用于进行结合测定的设备和方法技术

本文公开了用于进行结合测定的组合物、方法、设备和试剂盒。具体而言，本发明专利技术提供了用于插入到多孔装置的孔中的插入物、插入物阵列和包含它们的试剂盒。本文还提供了使用本文公开的各种设备、装置和试剂盒进行结合测定的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本文公开了用于进行结合测定的组合物、方法、设备和试剂盒。具体而言，本专利技术提供了用于插入到多孔装置的孔中的插入物、插入物阵列和包含它们的试剂盒。本文还提供了使用本文公开的各种设备、装置和试剂盒进行结合测定的方法。【专利说明】 夺叉引用 本申请要求提交于2012年5月25日的美国临时申请第61/652, 102号的权益，该 申请通过引用并入于此。
技术介绍
结合测定在生物和临床应用中得到广泛使用，用于检测和测量样品中存在的分析 物的量。结合测定一般要求使用与感兴趣的分析物结合的结合配偶体和与该结合配偶体结 合的检测试剂。在直接结合测定中，结合配偶体偶联至检测试剂，而间接结合测定涉及添加 与结合配偶体相互作用的单独的检测试剂。一种广泛使用的结合测定形式为连接免疫吸附 测定（LISA)，其中结合剂固定在固相上。通常，免疫吸附测定涉及通过将感兴趣的分析物与 结合剂相结合而将该分析物捕捉到固相上。对能够与分析物结合的检测试剂的添加继而导 致检测试剂到固相上的后续捕捉。通常在指示出感兴趣的分析物的存在或量的试剂的检测 之前，在一系列一个或多个洗涤步骤中移除未结合的检测试剂。试剂的检测可以利用酶促 反应（ELISA)或荧光检测（FLISA)。 ELISA和FLISA通常在用于高通量筛选用途的多孔板（诸如96孔反应板）中进 行。使用多孔板和装置使得能够进行对多个样品的并行处理，以供对一种或多种分析物的 分析。例如，通常利用ELISA和FLISA来进行杂交瘤细胞系的抗体筛选。这些筛选测定一 般涉及杂交瘤细胞培养基样品在用感兴趣的抗原包被的96孔板中的温育。在温育之后，必 须在感兴趣的抗体的检测和阳性杂交瘤细胞系的鉴定之前进行涉及与二级和/或三级检 测试剂的另外温育和洗涤步骤的多步过程。然而，这些多步测定是费时的，这限制了检测通 量。减少这些检测所需的步骤并从而减少所需时间量的装置和方法将会大大提高检测通量 和效率。
技术实现思路
因此，本专利技术提供将会允许具有更高通量和效率的更强健的结合测定的设备和方 法。本文提供的是提供此类优点和相关益处的组合物、方法、设备和试剂盒。在一方面，本 专利技术提供了用于插入到多孔装置的孔中的插入物。在一些实施方式中，所述插入物包含基 本上不含微孔的内表面和外表面；其中所述内表面和/或外表面在其上固定有结合剂；其 中所述插入物的尺寸设置为小于所述孔，使得所述插入物可以插入到所述孔中。 在另一实施方式中，所述插入物包含内表面和外表面，其中所述内表面和/或外 表面在其上固定有结合剂，其中所述外表面具有的直径小于所述孔的直径，使得所述插入 物可以插入到所述孔中；其中所述插入物向多孔装置的孔中的插入使得所述孔与所述装置 的相邻孔在光学上隔离。 在实施本专利技术的过程中，任何所述插入物可由不透明的材料制成，它们可以为圆 柱形、中空的，或者可以包含多个空腔。 在相关方面，本专利技术提供了用于插入到多孔装置的多个孔中的插入物阵列。在一 些实施方式中，所述阵列被配置成使得每个单独的插入物被安装在连续的固体框架上，所 述框架的尺寸设置为允许同时向所述多个孔的每个单独的孔中插入和任选地移除每个单 独的插入物，其中所述单独的插入物包含内表面和外表面，该内表面和外表面中的任一个 或两个在其上固定有结合剂，其中该内表面和/或外表面基本上不含微孔。 在备选的实施方式中，所述阵列被配置成使得每个单独的插入物被安装在连续的 固体框架上，所述框架的尺寸设置为允许同时向所述多个孔的每个单独的孔中插入和任选 地移除每个单独的插入物，其中所述单独的插入物包含内表面和外表面，该内表面和外表 面中的任一个或两个在其上固定有结合剂，其中所述单独的插入物向所述单独的孔中的插 入使得所述孔与所述装置上的其他相邻孔在光学上隔离。 