方法技术

在此披露了Akt3作为一种生物标志物用于检测一位受试者中上皮细胞向间质细胞转化(EMT)的发生的用途以及Akt3抑制剂用以治疗癌症的用途。还披露了用于通过测量Akt3表达和/或活性来检测一位受试者中上皮细胞向间质细胞转化(EMT)的发生的不同方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】 专利
本专利技术涉及药物研发和癌症治疗的领域。具体而言，本专利技术涉及蛋白质激酶的领 域，并且更具体而言涉及对癌症的预后和治疗的。 专利技术背景 Akt Akt (蛋白激酶B)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，已知其涉及于不同的细胞过程 中，包括增殖、运动、生长、葡萄糖稳态、生存和细胞死亡。Akt是PI3K/Akt通路的H个主要 组分（磯脂醜肌醇3-激酶，其枯抗剂PTEN和Akt)之一。在该通路中的组分的突变属于癌 症中最频繁观察到的突变，并且发现于高达70%的乳癌中。在人类中，有H个Akt家族成 员，Akt UAkt 2和Akt3,它们是从不同的基因转录。关于Akt的多数研究公开物提及Aktl 或Akt而没有特别说明哪个家族成员，导致在家族成员之间不加区分的泛-Akt抗体的广泛 使用。H种亚型中，关于Akt3已知最少。事实上，最近的综述文章在乳腺发育和癌症中的 关键信号传导节点，在乳腺上皮细胞中PI3激酶的信号传导下游：在3个Akt中的作用化ey signalling nodes in mammary gland development and cancer. Signalling downstream of PI3 kinase in mammary epithelium:a play in 3 Akts)'，（威肯登（Wickenden) JA 和 沃森（Watson)CJ，《乳癌研究〉〉（Breast Cancer Research) 2010,12,202)中，Akt3 提及仅S 次：一次用W确立其存在，一次用W指出它显现具有在正常乳腺发育中的小作用，并且一次 用W指出它在怀孕和哺乳期间不影响StatSa磯酸化。[000引对于AktU Akt2和Akt3在正常发育中的作用已经在基因敲除小鼠中进行了研 究，掲露了 Aktl对于整体生长是重要的（基因敲除小鼠大体上是健康的，但具有降低的生 长），Akt2主要涉及葡萄糖代谢（基因敲除小鼠正常生长但显示具有膜岛素耐受性），并 且Akt3在脑发育中是重要的（参见，例如达姆勒值ummler)B，亨明斯化emmings)BA，P邸/ Akt亚型在发育与疾病中的生理作用（Physiological roles of P邸/Akt isoforms in development and disease).《生物化学学会学报KBiochem Soc Trans) 2007 :35:231-巧。 Aktl和Akt2的更普遍作用由它们遍及全身的广泛表达表明，而Akt3在脑、肾和也脏中具有 更受限制的表达。 Akt被视为一种用于癌症治疗的受关注祀标，并且Akt抑制单独地或与标准的癌 症化疗剂组合已经被假定为可W降低细胞调亡阔值并优先杀死癌细胞（林黎（Lindley) CW，《医药化学当前论题》（化rr Top Med化em)，10,458, 2010)。最近的综述意图抑制作为 癌症中最常见的突变家族成员的Akt成员关键点Akt2,并且表明Aktl和Akt2的抑制将是 最优的（梅特曼（Mattmann)ME等人用小分子和生物巧惊U抑制Akt;专利格局的历史性观 点和当前状态（Inhibition of Akt with small molecules and biologies !historical perspective and current status of the patent landscape)'，，《关于医疗专利的专家观 点》巧Xpert Opinion on Hierapeutic Patents) ,21，1309,2011)。与其他激酶相比，在此 综述中覆盖的许多化合物对Akt具有弱的选择性并且总体上聚焦于Akt 1。