作为血清和组织生化标志物的BAG3制造技术

本公开内容涉及诊断生物学标志物领域。具体地，本公开内容涉及用作诊断病理状态的生物学标志物的抗BAG3抗体。此外，本公开内容包括用于在生物样品中检测和评估抗BAG3抗体或BAG3/抗体复合物的特异性ELISA方法和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本公开内容涉及诊断生物学标志物领域。具体地，本公开内容涉及用作诊断病理状态的生物学标志物的抗BAG3抗体。此外，本公开内容包括用于在生物样品中检测和评估抗BAG3抗体或BAG3/抗体复合物的特异性ELISA方法和试剂盒。【专利说明】作为血清和组织生化标志物的BAG3 说明 本专利技术涉及用作病理状态的诊断中的生化标志物的抗BAG3抗体。 现有技术BAG3(RefSeq:NP_004272 ;基因ID9531)为74kDa的细胞质蛋白，特别是集中在 粗糙型内质网中。BAG3蛋白属于通过称为BAG域的结构域（110-124个氨基酸）与热激蛋 白HSP70的ATPase域相互作用的共分子伴侣（co-chaperones)家族。除了BAG域，BAG3 包括WW域以及可介导与其它蛋白结合的富含脯氨酸的重复（PXXP)。此外，两个保守的 IPV(Ile-Pro-Val)基序位于WW和PXXP区域之间，并介导BAG3结合到分子伴侣HspB家 族的成员HspB8。因此，由于它的多结构域结构的衔接性质，BAG3可与不同的伴侣蛋白相 互作用。bag3基因表达在包括肌细胞的少数正常的细胞类型中和数个原发瘤或肿瘤细胞 系中是组成性的。此外，它可被各种应激源诱导：事实上应激的刺激物激活热激转录因子 (HSF)l，HSF1 负责应激激活的基因包括bag3 的表达（RosatiA，GrazianoV，DeLaurenzi V,PascaleM，TurcoMC.BAG3:amultifacetedproteinthatregulatesmajorcell pathways.CellDeathDis. 2011 ;2:el41)。证据表明，BAG3通过根据细胞的环境以依赖或 不依赖Hsp70的方式调节细胞凋亡调节的蛋白质例如IKKy、Bax或BRAF的水平或定位，具 有维持细胞存活的功能。BAG3蛋白质表现为在心肌成肌细胞分化期间表达，并且维持成肌素的表达。这 些发现表明BAG3参与心脏的后期发育（DeMarcoM，TurcoMC，RosatiA，BAG3protein isinducedduringcardiomyoblastdifferentiationandmodulatesmyogenin expression.CellCycle. 2011 ;10:850-852)。此外，在心肌细胞中，BAG3 已经显示位于 Z-盘，并且与肌动蛋白加帽蛋白CapZ0 1相互作用，稳定肌原纤维结构，并且在机械应激过 程中可能保持肌纤维的完整性。BAG3突变可损害Z-盘的组装，并提高对应激诱导的细胞凋 亡的敏感性。与BAG3在心肌细胞并且通常在肌细胞中的存活和肌纤维的完整性中的作用 一致，bag3基因的突变已经与一些形式的肌纤维肌病和扩张型心肌病相关联。 到目前为止，已经检测到了细胞质BAG3和可溶的串行形式的BAG3二者，并且发现 它们与不同的病理，以及更广泛地与细胞存活相关联。 对允许快速鉴定这样的病理，而不具有以意外的特殊方式以及敏感的方式与创伤 性诊断相关联的缺点，和/或可允许早期检测病理，监测治疗的效果，预测并发症的风险， 进行信息追踪的生物学标志物的鉴定日益感到需求及重要性。 专利技术概述 本专利技术涉及用作病理状态的诊断中的生化标志物的抗BAG-3抗体。 优选地，所述抗BAG-3抗体结合到可溶的BAG3以形成免疫复合物。 根据本专利技术优选的实施方式，所述诊断是体外的（invitro)或离体的（exvivo)。 本专利技术的另一方面为，所述诊断的接受者为哺乳动物，优选人类。 