抗IL-6 抗体及其用途制造技术

提供了结合人IL-6的抗体和其抗原结合部分。还提供的是编码此类抗体和抗原结合部分的核酸、制备此类抗体和抗原结合部分的方法、包含此类抗体或抗原结合部分的组合物以及此类抗体或抗原结合部分的用途。

【技术实现步骤摘要】
抗IL-6抗体及其用途 本申请是申请日为2009年6月10日、专利技术名称为抗IL-6抗体及其用途的中 国专利技术专利申请No. 200980119821.4的分案申请。 交叉引用相关专利和专利申请 本申请要求2008年6月18日提交的美国临时专利申请系列案61/073430的权益， 其以其全文通过引用合并入本文。 联合研究协议 本文中的公开内容和权利要求由在PfizerInc.与Medarex，Inc.之间的联合研 究协议的范围内进行的活动产生，所述协议在产生所请求保护的专利技术的日期当天或之前有 效。 背景 本专利技术涉及结合人IL-6的抗体和其抗原结合部分。本专利技术还涉及编码此类抗体 和其抗原结合部分的核酸；制备此类抗体和其抗原结合部分的方法；包含此类抗体或其抗 原结合部分的组合物；以及此类抗体或其抗原结合部分的用途。 也称为干扰素B2(IFNB2)的白细胞介素-6(IL-6)是属于gpl30配体家族并 且由许多细胞类型包括T淋巴细胞、成纤维细胞和单核细胞产生的多效性细胞因子 (pleiotropiccytokine)。IL-6以低水平组成型产生并且易于由感染性刺激物或炎性细胞 因子诱导。IL-6结合特定受体IL-6R(gp80)，所述受体与细胞结合的或可溶性gpl30异二 聚化以形成功能性受体复合物。IL-6与其受体的结合启动了细胞事件，包括JAK-STAT3途 径和ras-介导的MAP激酶信号转导的激活。IL-6可引发不同效应例如B细胞和单核细胞 的增殖和分化、T细胞活化、造血作用、破骨细胞活化、角质形成细胞生长、神经元生长、肝细 胞活化和来自肝细胞的急性期蛋白诱导。IL-6在B细胞异常中起着重要作用，如在系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤和淋巴 组织增殖性疾病中所证实的。类似地，IL-6还牵涉自身免疫和炎性疾病例如类风湿性关节 炎和骨关节炎的发病机制。最近，间接证据表明IL-6与慢性阻塞性肺疾病和2型糖尿病的 胰岛素抗性之间的关联。IL-6在免疫系统中具有促炎和抗炎作用，这表明该细胞因子可能 在调控对疾病的生理应答中起着中心作用。因此，靶向IL-6可潜在地在多种疾病领域提供 治疗益处。 已在许多疾病中观察到IL-6的产生增加，所述疾病包括：阿尔茨海默病、自身免 疫疾病例如类风湿性关节炎、炎症、心肌梗塞、佩吉特病（Paget'sdisease)、骨质疏松症、 肝纤维化、实体瘤（肾细胞癌）、前列腺和膀胱癌、神经癌（neurologicalcancer)和B细胞 恶性肿瘤（例如，卡斯尔曼病（Castleman'sdisease),某些淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血 病和多发性骨髓瘤）。研究已显示，IL-6与许多此类疾病，特别地癌症和类风湿性关节炎的 发病机制相关，从而阻断IL-6应当转化为临床益处。 概述 产生了特异性结合IL-6并且可用作IL-6受体拮抗剂的分离的抗体或其抗原结合 部分，以及包含所述抗体或部分的组合物。 提供了组合物，所述组合物包含（i)抗IL-6抗体的重链和/或轻链、其可变结构 域或其抗原结合部分，或编码它们的核酸分子；和（ii)药学可接受的载体。组合物还可包 含另一种成分例如治疗剂或诊断剂。 还提供了诊断和治疗方法。类似地，提供抗IL-6抗体和其抗原结合部分以制造治 疗炎性和非炎性病症的药剂。 提供了包含所述核酸分子的载体和宿主细胞以及重组产生由所述核酸分子编码 的多肽的方法。 附图概述 图1显示重链和轻链可变区的种系氨基酸序列分别与抗IL-6抗体9C8、9C8N68T T83S和22B5的重链和轻链可变区相比较的比对（对于9C8、9C8N68TT83S和22B5抗体只 显示错配）。⑶R以下划线标示并且错配缺口以井号（poundsign) (#)标示。图2显示对于媒介物和9C8N68TT83SIgG2抗体的总血清C反应蛋白（CRP)，如 通过电化学发光免疫测定法测定的。各点代表来自用0. 5mg/kg和5.Omg/kg媒介物或抗 IL-6抗体9C8N68TT83SIgG2给药的3只食蟹猴（cynomolgusmonkey)的血清CRP的平均 值（土SE)。利用MesoScaleDiscovery(MSD)测量血清CRP。在第0小时的时间点上施用 LPS。 详述 定义和一般抟术 术语抗体与免疫球蛋白同义并且被理解为本领域内通常理解的意义。特别地， 术语抗体不受产生抗体的任何特定方法限制。例如，术语抗体包括，特别地，重组抗体，单克 隆抗体和多克隆抗体。 基本抗体结构单位是四聚体。