本发明专利技术公开了一种电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器的制备方法，属于新型纳米功能材料和生物传感器领域。本发明专利技术首先在二氧化钛纳米颗粒基底上，利用光电化学合成方法，直接在电极上合成了二氧化钛-贵金属复合材料，进而制得了成本低、灵敏度高、特异性好、检测快速、制备简单的检测胃癌肿瘤标志物的电化学无标记免疫传感器。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，属于新型纳米功能材料和生物传感器领域。本专利技术首先在二氧化钛纳米颗粒基底上，利用光电化学合成方法，直接在电极上合成了二氧化钛-贵金属复合材料，进而制得了成本低、灵敏度高、特异性好、检测快速、制备简单的检测胃癌肿瘤标志物的电化学无标记免疫传感器。【专利说明】-种电化学胃癌肿瘤标志物无标巧免疫传感器的制备方法
本专利技术设及一种用于检测胃癌肿瘤标志物的电化学无标记免疫传感器的制备方 法。属于新型纳米功能材料与生物传感器
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技术介绍
电化学免疫传感器由于其灵敏度高、特异性好、操作简便等优点被广泛应用于临 床分析和环境检测领域，一般可分为有标记和无标记两种，由于标记物的特性，前者比后者 对检测环境要求更严格，操作也相对繁琐，因此无标记电化学免疫传感器具有更广阔的应 用前景。构建无标记电化学免疫传感器，关键的技术是提高修饰电极对抗体的固定量和对 测试底液的信号响应速度和大小。二氧化铁纳米粒子Ti化NPs是一种光敏材料，在光照条 件下，会导致电子-空穴对进行分离，进而具有一定的氧化还原性。本专利技术，利用Ti化NPs 的该一特性，直接在电极上实现了核壳结构的金银钮合金纳米椿材料Au@Ag-Pd NDRs，使之 与Ti〇2 NPs的复合材料共同修饰的电极，一方面增加了电极比表面积，增强电极导电能力， 另一方面二者可W产生协同催化作用，更大的增强对过氧化氨溶液&化的催化响应速度和 电流响应信号大小。由此，成功的专利技术了无标记电化学免疫传感器的制备方法。 胃癌肿瘤标志物的检测可反映胃癌的生物学特性，对胃癌患者的早期发现、临床 治疗及诊断的具有重要意义。目前，检测胃癌肿瘤标志物的方法主要有酶联免疫法、放射免 疫法、气相色谱-质谱联用法等。该些方法操作复杂，而且化验人员需要专业培训后才能进 行检测。因此，研发灵敏度高、特异性强、检测速度快的胃癌肿瘤标志物传感器具有重要意 义。 应用电化学免疫传感器检测胃癌肿瘤标志物的研究正处于上升态势，但一般都需 要对电极进行多层修饰，操作相对繁琐。因此，开发一种既制备简单、又能快速灵敏检测胃 癌肿瘤标志物的无标记电化学免疫传感器，将具有广阔的应用前景和重要的科学意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种制备简单、灵敏度高、检测快速、特异性强的可用于胃 癌肿瘤标志物检测的电化学无标记免疫传感器的制备方法，所制备的传感器，可用于胃癌 肿瘤标志物的快速、灵敏检测。基于此目的，本专利技术先后使用二氧化铁纳米粒子溶胶Ti化 NPs和金银纳米椿溶胶Au@Ag NRs对电极进行修饰，然后利用光电化学合成方法，在电极上 直接快速地制备了 Au@Ag-Pd NDRs，为更好的形成增强电极的电子响应速度和稳定性等性 能，在电极上滴加硫堇溶液TH和壳聚糖溶液C服并成膜，利用邸C/N服的交联作用固定胃 癌肿瘤标志物抗体，在进行检测时，利用抗体与抗原的特异性定量结合，使得电极对&化的 电流响应信号相应降低，从而实现了采用无标记的电化学方法检测胃癌肿瘤标志物的免疫 传感器的构建。 本专利技术采用的技术方案如下： 1. ，其特征在于，制备步骤 为： (1) W直径4 mm的玻碳电极为工作电极，在电极表面滴涂5?10 uL二氧化铁纳米粒子 溶胶Ti〇2 NPs，室温下惊干后，滴涂5?10化的金银纳米椿溶胶Au@Ag NRs，并在室温下惊 干； (2) 将步骤（1)中得到的电极超纯水清洗，室温下惊干成膜，表面滴涂5?lOuL 0.01 mol/L的氯钮酸溶液H2PCICI4,立刻使用高压隶灯照射30?90秒，制得Ti〇2 NPs负载的金银 钮合金纳米椿材料Au@Ag-Pd NDRs修饰的工作电极，室温下惊干； (3) 将步骤（2)中得到的电极用超纯水清洗，室温下惊干后，表面滴涂5?10 uL硫堇溶 液TH，室温下惊干； (4) 将步骤（3)中得到的电极用超纯水清洗，表面滴涂5?10 uL壳聚糖溶液C服，室温 下惊干； (5) 将步骤（4)中得到的电极用超纯水清洗后，将电极浸入到邸C/N服溶液中，1小时 后取出； (5) 在电极表面滴涂5?10化10嗦/mL的胃癌肿瘤标志物抗体溶液，4 °C冰箱中保 存惊干； (6) 将步骤（5)中得到的电极用超纯水清洗，继续在电极表面滴涂5?10化100嗦/mL 的牛血清白蛋白BSA溶液，4 °C冰箱中保存惊干，超纯水清洗，4 °C冰箱中惊干成膜，审U 得电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器； 所述的Ti化NPs为Img/mL的二氧化铁纳米粒子水溶液； 所述的Au@Ag NRs为金@银核壳纳米椿与壳聚糖复合材料的水溶液，所述金@银核壳 纳米椿是W椿状金纳米粒子为核、W银纳米粒子为壳层的核壳结构的椿状纳米粒子，所述 椿状纳米粒子的长度为20?50nm ; 所述的^PdCL为抑值为1?2的氯钮酸水溶液； 所述的Au@Ag-Pd NDRs为金银钮合金纳米椿，所述的金银钮合金纳米椿为金@银钮核 壳枝晶状的纳米椿，所述金@银钮核壳枝晶状的纳米椿是W椿状金纳米粒子为核、W枝晶 状银钮合金纳米粒子为壳层的核壳结构的纳米粒子，所述纳米椿的长度为20?50nm ; 所述TH为硫堇的水溶液，所述水溶液中硫堇的浓度为5mmol/L ; 所述CHS为将壳聚糖纯品加入到体积分数为1%的醋酸中制备而成的壳聚糖水溶液； 所述的邸C/N服为1- (3-二甲氨基丙基）-3-己基碳二亚胺盐酸盐邸C和N-哲基了二 酷亚胺N服的混合溶液，所述混合溶液中邸C的浓度为0. Olmol/L，N服的浓度为0. 