如在本专利技术的详细说明中进一步描述的，本专利技术的抗BAG-3抗体的用途具有对选 自由心脏病，癌症，糖尿病，皮肤、神经、骨、血管和结缔组织的炎症和炎症相关的疾病组成 的组的病理状态特异性的优点。 根据本专利技术的实施方式，所述心脏病选自：心绞痛、梗塞前心绞痛、心肌梗塞、心力 衰竭、局部缺血（ischemia)、急性冠心病（acutecoronarydisease)、急性心力衰竭、慢性 心力衰竭和医源性心脏病。 根据本专利技术的另一个实施方式，所述癌症选自：胰腺癌、膀胱癌和前列腺癌。 本专利技术的另一个实施方式为检测生物样品中抗BAG3抗体或结合到可溶的BAG3以 形成免疫复合物的抗BAG3抗体的存在的方法，所述方法包括以下步骤：a.获得生物样品，所述生物样品由血清、血浆、尿或唾液组成，b.确定所述生物样品中抗BAG3抗体或BAG3缔合的抗体（BAG3associated antibodies)的存在。 根据优选的实施方式，本专利技术的方法还包括以下另外的步骤：c.比较从所述生物样品获得的值与参考值或从健康供体获得的值。 在优选的实施方式中，所述确定步骤b通过ELISA试验进行。 根据本专利技术优选的实施方式，所述血清、血浆、尿或唾液来自哺乳动物，优选人类。 根据本专利技术的方法的优选的实施方式，所述抗BAG3抗体或所述免疫复合物的存 在与病理状态相关。 优选地，所述病理状态选自由心脏病，癌症，糖尿病，皮肤、神经、骨、血管和结缔组 织的炎症和炎症相关的疾病组成的组。 优选地，所述心脏病选自：心绞痛、梗塞前心绞痛、心肌梗塞、心力衰竭、局部缺血、 急性冠心病、急性心力衰竭、慢性心力衰竭和医源性心脏病。 根据本专利技术优选的实施方式，所述癌症选自：胰腺癌、膀胱癌和前列腺癌。 本专利技术的另一个实施方式为ELISA试剂盒以及其用于检测生物样品中抗BAG3抗 体或结合到可溶的BAG3以形成免疫复合物的抗BAG3抗体的用途，所述ELISA试剂盒包括 用于捕获可溶的BAG3的BAG3重组蛋白或BAG3特异的小鼠单克隆抗体AC-1、AC-2、AC-3、 AC-4、AC-5、AC_rbla、AC_rblb、AC_rb2a、AC_rb2b、AC_rb3a、AC_rb3b、AC_rb4a和AC_rb4b， 以及能够识别人免疫球蛋白的抗体。 优选地，所述生物样品为血清、血浆、尿或唾液样品。 在本专利技术优选的实施方式中，所述血清、血浆、尿或唾液样品来自哺乳动物，优选 人类。 本专利技术还进一步涉及用于检测生物样品中的BAG3蛋白的免疫组织化学（IHC)试 剂盒，其中，所述生物样品优选为组织样品，所述试剂盒包括BAG3-特异的抗体和试剂，所 述试剂包括染色需要的探针。 附图简述 本专利技术的特征和优点将从下面记录的详述、为了说明而非限制目的给出的实施例 以及附图1-10中明显，其中：图1. 图1A:在来自培养的心肌细胞的上清液中检测BAG3蛋白质。在5%的C02气氛下 于37°C使用或不使用10%的FBS培养80%融合的人（HCMa)和大鼠（H9c2)心肌细胞16个 小时。在包含50mMNaCl和0. 05%IGEPAL的缓冲液中透析所述上清液，冻干，并在lml的RIPA缓冲液（50mMTrisHC1pH7. 6、150mM氯化钠、2mM原钒酸钠、4mMEDTA、10mM焦磷酸 钠、1 %NP-40、0. 1 %脱氧胆酸钠）中重悬，通过蛋白质印迹用抗BAG3抗体或抗GAPDH抗体 分析。 图1B:在胞吐囊泡中检测BAG3蛋白质。从H9c2细胞获得的上清液（Surnatants) 经连续的离心：（i)2'OOOXg15分钟，以去除本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于病理状态的诊断用途的抗BAG‑3抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛丽亚·卡特里纳·图尔科，
申请(专利权)人：比奥尤尼沃萨有限责任公司，
类型：发明
国别省市：意大利;IT