本发明专利技术提供了组合物和试剂盒，其包含至少一种编码突变体ChR2蛋白的核酸或多肽分子。本发明专利技术的方法包括对受试者施用包含突变体ChR2的组合物以保护，改善，或恢复光转导。优选地，对具有受损视觉的受试者提供本发明专利技术的组合物和方法，由此将视觉恢复到正常水平。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通道视蛋白-2(Ch〇P2)突变的鉴定及使用方法 相关申请 本申请要求2012年3月5日提交的美国临时申请No. 61/606, 663的优先权和权 益，其内容完整并入本文。 政府支持 本专利技术是在国立健康研究所/国立眼科研究所拨款NIH EY 17130下得到美国政 府支持进行的。政府具有本专利技术的某些权利。 专利
-般而言，本专利技术涉及分子生物学领域。鉴定了通道视蛋 白-2(Channel〇psin-2，Ch 〇p2)基因中的突变。在治疗方法中使用包含突变体Chop2基因 的组合物以改善和恢复视觉丧失。 专利技术背景 视网膜由光感受器（或光感受器细胞，杆和锥体）组成。光感受器是高度特化的 神经元，该神经元负责光转导，或光（为电磁辐射形式）转化成电和化学信号，其在视觉系 统内传播事件级联，最终产生我们世界的画像。 光感受器丧失或变性若不完全抑制也是严重危及视网膜内视觉信息的光转导。光 感受器细胞的丧失和/或光感受器细胞功能的丧失是降低的视觉敏锐度，降低的光敏感 性，和盲的主要原因。本领域中长期需要恢复经历视觉丧失的受试者的视网膜的光敏感性 的组合物和方法。 专利技术概述 本专利技术提供了对恢复和/或提高光感受器细胞的光敏感性的方法的长期需要的 解决方法，其通过表达通道视蛋白-2 (Chop2)基因的有利突变，和/或其组合，随后提供基 于通道视蛋白_2(Chop2)的基因疗法的方法进行。 基于通道视蛋白_2(Chop2)的基因疗法提供了用于恢复光感受器变性后视黄醛 光敏感性的卓越策略。Chop2基因的蛋白质产物在与光可异构化发色团全反式视黄醛结合 时形成功能性光门控通道，称作通道视紫红质-2 (ChR2, channelrhodopsin-2)。天然ChR2 显示较低的光敏感性。最近，报告了两种突变体ChR2,即L132C和T159C显著提高其光敏感 性（Kleinlogel 等（2011)Nat Neurosci. 14:513-8 ;Berndt 等（2011)Proc Natl Acad Sci USA. 108:7595-600 ;Prigge 等（2012) J Biol Chem. 287(38)3104:12;每篇的内容完整并入 本文）。检查这两种ChR2突变体（即L132C和T159C)的特性，并且与多种在这两个位点处 的双重突变体比较以鉴定治疗方法的合适候选物。为了恢复视觉，对有此需要的受试者提 供包含这些中一种或多种突变的组合物。具体地，将Chop2基因中的期望突变引入细胞和 /或整合到细胞的基因组DNA中以改善或恢复视觉。Chop2基因中引入细胞以改善或恢复 视觉的期望突变也可以保持为附加体的，尚未整合到基因组DNA中。 Chop2的L132或T159氨基酸位置处的突变（且因此所得的ChR2)显著降低引发 ChR2介导的光电流需要的阈值光强度。氨基酸位置L132和T159处的双重突变体进一步 提高低光强度时的光电流，其超过任一种相应单突变的。表达L132和T159位置处的双重 突变体的视网膜神经节细胞可以响应适合于恢复有用视觉的光强度，其落入正常户外光照 条件的范围内，但是应当仍然维持足够的，且高的时间分辨率（temporal resolution)。因 此，形成具有改善的光敏感性的突变体ChR2的本专利技术突变体Chop2蛋白单独或组合使用以 恢复或改善视觉。 