各四聚体由2个相同的多肽链对组成，各对具有一 个轻链（大约25kDa)和一个重链（大约50-70kDa)。各链的氨基末端部分包含大约 100至120或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。各链的羧基末端部分界定了主 要负责效应子功能的恒定区。人轻链分类为k和：V轻链。重链分类为yS、y、a或 e，并且将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区与 恒定区通过大约12个或更多个氨基酸的J区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸 的D区。 各重链/轻链对的可变区（VH和 ')分别形成抗原结合部位。因此，完整的IgG抗 体，例如，具有2个结合部位。除了在双功能或双特异性抗体中外，两个结合部位是相同的。 重链和轻链的可变区展示通过3个高变区（也称为互补决定区或⑶R)连接相对 保守的构架区（FR)的相同的一般结构。术语可变的是指，可变结构域的某些部分在抗 体之间在序列上差异很大并且用于各特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而可变 性在抗体的整个可变结构域中不是均匀分布的，其集中在CDR中，所述CDR被更高度保守 的FR分隔。来自各对的两条链的CDR通过FR对齐，使得能够结合特定的表位。从N端 至C端，轻链和重链都包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。氨基酸至各结 构域的分配依照KabatSequencesofProteinsofImmunologicalInterest(National InstitutesofHealth,Bethesda,Md. (1987and1991)),或Chothia&LeskJ.Mol. Biol. 196:901-917(1987);Chothia等人Nature342:878-883(1989)(其公开内容通过引 用合并入本文）中的定义。 如本文中所使用的，以编号提及的抗体与从相同编号的杂交瘤获得的单克隆抗体 相同。例如，抗IL-6单克隆抗体9C8是与从杂交瘤9C8或其亚克隆获得的抗体相同的抗体。 术语类似物或多肽类似物表示包含与一些参照氨基酸序列具有大体上的同 一性的区段并且具有与参照氨基酸序列大体上相同的功能或活性的多肽。通常，多肽类似 物相对于参照序列包含一个或多个保守氨基酸置换（或插入或缺失）。类似物可以是至少 20或25个氨基酸长或可以是至少50、60、70、80、90、100、150或200个氨基酸长或更长，并 且通常可与全长多肽一样长。一些实施方案包括与参照氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17个置换的多肽类似物。在一些情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含重链可变(VH)结构域氨基酸序列的分离的人单克隆抗体或其抗原结合部分，所述重链可变结构域氨基酸序列包含选自下列的CDR1、CDR2和CDR3区：a)如SEQ ID NO:5中所示的VHCDR1，如SEQ ID NO:6中所示的VHCDR2和如SEQ ID NO:7中所示的VHCDR3；b)如SEQ ID NO:35中所示的VHCDR1，如SEQ ID NO:6中所示的VHCDR2和如SEQ ID NO:7中所示的VHCDR3；c)如SEQ ID NO:5中所示的VHCDR1，如SEQ ID NO:6中所示的VHCDR2和如SEQ ID NO:41中所示的VHCDR3；d)如SEQ ID NO:5中所示的VHCDR1，如SEQ ID NO:6中所示的VHCDR2和如SEQ ID NO:44中所示的VHCDR3；和e)如SEQ ID NO:5中所示的VHCDR1，如SEQ ID NO:6中所示的VHCDR2和如SEQ ID NO:45中所示的VHCDR3；其中所述抗体特异性结合人IL‑6。

【技术特征摘要】
2008.06.18 US 61/073,430;2009.06.09 US 12/480,9911. 包含重链可变（VH)结构域氨基酸序列的分离的人单克隆抗体或其抗原结合部分，所 述重链可变结构域氨基酸序列包含选自下列的⑶R1、⑶R2和⑶R3区： a) 如SEQ ID N0:5 中所示如 SEQ ID N0:6 中所示和如SEQ ID N0:7 中所示的VHCDR3 ; b) 如 SEQ ID N0:35 中所示如 SEQ ID N0:6 中所示和如 SEQ ID N0:7中所示的VHCDR3 ; c) 如SEQ ID N0:5 中所示如SEQ ID N0:6 中所示的\^：01?2和如SEQ ID N0:41 中所示的VHCDR3 ; d) 如SEQ ID N0:5 中所示如SEQ ID N0:6 中所示的\^：01?2和如SEQ ID N0:44 中所示的VfDR3 ;和 e) 如SEQ ID N0:5 中所示如SEQ ID N0:6 中所示的\^：01?2和如SEQ ID N0:45 中所示的VHCDR3 ; 其中所述抗体特异性结合人IL-6。