等方面起着关键性的作用。PH i值异常会引起细胞的功能紊乱以及 一些常见疾病，如癌症和阿尔茨海默症。因此，检测细胞器的pH/变化对于从分子水平上研 宄细胞的生理和病理过程具有非常重要的意义。相较于微电极、NMR、和紫外吸收光谱法等 PH检测方法，荧光光谱检测技术具有分辨率高、灵敏度高、操作简便、非破坏性等特点，且基 于荧光探针与氢离子作用引起的荧光信号变化的传感、荧光显微成像的荧光光谱法显示出 独特的时间和空间上的优势，成为分子水平上实时原位监测细胞内PH i的重要手段。 近几年来，咔唑及其衍生物由于其巨大的共轭系统和活跃的分子内电荷转移，被 广泛用作荧光团来构造 ICT荧光探针以获得一个大的Stocks位移。本专利技术制备了一种咔 唑类衍生物ECBT作为荧光探针，用于pH响应荧光检测。与现有技术相比，本专利技术的荧光探 针制备方法只需一步完成，且反应条件简单；将该荧光探针用于PH的检测可获得一个大的 Stocks位移，反应灵敏且具有高度选择性；该荧光探针还可用于生物体内pH的检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种咔唑类PH荧光探针及其制备方法。 本专利技术的另一目的在于提供一种快速响应pH的荧光检测方法，而且这种方法具 有良好的灵敏度、选择性、光稳定性和可逆性。以及这种探针可用于细胞内PH值的检测。 本专利技术提供的一种咔唑类pH荧光探针，是2-(N-乙基咔唑-3-乙烯基）苯并噻唑 (ECBT)，其结构式为：【主权项】1. 一种咔唑类pH荧光探针，特征在于，它是2-(N-乙基咔唑-3-乙烯基）苯并噻唑 (ECBT)，其结构式为：2. 如权利要求1所述的一种咔唑类pH荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步 骤： (1) 在容器中按摩尔比I : 1加入3-甲酰基-N-乙基咔唑和2-甲基苯并噻吩，再加 入体积比10 : 3的二甲基亚砜和50 % NaOH的混合溶液，微热使其溶解后放入微波炉中，用 130W功率微波辐射5min，待冷却后取出； (2) 点板观察确认反应进行彻底后，将其倒入蒸馏水中，搅拌，静置，抽滤，得黄色粗产 品；粗产品用乙醇重结晶得到亮黄色粒状晶体。3. -种快速响应pH的荧光检测方法，其特征在于，步骤为： (1) 用乙腈配制ImM的ECBT荧光探针储备液； (2) 将2mL乙腈/水（1/1，v/v)体系和5 yL荧光探针ECBT储备液加入荧光比色皿中， 在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，496nm处的荧光强度逐渐减弱，583nm处荧 光强度逐渐增强； ⑶用蒸馏水配制IM的H+溶液，将2mL乙腈/水（1/1，v/v)体系和5 μ L荧光探针 ECBT储备液加入荧光比色皿中，进行pH滴定实验；以pH为横坐标，荧光强度F为纵坐标绘 制图并进行Sigmoidal拟合，求得pK a= 1. 76 ;通过线性拟合得到ECBT最佳线性响应范围 为 pHL 5-1. 9，回归方程为：F = 1373. 15-619. 27XpH，线性系数为 R2= 0· 9940。4. 如权利要求1所述的一种咔唑类pH荧光探针用于细胞内pH的检测。【专利摘要】本专利技术提供了一种咔唑类的比率型pH荧光探针及其制备方法，以及该探针的应用，属于pH荧光探针领域。其制备方法是：将3-甲酰基-N-乙基咔唑和2-甲基苯并噻吩加入一定比例的二甲基亚砜和50％NaOH的混合溶液中微热使其溶解，再用微波辐射，抽滤得粗产品，粗产品用乙醇重结晶得到纯品。该探针对H+显示了高的灵敏性、选择性、可逆性和稳定性。通过结合激光共聚焦扫描显微技术，还可获取该新型荧光分子探针在活细胞内的荧光成像。与现有的pH响应荧光分子探针相比，本专利技术制备方法简单，Stocks位移值大。【IPC分类】C07D417-06, G01N21-64, C09K11-06【公开号】CN104531139【申请号】CN201510005165【专利技术人】钞建宾, 孙金鱼, 张永斌, 刘瑜红, 李志清 【申请人】山西大学【公开日】2015年4月22日【申请日】2015年1月6日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种咔唑类pH荧光探针，特征在于，它是2‑(N‑乙基咔唑‑3‑乙烯基)苯并噻唑(ECBT)，其结构式为：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：钞建宾，孙金鱼，张永斌，刘瑜红，李志清，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西;14
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