具体地，本专利技术提供了分离的多肽分子，其包含或组成为（consisting of) SEQ ID NO: 26,其中SEQ ID NO: 26的第132位氨基酸不是亮氨酸（L)。在分离的多肽分子的某些实 施方案中，所述第132位氨基酸是半胱氨酸（C)或丙氨酸（A)。在第132位氨基酸是半胱 氨酸（C)时，多肽分子可以包含或组成为SEQ ID NO: 13。在第132位氨基酸是丙氨酸（A) 时，多肽分子可以包含或组成为SEQ ID N0:20。 本专利技术提供了分离的多肽分子，其包含或组成为SEQ ID NO:26,其中SEQ ID NO: 26的第159位氨基酸不是苏氨酸（T)。在分离的多肽分子的某些实施方案中，第159位 氨基酸是半胱氨酸（C)，丝氨酸（S)，或丙氨酸（A)。在第159位氨基酸是半胱氨酸（C)时， 多肽分子可以包含或组成为SEQ ID NO: 14。在第159位氨基酸是丝氨酸（S)时，多肽分子 可以包含或组成为SEQ ID NO: 17。在第159位氨基酸是丙氨酸（A)时，多肽分子可以包含 或组成为SEQ ID NO:23。 本专利技术提供了分离的多肽分子，其包含或组成为SEQ ID NO:26,其中SEQ ID NO: 26的第132位氨基酸不是亮氨酸（L)，且第159位氨基酸不是苏氨酸（T)。在分离的多 肽分子的某些实施方案中，所述分离的多肽分子包含或组成为SEQ ID N0:26,其中SEQ ID NO: 26的第132位氨基酸不是亮氨酸（L)，且第159位氨基酸不是苏氨酸（T)，第132位氨基 酸是半胱氨酸（C)，且第159位氨基酸是半胱氨酸（C)。在此分离的多肽分子的优选的实施 方案中，多肽分子包含或组成为SEQ ID NO: 16。本专利技术提供了编码分离的多肽的分离的核 酸分子，所述分离的多肽包含或组成为SEQ ID NO: 16。优选地，编码包含或组成为SEQ ID NO: 16的分离的多肽的分离的核酸分子是包含或组成为SEQ ID NO: 15的核酸分子。 在分离的多肽分子的某些实施方案中，所述分离的多肽分子包含或组成为SEQ ID NO: 26,其中SEQ ID NO: 26的第132位氨基酸不是亮氨酸（L)，且第159位氨基酸不是苏氨 酸（T)，第132位氨基酸是半胱氨酸（C)，且第159位氨基酸是丝氨酸（S)。分离的多肽分子 可以包含或组成为SEQ ID NO: 19,所述分离的多肽分子包含或组成为SEQ ID NO:26,其中 SEQ ID NO: 26的第132位氨基酸不是亮氨酸（L)，且第159位氨基酸不是苏氨酸（T)。或者 /另外，分离的多肽分子可以包含或组成为SEQ ID N0:19,所述分离的多肽分子包含或组成 为SEQ ID NO: 26,其中SEQ ID NO: 26的第132位氨基酸不是亮氨酸（L)，且第159位氨基 酸不是苏氨酸（T)，其中第132位氨基酸是半胱氨酸（C)，且其中第159位氨基酸是丝氨酸 (S)。本专利技术提供了编码分离的多肽的分离的核酸分子，所述分离的多肽包含或组成为SEQ ID NO: 19。优选地，核酸分子包含或组成为SEQ ID NO: 18。 在分离的多肽分子的某些实施方案中，所述分离的多肽分子包含或组成为SEQ ID NO:26,其中SEQ ID NO:26的第132位氨基酸不是亮氨酸（L)且第159位氨基酸不是苏氨 酸（T)，第132位氨基酸是丙氨酸（A)且第159位氨基酸是半胱氨酸（C)。分离的多肽分子 可以包含或组成为SEQ ID N0:22,所述分离的多肽分子包含或组成为SEQ ID N0:26,其中 SEQ ID NO: 26的第132位氨基酸不是亮氨酸（L)且第159位氨基酸不是苏氨酸（T)。