在此综述中评论 的在不同家族成员之间具有选择性的化合物占优势地抑制Aktl和/或Akt2而不是Akt3。 尽管在该文献中占优势地聚焦于Aktl，Akt3过表达已经与若干癌症相关，包括黑 色素瘤（《癌症研究HCancer Res. )200410月1 ;64 (19) :7002-10)和卵巢癌（《癌症发现》 (Cancer Discov. )20121 月 1;2 (1):56-67)。[000引若干专利公开物涉及Akts的用途。 WO 2010/091354化李莫法特癌症研究公司化Lee Moffat Cancer Institute, Inc.))涉及在一位受试者中诊断癌症的，该涉及对酪氨酸176-磯酸 化的AKTl而非AKT3的表达水平进行确定。 US 20120040842(贝克炬aker)，等人）在一个大量基因阵列中列出了 Akt3,该些 基因可W被评估来确定结直肠癌的预后。然而，Akt3未被选作一个优选标志物。 US 20120028264(沙吉（Shaq)等人）在一个大量基因阵列中列出了 Akt3(表3A)， 该些基因的表达水平可W在评估一位受试者中的前列腺癌的可能性中来确定。Akt3的显著 性未被确切提及。 US 20120021983(西西里斯（Tsichlis)等人）涉及通过评估受试者的Akt亚型谱 尤其是Aktl和Akt2的比例，通过将该谱与正常的Akt亚型谱进行比较而对潜在癌症和已 存在癌症的进展进行诊断或预后的。 US 20120003209(翻译基因组学研究院（The Translational Genomics Research Insti化te))涉及用于基于Aktl和Akt2的表达水平鉴别侵入性恶性胶质瘤的和 试剂盒。发现Akt3mRNA表达在非肿瘤性脑标本中是高的而在神经胶质肿瘤中是降低的 []。并且发现Akt3表达在长期存活患者中是显著更高的。 US 8133684(埃伯索尔德（Aebersold)等人）披露了确定前列腺细胞中的雄激素 反应，在长串可能的前列腺癌生物标志物清单中提及Akt3。 上皮细胞-间质细胞转化（EMT) 上皮细胞组织构成身体的四个基底组织类型之一，其余的是结缔组织、肌肉和神 经组织。上皮细胞特征在于形成极化细胞层的趋向连同强的细胞间连接。因此，与其他细 胞类型相比，上皮细胞不能自由移动并且显示很少的迁移。相比之下，间质细胞样细胞（例 女口，成纤维细胞）缺乏强的细胞间连接，并且可W作为单独的细胞移动。它们可W是高度能 动的，并且能够迁移通过细胞外基质。 上皮细胞-间质细胞转化（EMT)是一种天然细胞程序，其中个别上皮细胞失去上 皮细胞的基因表达模式和行为特征，而取而代之开始看起来为、行动为典型间质细胞并且 表达为间质细胞的典型基因。在此过程中它们失去粘附性和顶端-基底极性，并且获得迁 移并侵入细胞外基质的能力。EMT不是不可逆的。称为间质细胞-上皮细胞转化（MET)的 错误过程导致间质细胞特征的丢失W及细胞-细胞粘附和顶端-基底极性的重新建立。 EMT在胚胎发育过程中尤其重要。它在原肠胚形成中发挥着至关重要的作用，在原 肠胚形成中由单一上皮细胞层组成的胚胎发育成具有H层经典胚层即外胚层、中胚层和内 胚层。在脊椎动物发育中略微晚期中，EMT产生神经晴细胞。该些细胞迁移通过胚，并且产 生许多不同的结构，包括周围神经系统的神经节、骨W及脸和头的软骨、色素细胞W及神经 胶质细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴别患有Akt3相关病症的受试者的方法，该方法包括评估该受试者中或一个衍生自该受试者的样品中的Akt3的表达或活性的水平。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.05.02 GB 1207722.8;2012.05.02 US 61/641,5121. 一种鉴别患有Akt3相关病症的受试者的方法，该方法包括评估该受试者中或一个 衍生自该受试者的样品中的Akt3的表达或活性的水平。2. 根据权利要求1所述的方法，该方法鉴别具有发展转移性或耐药性癌症的特定风险 的一位受试者，该方法包括评估该受试者中或一个衍生自该受试者的样品中的Akt3的表 达或活性的水平，增加的Akt3表达或活性的水平指示该受试者发展转移性或耐药性癌症 的增加的风险。