2. 权利要求1的分离的人抗体或抗原结合部分，其还包含轻链可变（\)结构域氨基 酸序列，所述轻链可变结构域氨基酸序列含有如SEQ ID NO: 16中所示的\CDR1、如SEQ ID NO: 17中所示的'CDR2和如SEQ ID NO: 18中所示的'CDR3。3. 包含轻链可变（VJ结构域氨基酸序列的分离的人抗体或其抗原结合部分，所述轻链 可变结构域氨基酸序列含有如SEQ ID NO: 16中所示的\CDR1，如SEQ ID NO: 17中所示的 'CDR2 和如 SEQ ID NO: 18 中所示的 'CDR3 ; 其中所述抗体特异性结合人IL-6。4. 权利要求2的分离的抗体或其抗原结合部分，其包含：如SEQ ID N0:5中所示的 711〇01?1，如5￡0 10勵:6中所示的￥11〇)1?2，如5￡0 10勵:7中所示的￥11〇)1?3，如5￡0 10勵：16 中所示的八CDR1，如SEQ ID NO: 17中所示的'CDR2和如SEQ ID NO: 18中所示的\CDR3。5. 包含重链可变（VH)结构域氨基酸序列的分离的人单克隆抗体或其抗原结合部分， 所述重链可变结构域氨基酸序列选自SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:29、SEQ ID N0:34、SEQ ID NO: 37 和 SEQ ID NO: 40,或与 SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 37 和SEQ ID N0:40的任一个相异在于具有至少一个保守氨基酸置换，或与SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:29、SEQ ID N0:34、SEQ ID N0:37 和 SEQ ID N0:40 的任一个相异在于具有至少一个 与SEQ ID NO:46相比较的种系氨基酸置换；其中所述抗体特异性结合人IL-6。6. 权利要求5的抗体或其抗原结合部分，其中VH结构域在氨基酸序列上与SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:37 和 SEQ ID NO:40 中的任一个至少 90% 同一。7. 包含轻链可变（VJ结构域氨基酸序列的分离的人单克隆抗体或其抗原结合部分，所 述轻链可变结构域氨基酸序列选自SEQ ID NO: 15,或与SEQ ID NO: 15相异在于具有保守氨 基酸置换，或与SEQ ID N0:15相异在于具有与SEQ ID N0:47相比较的种系氨基酸置换；其 中所述抗体特异性结合人IL-6。8. 权利要求7的抗体或其抗原结合部分，其包含在氨基酸序列上与SEQ ID NO: 15至少 90%同一的'结构域。9. 权利要求5的分离的人单克隆抗体或其抗原结合部分，其还包含轻链可变（VJ结构 域氨基酸序列，所述轻链可变结构域氨基酸序列选自SEQ ID NO: 15,或与SEQ ID NO: 15相 异在于具有保守氨基酸置换，或与SEQ ID NO: 15相异在于具有与它们各自的选自SEQ ID NO:47的种系序列相比较的种系氨基酸置换。10. 包含 '和VH结构域的分离的人单克隆抗体或其抗原结合部分，所述 '和VH结构 域在氨基酸序列上分别与抗体 9C8、9C8 N68T T83S、9C8 E31G N68T T83S、9C8 I24V N68T T83S和22B5的 '和VH结构域至少90%同一；其中所述抗体特异性结合人IL-6。11. 分离的人单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含： a) 至少一个独立地选自从单克隆抗体9C8 IgGl，9C8 IgG2,9C8N68T T83S IgGl，9C8 N68T T83S IgG2,9C8 E31G N68T T83S IgGl，9C8 E31G N68T T83S IgG2,9C8 I24V N68T T83S IgGl，9C8 I24V N68T T83S IgG2和 22B5 IgGl 中选择的抗体的重链的重链CDR1、CDR2 和/或CDR3 ;或 b) 至少一个独立...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·拉吉帕尔，M·德瓦拉贾亚，K·托伊，扬岚，黄海春，J·Z·张，P·布拉姆斯，B·德沃克斯，D·B·帕斯莫尔，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，辉瑞大药厂，
类型：发明
国别省市：美国;US