或者 /另外，分离的多肽分子可以包含或组成为SE本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的多肽分子，其包含SEQ ID NO:26，其中SEQ ID NO:26的第132位氨基酸不是亮氨酸(L)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.03.05 US 61/606,6631. 一种分离的多肽分子，其包含SEQ ID NO: 26,其中SEQ ID NO: 26的第132位氨基酸 不是亮氨酸（L)。2. 权利要求1的多肽分子，其中所述第132位氨基酸是半胱氨酸（C)或丙氨酸（A)。3. 权利要求2的多肽分子，其中所述第132位氨基酸是半胱氨酸（C)，且其中所述多肽 分子包含SEQ ID NO: 13。4. 权利要求2的多肽分子，其中所述第132位氨基酸是丙氨酸（A)，且其中所述多肽分 子包含 SEQ ID NO:20。5. -种分离的多肽分子，其包含SEQ ID NO: 26,其中SEQ ID NO: 26的第159位氨基酸 不是苏氨酸（T)。6. 权利要求5的多肽分子，其中所述第159位氨基酸是半胱氨酸（C)，丝氨酸（S)，或丙 氨酸（A)。7. 权利要求6的多肽分子，其中所述第159位氨基酸是半胱氨酸（C)，且其中所述多肽 分子包含SEQ ID NO: 14。8. 权利要求6的多肽分子，其中所述第159位氨基酸是丝氨酸（S)，且其中所述多肽分 子包含 SEQ ID NO: 17。9. 权利要求6的多肽分子，其中所述第159位氨基酸是丙氨酸（A)，且其中所述多肽分 子包含 SEQ ID NO:23。10. -种分离的多肽分子，其包含SEQ ID NO:26,其中SEQ ID NO:26的第132位氨基 酸不是亮氨酸（L)且所述第159位氨基酸不是苏氨酸（T)。11. 权利要求10的多肽分子，其中所述第132位氨基酸是半胱氨酸（C)，其中所述第 159位氨基酸是半胱氨酸（C)。12. 权利要求10或11的多肽分子，其中所述多肽分子包含SEQ ID NO: 16。13. -种分尚的核酸分子，其编码权利要求12的分尚的多肽。14. 权利要求13的核酸分子，其中所述核酸分子包含SEQ ID NO: 15。15. 权利要求10的多肽分子，其中所述第132位氨基酸是半胱氨酸（C)，其中所述第 159位氨基酸是丝氨酸（S)。16. 权利要求10或15的多肽分子，其中所述多肽分子包含SEQ ID NO: 19。17. -种分尚的核酸分子，其编码权利要求16的分尚的多肽。18. 权利要求17的核酸分子，其中所述核酸分子包含SEQ ID NO: 18。19. 权利要求10的多肽分子，其中所述第132位氨基酸是丙氨酸（A)，其中所述第159 位氨基酸是半胱氨酸（C)。20. 权利要求10或19的多肽分子，其中所述多肽分子包含SEQ ID NO:22。21. -种分尚的核酸分子，其编码权利要求22的分尚的多肽。22. 权利要求21的核酸分子，其中所述核酸分子包含SEQ ID N0:21。23. 权利要求10的多肽分子，其中所述第132位氨基酸是半胱氨酸（C)，其中所述第 159位氨基酸是丙氨酸（A)。24. 权利要求10或23的多肽分子，其中所述多肽分子包含SEQ ID NO:25。25. -种分尚的核酸分子，其编码权利要求24的分尚的多肽。26. 权利要求25的核酸分子，其中所述核酸分子包含SEQ ID NO:24。27. -种分离的核酸分子，其编码权利要求1，3,4,5,6,7,8,9,10,11，15,16,19,20， 23,和24中任一项...
【专利技术属性】
技术研发人员：Zh潘，
申请(专利权)人：韦恩州立大学，
类型：发明
国别省市：美国;US
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