3. 根据权利要求1所述的方法，该方法鉴别一位受试者中癌症干细胞的存在，该方法 包括确定该受试者中或一个衍生自该受试者的样品中的Akt3表达或活性的水平，增加的 Akt3的表达或活性指示癌症干细胞（CSC)的存在。4. 根据权利要求1所述的方法，该方法鉴别经受上皮细胞向间质细胞转化（EMT)的一 位受试者，该方法包括确定该受试者中或一个衍生自该受试者的样品中的Akt3表达或活 性的水平，Akt3的表达或活性的增加指示EMT的发生。5. -种对一位受试者中的癌症相关结果进行预后的方法，该方法包括评估该受试者中 或一个衍生自该受试者的样品中的Akt3活性或表达。6. 根据权利要求5所述的方法，其中相对于一个对照样品，Akt3活性或表达的增加指 示出对用一种能够抑制或逆转EMT的药剂进行的治疗的敏感性。7. 根据权利要求6所述的方法，其中该药剂是一种Akt3抑制剂或一种Axl抑制剂。8. -种鉴别Axl活性的方法，该方法包括确定该受试者中或一个衍生自该受试者的样 品中的Akt3的表达或活性的水平，增加的Akt3的表达或活性与Axl活性相关。9. 根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中该受试者是哺乳动物。10. 根据权利要求9所述的方法，其中该受试者是人类。11. 根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中该受试者或衍生自该受试者的样 品中的表达或活性的水平是相对于一个对照样品确定的。12. 根据权利要求1至11中任一项所述的方法，进一步包括评估该受试者中或一个衍 生自该受试者的样品中的Akt2的表达或活性的水平，其中降低的Akt2表达或活性的水平 指示： (i) 该受试者患有一种Akt3相关病症； (ii) 发展转移性或耐药性癌症的增加的风险； (iii) 一种癌症干细胞的存在；和/或 (iv) EMT的发生。13. 根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中确定Akt3而非Aktl和/或Akt2 的表达。14. 根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中Akt3的表达水平是通过相对于一 个对照样品而言确定编码Akt3的基因的拷贝数来进行评估，其中该拷贝数的增加指示增 加的Akt3表达水平。15. 根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中Akt3的表达水平是通过确定Akt3 蛋白质或mRNA的水平来评估的。16. 根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中Akt3活性是通过确定Akt3的磷 酸化来评估的，其中Akt3的磷酸化指示活性Akt3。17. 根据权利要求16所述的方法，其中Akt3磷酸化确定为在丝氨酸472处。18. 根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中Akt3活性是通过确定Akt3蛋白 质的细胞内定位来评估的，其中在细胞核中的定位指示活性Akt3。19. 一种选择患者优选人类患者以便治疗一种Akt3相关病症的方法，该方法包括鉴别 具有升高的Akt3活性或表达的患者，并且选择由此鉴别的患者用于治疗。20. 根据权利要求19所述的选择患者的方法，其中该Akt3相关病症是癌症。21. 根据权利要求19或20中任一项所述的方法，其中根据权利要求1至18中任一项 所述的方法鉴别该患者。22. 根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中该治疗包括给予一种能够抑制或 逆转EMT的药剂。23. 根据权利要求22所述的方法，其中该药剂包括一种Akt3抑制剂或一种Axl抑制 剂。24. 