在实施本专利技术的过程中，任何所述阵列可被塑造成使得所述框架的尺寸设置为允 许同时向所述多孔装置的每个单独的孔中插入和移除所述每个单独的插入物。 在一些实施方式中，本专利技术的插入物或阵列的结合剂包括蛋白质、抗体、单克隆抗 体、抗原、配体、受体、亲和素、生物素、链霉亲和素或半抗原。 在相关实施方式中，本专利技术提供了具有多个孔的多孔装置，所述多个孔中的至少 一个包含本文所述的插入物，或者所述多个孔包含本文所述的插入物阵列。在进一步的实 施方式中，所述多孔装置具有6、12、24、48、96、384、1536或3456个孔。 相应地，本专利技术还提供了测量孔中液体样品中存在的分析物的方法。在一些实施 方式中，所述方法包括向含有液体样品的孔中加入包含可检测标记的经标记的示踪物以形 成混合物，其中所述孔中包含本专利技术的插入物；使所述分析物和所述结合剂竞争所述示踪 物的结合一段充足的时间，以实现复合物的形成，该复合物包含在混合物中的该示踪物以 及该分析物或该结合剂中之一，其中所述竞争导致第一量的所述可检测标记保留在所述混 合物中而第二量的所述可检测标记被隔离（sequestered)到所述插入物的内表面和/或外 表面上；以及测量所述孔中保留在所述混合物中的所述可检测标记的所述第一量，其中所 述第一量与存在于该混合物中的所述分析物的量成比例。 在其他实施方式中，所述方法包括向含有液体样品的孔中加入经标记的示踪物以 形成混合物，其中所述孔中包含本专利技术的插入物；使得在所述插入物的内表面和/或外表 面上形成复合物，其中该复合物包含（1)与所述分析物上的第一结合位点结合的经标记的 示踪物，和（2)与同一分析物上的第二结合位点结合的结合剂，其中所述形成导致第一量 的所述可检测标记保留在所述混合物中而第二量的所述可检测标记被隔离到所述插入物 的内表面和/或外表面上；以及测量所述孔中保留在所述混合物中的所述可检测标记的所 述第一量，其中所述第一量与存在于该混合物中的所述分析物的量成反比。 在其他实施方式中，所述方法包括向含有液体样品的孔中加入包含可检测标记的 经标记的示踪物以形成混合物，其中所述孔中包含本专利技术的插入物；使所述分析物和所述 结合剂竞争所述示踪物的结合一段充足的时间，以实现复合物的形成，该复合物包含在混 合物中的该示踪物以及该分析物或该结合剂中之一，其中所述竞争导致第一量的所述可检 测标记保留在所述混合物中而第二量的所述可检测标记被隔离到所述插入物的内表面和/ 或外表面上；以及测量被隔离到所述插入物的内表面和/或外表面上的所述可检测标记的 所述第二量，其中所述第二量与存在于该混合物中的所述分析物的量成反比。 在其他实施方式中，所述方法包括向含有液体样品的孔中加入包含可检测标记的 经标记的示踪物以形成混合物，其中所述孔中包含本专利技术的插入物；使得在所述插入物的 内表面和/或外表面上形成复合物，其中该复合物包含（1)与所述分析物上的第一结合位 点结合的经标记的示踪物，和（2)与同一分析物上的第二结合位点结合的结合剂，所述形 成导致第一量的所述可检测标记保留在所述混合物中而第二量的所述可检测标记被隔离 到所述插入物的内表面和/或外表面上；以及测量被隔离到所述插入物的内表面和/或外 表面上的所述可检测标记的所述第二量，其中所述第二量与存在于该混合物中的所述分析 物的量成比例。 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于插入到多孔装置的孔中的插入物，所述插入物包含基本上不含微孔的内表面和外表面；其中所述内表面和/或外表面在其上固定有结合剂；其中所述插入物的尺寸设置为小于所述孔，使得所述插入物可以插入到所述孔中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：李荣皓，
申请(专利权)人：珠海恺瑞生物科技有限公司中国，
类型：发明
国别省市：广东;44