002mol/ L。 2.本专利技术所述的制备方法所制备的电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器， 所述的电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器应用于胃癌肿瘤标志物的检测，其特征在 于，检测步骤为： (1) 标准溶液配制：配制一组包括空白标样在内的不同浓度的胃癌肿瘤标志物标准溶 液，底液为抑7. 4的磯酸盐缓冲溶液； (2) 工作电极修饰：将本专利技术所述的电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器作为工 作电极，将步骤（1)中配制的不同浓度的胃癌肿瘤标志物标准溶液分别滴涂到工作电极表 面，4 °C冰箱中保存； (3) 工作曲线绘制：将饱和甘隶电极作为参比电极，销丝电极作为辅助电极，与步 骤（2)所修饰好的工作电极组成=电极系统，连接电化学工作站，在电解槽中先后加入 10?25血抑=7. 0?8. 0的PBS缓冲溶液和20uL 3?6 mol/L的&〇2;通过计时电流法检测组 装的工作电极对&〇2的响应；空白标样的响应电流记为/。，含有不同浓度的胃癌肿瘤标志 物标准溶液的响应电流记作马，响应电流降低的差值为A /= /。-马，A /与胃癌肿瘤标志物 标准溶液的质量浓度&间成线性关系，绘制A /-幻C作曲线； (4) 胃癌肿瘤标志物的检测；用待测样品代替步骤（1)中的胃癌肿瘤标志物标准溶液， 按照步骤（2)和（3)中的方法进行检测，根据响应电流降低的差值A巧日工作曲线，得到待 测样品中胃癌肿瘤标志物的含量。 [000引 3.本专利技术所述的电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器的制备方法，其特征 在于所述胃癌肿瘤标志物选自下本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤为：（1）以直径4 mm的玻碳电极为工作电极，在电极表面滴涂5~10 uL 二氧化钛纳米粒子溶胶TiO2 NPs，室温下晾干后，滴涂5~10 µL的金银纳米棒溶胶Au@Ag NRs，并在室温下晾干；（2）将步骤（1）中得到的电极超纯水清洗，室温下晾干成膜，表面滴涂5~10uL 0.01 mol/L 的氯钯酸溶液H2PdCl4，立刻使用高压汞灯照射30~90秒，制得TiO2 NPs负载的金银钯合金纳米棒材料Au@Ag‑Pd NDRs修饰的工作电极，室温下晾干；（3）将步骤（2）中得到的电极用超纯水清洗，室温下晾干后，表面滴涂5~10 uL硫堇溶液TH，室温下晾干；（4）将步骤（3）中得到的电极用超纯水清洗，表面滴涂5~10 uL壳聚糖溶液CHS，室温下晾干；（5）将步骤（4）中得到的电极用超纯水清洗后，将电极浸入到EDC/NHS溶液中，1小时后取出；（5）在电极表面滴涂5~10 µL 10 µg/mL的胃癌肿瘤标志物抗体溶液，4 ℃ 冰箱中保存晾干；（6）将步骤（5）中得到的电极用超纯水清洗，继续在电极表面滴涂5~10µL 100 µg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液，4 ℃ 冰箱中保存晾干，超纯水清洗，4 ℃ 冰箱中晾干成膜，制得电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器；所述的TiO2 NPs为1mg/mL 的二氧化钛纳米粒子水溶液；所述的Au@Ag NRs为金@银核壳纳米棒与壳聚糖复合材料的水溶液，所述金@银核壳纳米棒是以棒状金纳米粒子为核、以银纳米粒子为壳层的核壳结构的棒状纳米粒子，所述棒状纳米粒子的长度为20~50nm；所述的H2PdCl4为pH值为1~2的氯钯酸水溶液；所述的Au@Ag‑Pd NDRs 为金银钯合金纳米棒，所述的金银钯合金纳米棒为金@银钯核壳枝晶状的纳米棒，所述金@银钯核壳枝晶状的纳米棒是以棒状金纳米粒子为核、以枝晶状银钯合金纳米粒子为壳层的核壳结构的纳米粒子，所述纳米棒的长度为20~50nm；所述TH为硫堇的水溶液，所述水溶液中硫堇的浓度为5mmol/L；所述CHS为将壳聚糖纯品加入到体积分数为1% 的醋酸中制备而成的壳聚糖水溶液；所述的EDC/NHS为1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N‑羟基丁二酰亚胺NHS的混合溶液，所述混合溶液中EDC的浓度为0.01mol/L，NHS的浓度为0.002mol/L。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张勇，吴丹，魏琴，杜斌，范大伟，胡丽华，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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