根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中该癌症或Akt3相关病症是一种选 自乳癌、黑色素瘤、前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌、肺癌或神经胶质瘤的癌症。25. -种用于在Akt3相关病症的治疗中使用的Akt3抑制剂。26. 根据权利要求25所述的Akt3抑制剂，其中该病症是癌症。27. -种用于在EMT的抑制中使用的Akt3抑制剂。28. -种能够抑制Akt3活性的化合物，用于在一位患有癌症的受试者中预防、抑制、或 治疗耐药性，该方法包括使该受试者接触一种能够抑制Akt3活性的化合物。29. 根据权利要求25至28中任一项所述的Akt3抑制剂，与另一种治疗剂相组合。30. -种治疗一位患有Akt3相关病症的受试者的方法，该方法包括使该受试者接触一 种Akt3抑制剂或药物化合物，该Akt3抑制剂或药物化合物被选择作为或衍生自一种通过 根据权利要求42至46中任一项所述的方法获得的候选化合物。31. 根据权利要求30所述的治疗一位患有Akt3相关病症的受试者的方法，该方法包括 定期地评估该受试者中的Akt3活性。32. 根据权利要求30或31所述的方法，其中该Akt3相关病症是癌症。33. 根据权利要求30、31或32所述的方法，其中该受试者的治疗是根据Akt3活性的检 测水平调整的。34. 根据权利要求30至33中任一项所述的方法，其中该受试者正用一种Axl抑制剂治 疗。35. -种抑制一位受试者中的EMT的方法，该方法包括使该受试者接触一种能够抑制 Akt3活性的化合物。36. -种抑制一位受试者中的癌症干细胞的方法，该方法包括使该受试者接触一种能 够抑制Akt3活性的化合物。37. 根据权利要求30至36中任一项所述的方法，其中该受试者还接触另一种癌症治疗 剂。38. -种预防或抑制一位患有癌症的受试者中的耐药性的方法，该方法包括使该受试 者接触一种能够抑制Akt3活性的化合物。39. 根据权利要求30至38中任一项所述的方法，其中该受试者是哺乳动物。40. 根据权利要求39所述的方法，其中该受试者是人类。41. 根据权利要求25至29中任一项所述的Akt3抑制剂，或根据权利要求37至40 中任一项所述的治疗方法，其中该另一种治疗剂是一种选自以下项的癌症治疗：烷化剂， 包括烷基磺酸盐例如白消安，氮芥例如苯丁酸氮芥、环磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、二氯 甲基二乙胺、美法仑、以及乌拉莫司汀，乙烯亚胺衍生物例如噻替派，亚硝基脲例如卡莫司 汀、洛莫司汀、以及链佐星，三氮烯例如达卡巴嗪、丙卡巴肼、以及替莫唑胺，钼化合物例如 顺钼、卡钼、奥沙利钼、赛特钼、以及吡钼奥纳钼、四钼、螺钼、异丙钼、氯代（二亚乙基二氨 基）_钼（II)氯化物、二氯（亚乙基二氨基）-钼（II)、二氨基（2-乙基丙二酸根）合钼 (II)、（1，2_二氨基环己烧）丙二酸根合钼（II)、（4-羧基酞）-(1,2-二氨基环己烧）合 钼（II)、（1，2_二氨基环己烷）-(异柠檬酸根）合钼（II)、以及（1，2_二氨基环己烷）-顺 式-(丙酮酸根）合钼（II);抗代谢物，包括叶酸拮抗物例如甲氨喋呤、普美曲塞、雷替曲 塞、以及三甲曲沙，啼陡类似物例如阿扎胞苷、卡培他滨、阿糖胞苷、依达曲沙、氟尿苷、氟尿 嘧啶、吉西他滨、以及曲沙他滨，以及嘌呤类似物例如克拉屈滨、氯脱氧腺苷、克罗拉滨、氟 达拉滨、巯基嘌呤、喷司他丁、以及硫鸟嘌呤；天然产物，包括抗肿瘤抗生素例如博来霉素、 更生霉素、光辉霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、泊非罗霉素、以及蒽环类，如道诺霉素、多柔比 星、表柔比星、伊达比星、以及戊柔比星，有丝分裂抑制剂例如长春花生物碱长春花碱、文韦 西尔、长春新碱、长春地辛、以及长春瑞滨，酶例如L-天冬酰胺酶和PEG-L-天冬酰胺酶，微 管聚合物稳定剂例如紫杉烷紫杉醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：J洛伦斯，C蒂隆，
申请(专利权)人：卑尔根生物股份公司，
类型：发明
国别省市：挪威;NO